探究增生性瘢痕成纖維細胞中CDK4、CDK2、CDK1基因與細胞周期的相關性*

張明君舒申友周鏡桂毛小炎

探究增生性瘢痕成纖維細胞中CDK4、CDK2、CDK1基因與細胞周期的相關性*

張明君①舒申友①周鏡桂①毛小炎①

目的：探究與分析增生性瘢痕成纖維細胞中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表達與細胞周期之間的相關性。方法：選取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕標本，按照增生性瘢痕的時間段將所采集的標本進行分組，共分為3個月組、6個月組、1年組及2年組，每組各10份標本，另選擇同時期采集到的10份正常標本作為常規對照組。觀察與對比各個標本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情況，同時對成纖維細胞周期進行檢測。結果：3個月組、6個月組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量與對照組相比差異均有統計學意義（P＜0.05）；6個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量與3個月組相比差異均有統計學意義（P＜0.05）；3個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量與6個月組相比差異均有統計學意義（P＜0.05）。增生期瘢痕早期高比例在細胞分裂周期中的S期間及G2/M期，結果可見，針對此細胞周期進行相關的基因調控干預，可對增生性瘢痕進一步發生發展起到有效抑制作用。結論：處于不同增生性瘢痕的時期中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表達趨勢大致相符，增生性瘢痕細胞周期的分布情況與上述三個蛋白執行功能的情況呈相互對應的關系，為臨床研究提供可靠依據。

增生性瘢痕； 成纖維細胞； CDK4； CDK2； CDK1； 細胞周期

病理性瘢痕過度增長與成纖維細胞增殖異常具有一定的相關性，由于增生性瘢痕從增生轉向退化的原因主要與細胞間信號船體及成纖維細胞內基因表達密切相關，為此，臨床相關學者與專家需針對此類問題進行分析與研究[1-2]。旨在采用早期積極有效的措施對于異常增生的細胞周期相關基因的表達進行控制，從而阻礙增生性瘢痕的發生及發展[3]。本次研究針對增生性瘢痕不同時期的CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表達情況進行檢測，同時觀察瘢痕組織細胞成分周期分布情況，將研究結果總結報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕標本，按照增生性瘢痕的時間段將所采集的標本進行分組，共分為3個月組、6個月組、1年組及2年組，每組各10份標本。40例中男23例，女17例，年齡30～57歲，平均（45.6±2.7）歲。另選擇同時期采集到的10份正常標本作為常規對照組。對標本進行采集完成后將其中一部分放置-150 ℃的冰箱中保存備用，另一部分則直接進行處理后進行細胞周期的檢測[4]。

1.2 方法 分別采用熒光定量PCR法及Western blotting法對各個標本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情況進行檢測，并采用流式細胞術對成纖維細胞周期進行檢測[5]。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0統計軟件對本次研究所取得的數據進行分析，計量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1基因表達情況對比 3個月、6個月組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量與對照組相比，差異與統計學意義（P＜0.05）；6個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量與3個月組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）；3個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量與6個月組相比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1基因表達情況（±s）

表1 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1基因表達情況（±s）

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2.2 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表達情況比較 3個月組、6個月組標本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；6個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量與3個月組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；3個月、1年組、2年組標本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量與6個月組相比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表達情況比較（±s）

表2 不同時期增生瘢痕組織中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表達情況比較（±s）

組別CDK4CDK2CDK1對照組（n=10）0.26±0.050.35±0.040.40±0.07 3個月組（n=10）1.96±0.220.78±0.170.75±0.17 6個月組（n=10）0.80±0.090.74±0.060.72±0.09 1年組（n=10）0.33±0.070.38±0.040.45±0.09 2年組（n=10）0.30±0.100.36±0.050.42±0.06

2.3 不同時期增生性瘢痕細胞周期分布情況 增生期瘢痕早期高比例在細胞分裂周期中的S期間及G2/M期，結果可見，針對此細胞周期進行相關的基因調控干預，可對增生性瘢痕進一步發生發展起到有效抑制作用。

