氣相色譜法測定制痂酊中龍腦、異龍腦的含量

白 娟，劉增輝，周秀紅，朱倩云

(安徽省醫學科學研究院，安徽合肥 230061)

制痂酊由黃芩、黃柏、兒茶、冰片四味中藥經乙醇浸提制成，為醫院制劑，具有清熱燥濕、收斂止痛等功效，臨床用于I度、Ⅱ度燒傷、燙傷等，該制劑收載于安徽省制劑規范中，未建立定量測定方法，冰片為方中君藥，而龍腦、異龍腦為冰片的主要活性成分，本文選擇龍腦、異龍腦作為控制該產品質量的定量指標，采用氣相色譜法進行定量和測定方法的研究［1-10］，結果表明本方法簡便、快速，結果準確，重現性好，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

惠普6890型氣相色譜儀;FID檢測器;XP56-2型百萬分之一電子天平(AETTLER TOLEDO公司);BP210S型萬分之一電子天平(德國賽多利斯)。制痂酊(批號:201308、201309、201310)和陰性制劑均由安慶市宜城醫院制劑室提供;龍腦對照品(批號:110881-201107)、異龍腦對照品(批號:110881-200802)均由中國藥品生物制品檢定所提供;萘、環己烷、乙醇等試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP-INNOWax Polyethylene Glycol毛細柱(30.0 m ×250 μm ×0.25 μm)，柱溫:130℃;進樣口溫度:210℃;FID 檢測器，溫度:250℃;載氣(N2)流速:1.2 mL·min-1;氫氣流速:40 mL·min-1;空氣流速:400 mL·min-1;進樣量:2μL;理論板數按龍腦峰計算為13 519，龍腦、異龍腦分離度為1.86。

2.2 對照品儲備液的制備 分別取龍腦、異龍腦對照品適量，精密稱定，加環己烷制成每1 mL含0.271 0 mg 、0.235 2 mg的混合溶液，即得。

2.3 內標溶液的制備 取萘適量，精密稱定，加環己烷制成每1 mL含0.500 1 mg的溶液，即得。

2.4 對照品溶液的制備 精密量取2 mL對照品儲備液，分別精密加入0.5 mL內標溶液，2 mL 80%乙醇溶液，加環己烷至10 mL，渦旋混合5 min后放置，待分層后取上層環己烷液，即得。

2.5 供試品溶液的制備 制痂酊搖勻，精密量取2 mL于15 mL帶塞試管中，精密加入0.5 mL內標溶液，加環己烷至10 mL，渦旋混合5 min后放置，待分層后取上層環己烷液，即得。

2.6 陰性對照溶液的制備 取缺冰片的缺味陰性制劑，按“2.5”項下的方法處理，即得。

2.7 專屬性實驗 精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各2μL，注入氣相色譜儀測定，結果在與對照品色譜相應位置上，供試品溶液與其它組分分離度良好，陰性對照無干擾，見圖1。

2.8 線性關系考察 精密量取上述對照品儲備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL 分別置于 5 個 10 mL 量瓶中，分別精密加入0.5 mL內標溶液，用環己烷稀釋至刻度，搖勻。同對照品儲備液分別進樣2μL，測定峰面積，以龍腦、異龍腦進樣濃度為橫坐標，龍腦、異龍腦峰面積與內標萘峰面積的比值為縱坐標，計算得回歸方程:龍腦 Y=25.794X-0.015(r=0.999 8，n=6)、異龍腦 Y=26.334X-0.007(r=0.999 8，n=6)。結果表明:龍腦、異龍腦分別在0.027 1 ～0.271 0 g·L-1、0.023 5 ～ 0.235 2 g·L-1范圍內呈良好的線性關系。

2.9 精密度試驗 精密吸取對照品溶液2μL，注入氣相色譜儀，測定。重復進樣6次，結果龍腦、異龍腦峰面積與內標萘峰面積的比值RSD分別為0.62%、0.65%，表明本法精密度良好。

