中藥大青葉、黃柏、龍膽草對(duì)小鼠皮膚炎癥反應(yīng)的影響

李中輝魏躍鋼

中藥大青葉、黃柏、龍膽草對(duì)小鼠皮膚炎癥反應(yīng)的影響

李中輝1?魏躍鋼2

目的: 明確大青葉、黃柏、龍膽草對(duì)小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎組織的影響。方法: 利用1% FITC(丙酮∶DBP 1∶1)誘發(fā)的小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎動(dòng)物模型，將小鼠按給藥不同分為空白對(duì)照組、生理鹽水組、地塞米松組、大青葉組、黃柏組、龍膽草組，通過測量耳厚度差和觀察耳朵組織病理改變。結(jié)果: 大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組小鼠耳厚度差均明顯低于生理鹽水組，且它們的耳朵皮膚的炎癥反應(yīng)抑制明顯。結(jié)論: 大青葉、黃柏、龍膽草在抑制急性接觸性皮炎的炎癥反應(yīng)方面具有與糖皮質(zhì)激素相似的效果。

大青葉； 黃柏； 龍膽草； 變應(yīng)性接觸性皮炎

皮炎濕疹類皮膚病是皮膚科常見的超敏反應(yīng)性疾病，屬于IV型變態(tài)反應(yīng)。中醫(yī)治療皮炎濕疹類皮膚病積累了豐富經(jīng)驗(yàn)。筆者通過對(duì)近10年臨床文獻(xiàn)資料關(guān)于治療急性濕疹和接觸性皮炎常見中藥的研究，(排除他人研究過的)篩選出了常用的大青葉、黃柏、龍膽草3種中藥，并進(jìn)行了其對(duì)小鼠接觸性皮炎的實(shí)驗(yàn)研究，觀察治療急性皮炎濕疹類皮膚病的單味中藥對(duì)小鼠IV型變態(tài)反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的雌性Balb/C小鼠35只，體重18～22 g，10～12周。

1.1.2 試劑 5－異硫氰酸熒光素(FITC)為上海紫一試劑廠生產(chǎn)。丙酮∶鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)為1∶1。地塞米松片為天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司生產(chǎn)。中藥均購于蘇州市天靈藥業(yè)有限公司。

1.1.3 器材 煎藥機(jī)為天津三延精密機(jī)械有限公司生產(chǎn)。光學(xué)顯微鏡為鄭州朋來儀器有限公司生產(chǎn)。分析天平為海奕宇電子科技公司生產(chǎn)。千分尺(精確度0.01 mm)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 30只健康Balb/C小鼠隨機(jī)分為6組，每組5只。分為空白對(duì)照組，生理鹽水組，地塞米松組，大青葉組，黃柏組，龍膽草組。

1.2.2 藥物干預(yù) 空白對(duì)照組小鼠不激發(fā)，不致敏。其它各組于實(shí)驗(yàn)前1 d背部剃毛，第l d和第2 d在背部脫毛部位用1%FITC(丙酮∶DBP 1∶1)連續(xù)致敏2次涂抹，第7 d在小鼠的左耳0.5%FITC(丙酮∶DBP 1∶1)激發(fā)。第3 d開始用灌飼器分別灌飼生理鹽水、地塞米松及中藥，每次灌飼體積為每10 g體重0.2 mL，連續(xù)用藥6天(第3、4、5、6、7、8天)，激發(fā)期灌藥時(shí)間為激發(fā)前2 h及激發(fā)后6 h。小鼠的藥物劑量按每公斤體重為《中華人民共和國藥典》的臨床用量規(guī)定的20倍進(jìn)行換算:大青葉0.5 g/m L、黃柏0.4 g/ m L、龍膽草0.2 g/m L、地塞米松0.2 mg/m L。

1.2.3 觀察指標(biāo) ①右耳厚度差(S1):激發(fā)前及處死前測量鼠耳中部厚度，計(jì)算激發(fā)前及處死前右耳厚度差(mm)；②處死前左右耳厚度差(S2)；③在光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠皮膚組織病理變化。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所測數(shù)據(jù)以 ˉx±s表示，采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包行方差分析。為減少誤差，所有數(shù)據(jù)的測量、計(jì)數(shù)和計(jì)算均兩個(gè)人完成。

2 結(jié)果

2.1 各組對(duì)小鼠耳厚度的影響 與生理鹽水組相比，大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組各組小鼠的左耳厚度差(S1)、同一小鼠左右耳厚度差(S2)明顯降低(P＜0.01)，且黃柏組亦有明顯差異(P＜0.05)，見表1。

表1 各組小鼠左耳厚度差(S1)、左右耳厚度差(S2)

2.2 各組對(duì)小鼠耳部皮膚的病理改變

2.2.1 各組對(duì)小鼠表皮的影響 ①表皮顆粒層和棘層計(jì)數(shù):以細(xì)胞的層數(shù)計(jì)數(shù)。②表皮細(xì)胞間是否水腫的標(biāo)準(zhǔn):以參照空白組的表皮細(xì)胞排列致密為陰性(－)；表皮細(xì)胞間能見成線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)為陽性(＋)；表皮細(xì)胞間的線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)清楚、明亮為中陽性(＋＋)；表皮細(xì)胞間線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)增粗、分離為強(qiáng)陽性(＋＋＋)。細(xì)胞內(nèi)是否水腫的標(biāo)準(zhǔn)是以空白組的表皮細(xì)胞內(nèi)胞核深染、清楚，胞漿均勻?yàn)?－)；表皮細(xì)胞內(nèi)能看到模糊的空泡為陽性(＋)；表皮細(xì)胞內(nèi)能見光亮的空泡，空泡的體積小于整個(gè)細(xì)胞體積的1/2且核有偏移為中(＋＋)；表皮細(xì)胞內(nèi)光亮空泡的體積大于整個(gè)細(xì)胞體積的1/2且核偏于一側(cè)細(xì)胞壁為強(qiáng)陽性(＋＋＋)。③結(jié)果:與生理鹽水組相比，大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組可使表皮棘層均變薄，細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)水腫明顯減輕，見表2。