3 討論

增生性瘢痕作為臨床上一類較為常見的細胞異常增殖性疾病，現有部分專家及學者認為細胞周期內起到調節作用的相關基因可能與增生期瘢痕的發生發展具有一定的關系[6]。但目前所進行的研究中針對基因轉錄水平的研究僅停留在基因表達產物的變化上，而真正發揮功能的蛋白則需通過一系列的轉錄、翻譯、調控等過程來完成，而不同的蛋白質在發揮其細胞周期調節作用時起到了不同的作用[7]。因此，有關專家及學者需針對處于不同時期的增生性瘢痕細胞周期相關基因及表達以及其細胞周期運行情況展開研究，旨在為防治增生性瘢痕發生發展提供可靠依據[8]。本次研究中所研究的對象分別為CDK4、CDK2及CDK1，其中CDK1作為一種促進細胞分裂增值的關鍵蛋白，在細胞周期的作用是保證細胞由G1期順利進入到S期，其作用機制主要是通過與CDK4相結合而形成一種復合體，以此啟動E2F下游的信號系統，以達到縮短細胞周期，對于異常細胞周期或細胞增殖等情況進行調控的作用[9-11]。而CDK2同樣作為一種細胞周期中的關鍵蛋白，其作用同為確保細胞由G1期順利進入到S期，作用機制是通過使得Rb蛋白磷酸化，從而使得E2F轉錄因子對S期基因的表達起到激活作用，以達到縮短細胞周期進程的目的[12-13]。本次研究結果顯示，在各個時期增生性瘢痕演變過程中，在早期可顯示出CDK4、CDK2及CDK1的表達情況最強，且在1年之后其表達量明顯降低，且瘢痕組織細胞形成的細胞周期分布情況與CDK4、CDK2及CDK1基因及蛋白表達變化大致相符[14]。研究結果提示，對于增生性瘢痕發生早期對上述三個基因采取積極有效的干預措施可有效阻礙其發生發展，可作為一種有效可靠的方法推廣應用[15]。

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To Explore the Correlation of the Hyperplastic Scar Fibroblasts of CDK4，CDK2 and CDK1 Gene with the Cell Cycle

ZHANG Ming-jun，SHU Shen-you，ZHOU J ing-gui，et al.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：004-006

Objective： To explore and analyze CDK4， CDK2 and CDK1 gene in the hyperplastic scar fibroblasts，protein expression and the relationship with the cell cycle.Method： 40 of hyperplastic scar samples in our hospital were selected from July 2012 to July 2014， according to the period of hyperplastic scar were divided into the 3 months group，the months group，the 1 year group and the 2 years group，each group with 10 specimens.10 normal specimens were collected at the same time as a normal control group.The samples of CDK4， CDK2， CDK1 gene and their protein were observed and compared， at the same time the fibroblasts cycle were tested. Result： The content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 3 months group，and 6 months group compared with the control group， the differences were statistically significant（P＜0.05）；the content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 6 months group，1 year group， 2 years group compared with 3 months group，the differences were statistically significant（P＜0.05）； the content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 3 months group，1 year group，2 years group compared with 6 months group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Early phase hyperplasia scar accounted for high percentage during cell division cycle in S and G2/M phase，the result showed regulatory intervention with the related gene for the cell cycle can further develop hyperplastic scar effective inhibition effect. Conclusion： In different periods the trend of gene of CDK4， CDK2， CDK1 and protein expression is broadly in line.The distribution of cell cycle corresponds the above three protein executive function each other， which provide reliable basis for clinical study.

Hyperplastic scar； Fibroblasts； CDK4； CDK2； CDK1； The cell cycle

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.002

2014-10-11） （本文編輯：周亞杰）

廣東省科技局科研項目（2012113）；汕頭市科技局科研項目（汕府科2012113）

①汕頭大學醫學院第二附屬醫院 廣東 汕頭 515041

張明君

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China