滁菊鮮品與干品中化學成分的色譜分析

沈 潔，郭立瑋

(1.南京市第二醫院藥劑科，江蘇 南京 210003;2.南京中醫藥大學中藥復方分離工程重點實驗室，江蘇南京 210023)

滁菊為菊科植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥頭狀花序，主產于安徽滁州，為我國的道地藥材之一［1］，具有散風清熱，平肝明目，清熱解毒之功效［2］。為儲存和臨床使用方便，滁菊多在采收后陰干、焙干或曬干后入藥［3］。現代研究表明，滁菊中的揮發油對葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌、流感病毒等有明顯的的抑制作用，其中的桉葉油素、龍腦、桉葉二烯酮明顯高于其他菊花［4］。因此，筆者通過氣相色譜—質譜聯用(GC-MS)技術和高效液相色譜(HPLC)法，對滁菊鮮品與干品中的化學成分進行了分析比較，旨在為該藥材的干燥加工和合理使用提供參考。

1 儀器與試劑

Agilent 6890N5973氣相色譜—質譜聯用儀(美國)，Waters 515/2487高效液相色譜儀，乙腈為色譜純(德國Merck公司)，甲醇為色譜純(德國Merck公司)，乙醚為分析純(揚州三和化工有限公司)，滁菊鮮品由滁州市滁菊研究所提供，經南京中醫藥大學生藥學教研室吳啟南教授鑒定符合2010年版《中國藥典》一部的規定，滁菊干品由鮮品經60℃干燥2 h得到。

2 實驗方法

2.1 揮發油的提取 按照2010年版《中國藥典》一部附錄XD揮發油測定法［5］，取滁菊鮮品、干品各100 g，剪碎，置于3 000 mL圓底燒瓶中，并在瓶中加入少量沸石，加入1 200 mL蒸餾水浸泡2h，用揮發油提取器采用水蒸氣蒸餾法提取10 h，即得揮發油。

2.2 GC－MS分析

2.2.1 供試品溶液的制備 將水蒸氣蒸餾法提取的滁菊鮮品和干品的揮發油，經無水硫酸鈉脫水后，以乙醚為溶劑分別配成濃度0.1%的溶液，進GC－MS分析。

2.2.2 GC條件 石英毛細管柱HP－5MS;進樣口溫度:280℃，程序升溫:60～130℃，4℃·min－1，130℃保持5 min，再以6℃·min－1的速度升溫到280℃，280℃保留2 min。不分流進樣。

2.2.3 MS條件 電轟擊電離(EI)源，電離電壓70 eV;離子源溫度250℃;四極桿溫度160℃;掃描范圍40～400 aum。

2.3 HPLC 分析

2.3.1 供試品溶液的制備 分別取滁菊鮮品7 g、干品碎花1 g(根據鮮品的含水量進行折算)，加甲醇20 mL，超聲提取30 min，濾過，取續濾液定容至10 mL量瓶中，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3.2 HPLC 條件 色譜柱:Hypersil ODS2(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，大連依利特公司;流動相:乙腈—甲醇—水(20∶40∶100);流速:1.0 mL·min－1;檢測波長:349 nm;柱溫:30℃;進樣量:5μL。

3 實驗結果

3.1 GC-MS結果分析 按“2.2”項下 GC-MS條件對滁菊鮮品和干品的揮發油分別進行測試，得到總離子流圖，見圖1，2;對總離子流圖中的各峰進行MS掃描，所得MS圖再通過計算機檢索并與標準MS圖相對照，從中鑒定出了鮮品與干品揮發油中的部分化合物，經面積歸一化法測定各組分的質量分數［6］，結果見表1。

