油橄欖中多酚類物質的研究進展

謝碧秀，馬建英，劉 滕，何 強，楊澤身，朱華榮

(1．眉山職業技術學院，四川眉山 620020;2．涼山州中澤新技術開發有限責任公司，四川西昌 615000)

油橄欖(Olea europaea L．)又名洋橄欖、齊敦果，在植物分類上屬于木犀科木犀欖屬，屬常綠喬木，原產小亞細亞［1］，經希臘擴展到地中海沿岸地區栽培已有4 000年的歷史［2］，在我國油橄欖主要分布在甘肅、廣東、廣西、云南、四川等省區［3］。油橄欖全身都是寶，其果實含油量可高達 40．07%［4］，而橄欖油是食用植物油中少有的未經提煉的，其含有固醇類、維生素、多酚等生物活性物質;油橄欖果榨油后產生的果渣及廢水富含三萜類、黃酮類、多酚類物質，油橄欖葉富含橄欖苦苷、羥基酪醇、山楂酸、黃酮等抗氧化物［3］。多酚類化合物是指分子結構中有若干個酚性羥基的植物成分的總稱，廣泛存在于許多植物中，多酚的結構特點使其具有較強的抗氧化以及清除自由基的能力。

1 多酚的含量特點

油橄欖中多酚的含量受諸多因素的影響，不同季節、樹齡、品種、植株部位以及原料預處理方式都會影響多酚的含量。

1．1 季節對多酚含量的影響 油橄欖生長發育過程中的各種內部生理因素是影響其葉片中多酚含量變化的重要因素，比如開花、結果、抽枝、冬眠等生理作用對其植株各部位葉片多酚含量影響極為顯著。同時，光照、溫度、水分等氣象因子會影響植物的生長發育和多酚類物質的積累。不同品種油橄欖葉片多酚含量從春季到冬季都呈逐漸減少的趨勢［2］，葉片多酚含量均以2、3 月份較高，10、11 月份達到最低［5］。

1．2 樹齡對多酚含量的影響 幼齡植株生長旺盛，合成代謝大于分解代謝，而老樹齡的剛好相反，幼齡植株的多酚含量比老樹齡的高。高彩霞等研究發現，不同樹齡油橄欖葉中多酚含量相差較大，3年生油橄欖葉中多酚的含量高達11．30%，而20 年以上樹齡的油橄欖葉僅為 5．14%［6］。

1．3 品種對多酚含量的影響 多酚類物質在植物體中的合成受遺傳因素的影響，不同品種油橄欖中多酚含量差異很大。耿樹香等以云南引種的16個品種油橄欖葉樣及13個品種的果渣樣為原料，測定其中多酚物質的含量發現，葉樣多酚含量鄂植8號中的最低，為1．02%，城固53中最高，為8．29%;果渣樣品中多酚含量，阿斯最低，為0．64%，而萊星最高，為1．56%［7］。高彩霞對阿斯、萊星、皮削利3個品種油橄欖葉中多酚的含量進行了比較研究，其最高含量分別為9．72% 、9．39%、7．58%［5］。

1．4 植株部位對多酚含量的影響 多酚類物質及其前體物質的合成代謝頻道分布在植物不同的器官、組織、細胞或細胞內不同的細胞器內，其合成部位和積累部位不同，因而多酚的含量在同一植株的不同器官中是有差異的。耿樹香等研究發現，油橄欖葉樣中多酚含量平均值(4．21%)大于果渣中多酚平均含量(1．10%)［7］。這說明油橄欖中的多酚可能是由葉片合成，并輸送到果實中去的，但多數仍然存在于葉片中。

1．5 原料預處理方式對多酚含量的影響 新鮮橄欖果榨油后，果實被破壞，其所含有的多酚與空氣接觸很快被氧化，若不立即進行提取測定或者不立即進行真空包裝，其含量將會產生差異。不同的干燥方式對多酚的含量影響也很大，多酚類化合物中有些物質對光不穩定，長期在太陽光下照射，易分解，從而使樣品中多酚含量下降。高彩霞等研究發現，陰干樹葉中多酚的含量較曬干的多，20年生大樹葉，自然陰干的為5．14%，太陽曬干的為2．78%;3年生的小樹葉，自然陰干的為11．30%，太陽曬干的為 6．90%［5］。