2.10 重現性實驗 取同一批號的樣品6份，分別按上述方法制備、測定龍腦、異龍腦含量，結果龍腦、異龍腦RSD分別為1.73%、1.66%，表明本法重現性良好。

2.11 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別間隔0、2、4、6、8 h 后依法測定，結果龍腦、異龍腦峰面積與內標萘峰面積的比值RSD分別為0.49%，0.58%，表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.12 回收率試驗 精密量取龍腦、異龍腦含量分別為 0.303 7、0.216 1 g·L-1的供試品 9 份各 1 mL，置于15 mL帶塞試管中，分別精密加入對照品儲備液(龍腦 0.271 0 g·L-1、異龍腦 0.235 2 g·L-1)0.6、0.6、0.6、1.0、1.0、1.0、1.5、1.5、1.5 mL ，內標溶液0.5 mL，80%乙醇溶液1 mL，加環己烷至10 mL，按供試品溶液制備方法平行制備并測定，計算回收率，結果表明加樣回收率較好，結果見表1。2.13 樣品測定 取三批樣品，按“2.5”項下制備樣品溶液，按上述色譜條件測定，結果見表2。

3 討論

表1 回收率測定結果

表2 樣品測定結果(n=3)

龍腦、異龍腦為冰片主要成分，已報道的分析方法有氣相色譜法、氣相色譜—質譜聯用法、衍生化高效液相色譜法、薄層掃描法等，GC法因靈敏度高、重現性好、方便快捷而優于其它方法，且GC法還能進一步區分合成冰片中龍腦與異龍腦各自的對映異構體，用于區分合成冰片與天然冰片。故本實驗采用GC法作為該制劑的含量測定方法。

基于毛細管色譜柱的高效性，分離效果比填充柱好，參考文獻［1-9］，本實驗選擇 HP-INNOWax Polyethylene Glycol極性毛細管柱，各組分依據沸點從低到高和極性的差異，順序出峰，在已優化的色譜條件下，無需程序升溫，采用130℃柱溫即可達到分析要求。

本實驗采用內標法定量，對正十四烷［10］和萘［2］兩種內標物進行了比較，結果與供試品色譜峰均分離良好、無干擾，考慮萘相對正烷烴價平易買，且萘具有和冰片一樣的升華特性，可減少樣品供試液制備和測定過程中回收率的不穩定性，故本實驗選擇萘作為內標。

制備供試品溶液選擇提取方法時，曾對超聲提取與直接渦旋混合兩種方法進行了比較，結果直接渦旋混合龍腦、異龍腦即可提取完全。

實驗結果表明:本法準確可靠，可用于制痂酊的質量控制。

［1］宋 莉，黃 艷，劉雪峰.氣相色譜法同時測定黑豆餾油軟膏中桉油精和冰片的含量［J］.安徽醫藥，2013，17(6):958-959.

［2］劉莉莉，秦建平，楊素德，等.GC法測定痛寧凝膠中冰片和薄荷腦的含量［J］.中國藥科大學學報，2014，45(1):76-78.

［3］嚴加琴，李 丹.牛黃降壓片中冰片含量及樟腦殘留量的測定［J］.南通大學學報(醫學版)，2013，33(6):498-500.

［4］吳克楠，韓 松.氣相色譜法測定金鳳搽劑中天然冰片的龍腦含量［J］.貴陽中醫學院學報，2013，35(6):300-301.

［5］戴慧賢，童惠貞，林錦鋒，等.氣相色譜法測定連柏燒傷軟膏中龍腦、異龍腦的含量［J］.中國衛生產業，2013，10(32):141-142.

［6］馬朝陽，王遠輝，田洪蕓，等.GC法測定艾片中l-龍腦、異龍腦和樟腦［J］.中草藥，2012，43(12):2428-2430.

［7］方 穎，趙希賢，趙鳴舒，等.氣相色譜法同時測定醒腦靜注射液中麝香酮、龍腦、樟腦、異龍腦的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18(8):96-99.

［8］張 淼，袁 浩，馮 麗.GC法測定拔云散眼藥中龍腦、異龍腦的含量［J］.中國藥事，2011，25(1):79-81.

［9］黎小莉，祝維峰，郭曉鈴，等.GC法測定腦清乳劑中薄荷腦、異龍腦和龍腦的含量［J］.廣東藥學院學報，2013，29(4):396-399.