杜娟娟，劉夢婷，李飛

(南京師范大學泰州學院化學與生物工程學院，江蘇泰州225300)

豬苓是一種藥用真菌，其性平味甘，具有利水滲濕、祛痰解毒的功能［1］，而天然多糖是一類重要的生物活性物質，具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖、降血脂及提高免疫功能等多種藥理作用［2－4］。大量近代藥理和臨床實踐證明，豬苓的提取物——豬苓多糖是一種非特異性細胞免疫刺激劑，可以抑制癌細胞生長，目前被廣泛用于癌癥的輔助治療，在治療病毒性肝炎、肝硬化、抗輻射和白血病方面具有良好的效果［5］。而常規的豬苓多糖采取水提取法，消耗資源多，成本高，收率低，價格昂貴，使其不能在臨床上廣泛使用。筆者采取超聲波提取法對豬苓多糖的提取工藝進行優化，為更好地開發利用豬苓提供可靠的依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 豬苓中藥飲片購自泰州中醫院;蒽酮、正丁醇、氯仿、無水乙醇等(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)。

1.2 試驗方法

1.2.1 豬苓的預處理。將豬苓用粉碎機粉碎后，干燥過篩(40目)備用。

1.2.2 豬苓多糖超聲波提取。

1.2.2.1 最佳提取固液比的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，混勻后在超聲功率為 100 W、70℃條件下，浸提60 min，取樣待用。

1.2.2.2 最佳提取時間的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后在超聲功率100 W、70℃條件下，分別浸提15、30、45、60、75 min，取樣待用。

1.2.2.3 最佳提取溫度的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后在超聲功率為100 W條件下，分別在50、60、70、80℃下浸提60 min，取樣待用。

1.2.2.4 最佳超聲波提取功率的選擇。稱取豬苓粉末按照固液比1∶40，混勻后分別在超聲功率為 50、60、80、100 W 條件下，于70℃下浸提60 min，取樣待用。

1.2.3 豬苓多糖的純化。將多糖提取液濃縮至原體積的1/10，加入4倍量無水乙醇于4℃靜置15 h后，10 000 r/min離心10 min，將沉淀用10 ml無水乙醇洗滌后干燥，得到豬苓粗多糖。將粗多糖溶于熱水后，加入等體積的三氯甲烷∶正丁醇=4∶1溶液去除蛋白，直至不出現白色絮狀沉淀為止。上清液用乙醇沉淀后，將沉淀加水溶解，用于測定多糖含量。

1.2.4 多糖含量的測定。采用硫酸－蒽酮法測定多糖含量。取適當稀釋的精制多糖溶液1 ml，加入4 ml 0.2%的硫酸蒽酮溶液，混勻后靜置5 min，于沸水浴10 min，冷卻后于620 nm下測定吸光度。按照標準曲線法計算多糖含量。

2 結果與分析

2.1 最佳提取固液比 由圖1可知，一定范圍內，豬苓多糖含量隨固液比的增大而提高。在固液比為1∶40時，多糖含量達到最大值19.41 mg/g。超聲波在液相中的吸收度大于在固相中的吸收度，若加入的溶劑量過少，材料本身吸收一定量后，會使得作為超聲波介質的液體減少，因而隨料液比的增大，超聲波作用于液體產生的氣泡增加，即超聲波對細胞的空化效應增強，細胞破碎程度加大，使得細胞內的多糖物質逐漸向外擴散［6］，此時多糖的含量隨之增大。當料液比繼續增大時，細胞破碎程度達到飽和，多糖含量趨于下降。因此，豬苓多糖在固液比1∶40時提取最佳。