2 提取分離

2．1 提取

2．1．1 加熱回流提取。回流提取法是用乙醇等易揮發的有機溶劑提取原料成分，將浸出液加熱蒸餾，其中揮發性溶劑餾出后又被冷卻，重復流回浸出容器中浸提原料，這樣周而復始，直至有效成分回流提取完全的方法。根據多酚類化合物的極性特點，常用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等作為溶劑，進行提取;多酚類化合物易氧化分解，因而提取溫度不宜太高，提取時間不宜過長。饒俞等采用乙醇溶劑浸提法提取廣元地區油橄欖葉多酚物質，在料液比1∶35 g/ml，乙醇體積分數為60%，浸提溫度55℃，浸提時間1．75 h的條件下，油橄欖葉多酚提取量為 57．22 mg/g［8］。

2．1．2 微波輔助提取。由于微波加熱是高頻電磁波穿透萃取介質到達物料內部使其溫度迅速上升導致細胞內部壓力超過細胞壁膨脹所能承受的壓力，結果細胞破碎，使細胞液溢出并擴散至溶劑中，從而加快了萃取速率，微波輔助提取方法具有穿透力和選擇性強、加熱效率高、操作方法簡單、清潔高效等優點［9］。耿樹香等采用微波輔助法提取了油橄欖葉樣及果渣樣中多酚物質［7］;孔維寶等也利用微波輔助技術提取油橄欖果渣，多酚含量可達1．02%，得率比常規溶劑提取方法提高18% ～38%［10］。

2．1．3 超聲波提取。超聲波提取是利用超聲產生的強烈振動和空化效應，加速植物細胞內物質的釋放、擴散并溶解到溶液中，從而達到分離的目的，具有提取效率高、提取時間短、提取溫度低、適應性廣、提取液雜質少、提取工藝運行成本低、操作簡單易行、綜合效益顯著等優點。夏俊雅等使用甲醇為溶劑，采用超聲波法提取油橄欖葉中多酚的最佳條件為:溫度30℃，超聲功率125 W，料液比1∶125 g/ml，提取時間1 h，粉末連續提取2 次［11］。

2．2 分離

2．2．1 柱層析法。多酚類物質溶于水、醇等溶劑中，在測定時很難用溶劑提取等一般分離方法使其與粗提液中水溶性雜質分開。大孔樹脂吸附特別適合水溶性化合物純化分離。該法具有吸附容量大、選擇性好、易于解吸、機械強度高、再生處理簡單、操作簡單、得率恒定、產品質量穩定、成本低等特點，且吸附法僅用少量溶媒洗脫樹脂就能達到濃縮目的，但耗用時間長，吸附樹脂清洗困難［12］。高彩霞等用D101大孔樹脂吸附多酚類物質，精制后的提取物中多酚含量達87．3%［6］。

2．2．2 反相中壓制備液相色譜法。液相色譜法是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別，從而達到分離的目的。反相色譜法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強的溶劑為流動相的一種液相色譜分離模式，其固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團，基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。反相液相色譜柱效高、分離能力強、保留機理清楚，是液相色譜分離模式中使用最為廣泛的一種。夏俊雅等采用反相中壓制備液相色譜技術從油橄欖葉中分離多酚類物質，通過DAC-HB動態軸向壓縮柱進行第一次分離，共得到8個組分。在此基礎上，對第1次制備得到的組分進行第2次制備，共分離純化得到質量分數較高的5 種多酚類物質［13］。

2．3 含量測定 測定多酚含量的方法主要有Folin-Ciocalteu法、酒石酸鐵法、紫外分光光度法等。

2．3．1 Folin-Ciocalteu 法。Folin-Ciocalteu比色法是 Folin-Denis法的改進方法，Folin-Ciocalteu試劑中的鎢鉬酸可以將多酚類化合物定量氧化，自身被還原(使W6+變為W5+)生成藍色的化合物，顏色的深淺跟多酚含量成正相關，因此可以通過在765 nm處測定吸光值來對多酚進行定量［14］。該法測得的除了多酚類物質，也包括含有酚羥基基團的物質及具有還原能力的抗壞血酸［15－16］。