表1 滁菊鮮品與干品中揮發油的化學成分對比結果

峰號 保留時間/min 分子式 中文名 鮮品質量分數/%干品質量分數/%37 33.469 C21 H36 O4 2，3－ 羥丙基 －(Z，Z，Z)9，12，15－十八碳三烯酸酯0.06—38 33.618 C17 H34 O 2 － 七癸酮 0.13 0.09 39 33.758 C17H32 O4二丁基壬二酸酯0.40 0.26 40 34.076 C17 H34 O2 14－甲基－十五酸甲酯0.08 0.10 41 34.871 C16H32 O2 正十六碳酸 4.35 8.63 42 36.680 C18 H34 O2 油酸 23.01 23.72 43 39.991 C21 H40 O3 環氧丙醇 2.23 1.90 44 40.118 C35 H68 O5 1－羥甲基－1，2－二乙基－十六烷酸酯0.19 0.37 45 41.886 C38 H74 O2二十四烷基油酸酯0.13 －46 42.725 C27H56 二十七烷 1.37 1.21 47 45.016 C27 H52 O4 Si2 2，3－二［(三甲基硅烷基)氧］丙酯 －(Z，Z，Z)9，12，15 － 十八碳三烯酸0.32 0.44 48 45.214 C26H54 3－乙基－5(2－－乙基丁基)－十八烷0.29 0.17 49 46.315 C27H52O4Si2 2，3 － 二(三甲基硅烷基)丙基(Z，Z，Z)－ 9，12，15－十八碳三烯酸酯0.50 0.49合計77.08 80.35

3.2 HPLC指紋圖譜及相似度評價 按“2.3”項下HPLC條件對滁菊鮮品和干品的提取物分別進行測試，得到鮮品和干品的HPLC指紋圖譜，見圖3，4;將采集的HPLC圖導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2004 A版)”，進行譜峰匹配和相似度計算［7］，結果分別見表2，結果發現滁菊鮮品和干品的化學成分有較大差別，指紋圖譜的相似度不高。

表2 菊花鮮品與干品中成分的HPLC指紋圖譜相似度

4 討論

滁菊中揮發性成分主要包括烴類、醛類、酮類、醇類、酸類 、酯類、雜環類和酚類等化合物［8］，成分比較復雜，對其揮發性成分的分析技術要求較高。GC－MS聯用技術廣泛用于植物揮發油和精油化學成分分析［9］，因此本文選擇GC－MS對滁菊鮮品和干品的揮發油成分進行了分離鑒定。由表1可知，滁菊鮮品和干品中的揮發性成分存在著差別:滁菊鮮品中鑒定出43個成分，經面積歸一化法測定各組分的質量分數，占總峰面積的77.08%;相對百分含量在1%以上的是樟腦、龍腦、4α－甲基－1－亞甲基 －7－(1－ 甲基乙烯基)－ ［4αR －(4aà，7à，8aá)］－十氫萘、表藍桉醇、雪松－8－烯－13－醇、芹子－6－烯－4－醇、喇叭茶醇、正十六碳酸、環氧丙醇、油酸、二十七烷等;干品中鑒定出41個成分，經面積歸一化法測定各組分的質量分數，占總峰面積的80.35%;相對百分含量在1%以上的是樟腦、龍腦、4α－甲基－1－亞甲基－7－(1－甲基乙烯基)－ ［4αR －(4aà，7à，8aá)］－ 十氫萘、表藍桉醇、二表雪松烯－1－氧化物、反式－長松香芹醇、芹子－6－烯－4－醇、喇叭茶醇、正十六碳酸、環氧丙醇、油酸、二十七烷等;鮮品中有8個成分在干品中未測到，說明滁菊經干燥后有一些成分揮發了;而干品中新出現了6個成分在鮮品中未測到，說明滁菊在干燥過程中揮發性成分發生了變化。此外，滁菊鮮品與干品的HPLC指紋圖譜顯示，鮮品與干品的化學成分存在著較大的區別，同時兩者的指紋圖譜相似度較低，進一步說明滁菊經干燥后成分發生了較大的變化。

滁菊為國家地理標志產品，因具有良好的藥用功效，被譽為我國“四大藥菊”之首［10］。有關藥理學研究表明，滁菊的主要成分為黃酮類、揮發油萜類化合物及綠原酸等，具有多種生理活性，有很好的應用開發價值［11－14］。為了儲存和臨床使用的方便，滁菊多以干品入藥或食用，本文的GC－MS和HPLC研究結果表明，滁菊經60℃干燥后的干品與鮮品的成分已經發生了較大變化，因此滁菊在干燥工藝上應選擇低溫干燥，以保持滁菊的原有成分及功效。

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