2.2 最佳提取時間 由圖2可知，多糖含量隨提取時間延長而升高，在超聲波時間達到60 min時，多糖含量達最大值25 mg/g，若提取時間繼續延長，多糖提取效果趨于平緩。隨著超聲時間延長，空化效應的作用力逐漸減小，使得豬苓顆粒表面吸附的提取物質增多，從而大大降低了多糖提取率和多糖含量［6］。此外，超聲處理時間延長也可能對多糖的結構造成破壞，使多糖的含量降低。因此，豬苓多糖最佳提取時間在60 min左右。

2.3 最佳提取溫度 由圖3可知，在70℃時多糖含量達到最大值24.98 mg/g，當提取溫度繼續升高時，多糖含量有所下降。隨溫度的升高，液體的蒸汽壓增加，而液體介質的表面張力和黏度降低，因而液體介質之間很容易形成空化氣泡，從而即使在較低超聲波強度下也可產生空化作用。空化作用增大了對細胞的破壞，促進細胞內部的多糖物質向外擴散，故此時多糖含量和多糖提取率都有所提高［6］。因此，豬苓多糖提取溫度在70℃左右較適宜。

2.4 最佳超聲波提取功率 由圖4可知，多糖含量隨超聲波功率的增大而增大，在100 W時達到最大值。因此，豬苓多糖最佳超聲波提取功率為100 W。

3 結論與討論

豬苓多糖為由中藥豬苓提取的多糖類物質，主要用于提高機體的細胞免疫功能。現有資料表明，多糖具有抗感染、免疫促進、腫瘤防治、病毒性肝炎、類風濕癥、艾滋病等免疫損傷或免疫缺損癥和抗氧化等功能和生物活性［7－10］。因而豬苓多糖的開發為天然藥物免疫促進劑和調節劑應用于疾病的防治方面提供了更廣闊的前景。

該試驗探究了豬苓多糖超聲波提取的最佳條件，從固液比、提取時間、溫度、超聲波功率4方面探究，結果表明，最佳單因子條件:固液比為1∶40(g∶ml)，提取時間為 60 min，溫度為70℃，超聲功率為100 W，與常規的水提取法比較，超聲提取能顯著提高豬苓多糖含量、縮短提取時間、減小料液比和降低提取溫度。我國對多糖的研究起步較晚，但近年來的工作取得了較大的進展，愈來愈多的多糖被發現，并證實它們具有復雜、廣泛的生物活性和功能。隨著對多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性機理、功效因子會更加明確，其應用領域也將更加拓寬。

［1］許廣波，傅偉杰，趙旭奎.我國豬苓研究的進展［J］.菌物研究，2003，1(1):58 －61.

［2］楊成，管佳，章江生，等.高效薄層色譜法鑒別6種中藥多糖［C］//2008年中國藥學會學術年會暨第八屆中國藥師周論文集.中國藥學會，2008.

［3］馬紅櫻，張德祿，胡春香，等.植物活性多糖的研究進展［J］.西北師范大學學報，2004，40(3):112 －117.

［4］張曉靜，劉會東.植物多糖提取分離及藥理作用的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2003，14(8):495 －497.

［5］王林麗，吳寒寅，趙旭奎.豬苓的藥理作用及臨床應用［J］.中國藥業，2000，9(10):58 －59.

［6］鄭靜，林英，程暉.超聲波法和超聲波酶法提取靈芝多糖的條件研究［J］.食用菌學報，2006，13(1):48 －52.

［7］董志桓，魏春利，曲萌，等.IL-2聯合銀耳多糖激活同種脾細胞對肝癌實驗性治療研究［J］.北京大學學報，2004(1):22－26.

［8］KEIKO K，TATSUSHI M，SOH Y.Activation of M acrophages by Inear(l－3)－ U － D － G lucans［J］.J Biol Chem，2002，277(39):36825 －36829.

［9］左紹遠.植物多糖生物學活性研究進展［J］.大理學院學報，2005，4(3):73－76.

［10］彭紅，黃小茉，歐陽友生，等.南瓜多糖的提取工藝及其降糖作用的研究［J］.食品科學，2002，23(8):260 －263.