2．3．2 酒石酸鐵法。酒石酸鐵法是測多酚類物質的總含量，是利用Fe2+與多酚類物質絡合形成藍色物質，在540 nm波長處有最大吸收峰［16－17］，但因該法測得的僅是多酚類物質，且不同多酚類化合物對酒石酸鐵呈色能力不同，因而測得多酚的含量低于 Folin-Ciocalteu 比色法［18，16］。

2．3．3 紫外分光光度法。紫外分光光度法是根據酚類物質在紫外區有吸收光譜的原理，直接通過光譜掃描測定多酚含量［19，16］。其中，紫外分光光度法測定的不僅是所有酚類物質的含量，還包括帶有酚羥基基團的物質［20，16］。

2．3．4 高效液相色譜法。夏俊雅等建立了HPLC法同時測定油橄欖葉抗糖尿病有效部位中的5種多酚類化合物含量:脫咖啡酰基毛蕊糖苷0．426 1 mg/g、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷 1．633 mg/g、6″-O-β-D-吡喃葡萄糖 － 橄欖苦苷 0．809 3 mg/g、裂環馬錢子苷 3．847 mg/g、橄欖苦苷 48．94 mg/g［11］。

3 分析鑒定

3．1 核磁共振法 核磁共振波譜法是研究處于強磁場中的原子核對射頻輻射吸收后引起核自旋能級的躍遷所產生的波譜，從而獲得有關化合物分子結構信息的分析方法。王曉飛等采用核磁共振分別對從油橄欖葉醋酸乙酯部位中分離得到的15個多酚類化合物進行鑒定，分別為酪醇、羥基酪醇、羥基酪醇乙酰酯、1H-2-苯并吡喃-6，7-二醇、3，4-二羥基苯甲酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、異鼠李素、圣草酚、花旗松素、槲皮素、木犀草素、女貞苷、橄欖苦苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷［21］。

夏雅俊等采用核磁共振法對通過中壓制備色譜法從油橄欖葉中分離出的5個組分進行鑒定，均為多酚類化合物［13］。

3．2 質譜法 質譜法即用電場和磁場將運動的離子(帶電荷的原子、分子或分子碎片，有分子離子、同位素離子、碎片離子、重排離子、多電荷離子、亞穩離子、負離子和離子－分子相互作用產生的離子)按它們的質荷比分離后進行檢測的方法。王百川等建立了國產油橄欖葉中酚類化合物的超高壓液相色譜－飛行時間質譜(UPLC/Q-TOF-MS)定性分析方法，采用該方法得到了國產油橄欖葉提取物的紫外檢測的色譜圖、負離子監測的總離子流圖以及一級質譜圖，成功鑒定了國產油橄欖葉中的15種酚類化學成分［22］。

4 生物活性

油橄欖多酚物質作為一類氧化還原電位很低的還原劑，具有很強供氫能力，H+與羥基自由基結合，能使之還原為惰性化合物或較穩定的自由基，從而清除人體內過多的有害自由基，在人體中可通過抑制低密度脂蛋白的氧化有助于防止冠心病、動脈粥樣硬化的發生［7，23］。王昱等研究發現，油橄欖葉提取物能對海洛因造成的肺損害起到保護作用［24］，對鉛中毒小鼠有一定的療效，能減輕鉛中毒引起的海馬脂質過氧化損傷［25］，能影響肌肉組織 DNA 甲基化水平［26］、視網膜結構［27］、脾臟和胸腺細胞周期進程［28－29］、抗氧化能力，阻止鉛對肌肉、視網膜、脾臟和胸腺的毒害作用，能改善染鉛小鼠的腎功能［30］。

5 前景與展望

我國甘肅隴南、四川廣元和西昌大力推廣油橄欖種植，但缺乏除橄欖油外其他產品的深加工，油橄欖葉及榨油所產生的果渣和廢液不僅沒有得到充分利用，還造成了環境污染。因此研究適于工業化提取純化油橄欖多酚類物質的方法，最大限度地發揮資源優勢，開發以油橄欖多酚為主要原料的產品，對于滿足市場需求，提高油橄欖的深加工水平，創造極為顯著的經濟效益和社會效益具有深遠意義。

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