表2 各組小鼠表皮的組織病理表現(xiàn)

2.2.2 各組對(duì)小鼠真皮的影響 ①真皮是否水腫的標(biāo)準(zhǔn):以空白組的真皮細(xì)胞排列緊密、有序?yàn)殛幮?－)；真皮內(nèi)能看到海綿形成的模糊的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞胞漿略淡，真皮寬度是空白組的1～1.5倍陽性(＋)；真皮內(nèi)的海綿形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯，細(xì)胞胞漿淡，真皮寬度是空白組的1.5～2倍中陽性(＋＋)；真皮內(nèi)的海綿形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)間隙明亮、增粗，細(xì)胞胞漿很淡，真皮寬度是空白組的2倍以上強(qiáng)陽性(＋＋＋)。②毛細(xì)血管是否擴(kuò)張的標(biāo)準(zhǔn):以空白組看不到毛細(xì)血管或毛細(xì)血管較細(xì)，其內(nèi)1～2個(gè)紅細(xì)胞為陰性(－)；毛細(xì)血管直徑是空白組毛細(xì)血管的1.5倍以內(nèi)，其內(nèi)2～4個(gè)紅細(xì)胞為陽性(＋)；毛細(xì)血管直徑是空白組毛細(xì)血管的1.5～2倍，其內(nèi)4～6個(gè)紅細(xì)胞為中陽性(＋＋)；毛細(xì)血管直徑是空白組毛細(xì)血管的2倍以上，其內(nèi)紅細(xì)胞6個(gè)以上為強(qiáng)陽性。③根據(jù)判斷標(biāo)準(zhǔn)可以看出:大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組的真皮水腫明顯降低；大青葉組、龍膽草組、地塞米松組真皮內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張均降低，黃柏不能降低毛細(xì)血管擴(kuò)張，見表3。

表3 各組小鼠組織病理真皮的表現(xiàn)

3 討論

皮炎濕疹是皮膚科的常見炎癥性疾病。許多醫(yī)師通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)皮炎濕疹進(jìn)行研究。黃礴等1研究了單味藥白鮮皮、生地黃、荊芥、當(dāng)歸、金銀花和白芷6味中藥對(duì)小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎的研究，白鮮皮、金銀花、當(dāng)歸對(duì)小鼠ACD具有抑制作用，而荊芥、生地黃、白芷對(duì)小鼠ACD不具有抑制作用。林熙然等2把常見的30味中藥按養(yǎng)血涼血清熱利濕、清熱祛風(fēng)利濕、涼血清熱祛風(fēng)利濕和祛風(fēng)利濕分成4類組成復(fù)方對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性皮炎的作用。

急性皮炎濕疹由于人體稟賦不耐，濕、熱、風(fēng)等邪性客于肌膚，與氣血相搏而發(fā)病。其臨床表現(xiàn):皮損色紅，腫脹，其上為紅斑、丘疹甚至糜爛滲出。根據(jù)中醫(yī)辨證:色紅多有熱或血熱，腫脹多有風(fēng)邪或濕邪，糜爛滲出多為濕毒，瘙癢多為風(fēng)邪所致。濕、熱、風(fēng)之邪是接觸性皮炎、急性皮炎及濕疹的主要致病因素。據(jù)文獻(xiàn)記載，3大青葉為十字花科植物菘藍(lán)的干燥葉片，性苦寒，歸心胃兩經(jīng)。具有清熱解毒，涼血消斑的功效。大青葉在治療急性皮炎濕疹中發(fā)揮其清熱解毒、涼血之功，能使紅腫消退，減少小鼠耳部腫脹和炎癥細(xì)胞浸潤。黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮。味苦性寒，歸腎、膀胱、大腸經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效。黃柏的清熱燥濕之功較強(qiáng)，善治下焦?jié)癔彙｜S柏也可外用治療皮炎濕疹。龍膽草為龍膽科植物的干燥根及根莖。味苦性寒，歸肝、膽經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉肝膽火功效。龍膽草善治肝經(jīng)濕熱，是龍膽瀉肝湯的君藥，而很多醫(yī)家運(yùn)用龍膽瀉肝湯治療皮炎濕疹都取得了很好的療效。本實(shí)驗(yàn)表明，大青葉、黃柏、龍膽草可有效抑制小鼠的IV型變態(tài)反應(yīng)，中藥在抑制急性接觸性皮炎的炎癥反應(yīng)的某些方面可以達(dá)到和糖皮質(zhì)激素一樣的作用。如在此基礎(chǔ)上，對(duì)此3種中藥在化學(xué)成份上進(jìn)一步研究，對(duì)開發(fā)新型抗過敏藥方面有一定意義，

1黃礴，吳鐵，樊翌明.6種中藥抑制二硝基氟苯所致小鼠接觸性皮炎的實(shí)驗(yàn)研究.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(13): 1756－1757.

2林熙然，涂彩霞，楊春梅，等.抗IV型變態(tài)反應(yīng)中藥治療濕疹的研究.中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20(4):258－260.

3高學(xué)敏.中藥學(xué).北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007.56－60.

(收稿:2014－04－08 修回:2014－06－03)

Effects of folium isatid is，phellodend ron，gentian on skin inflammation of mousemodels

LIZhong-hui，WEIYue-gang.The 3rd People’s Hospital of Xiangcheng District in Suzhou，215134

Objective:To determine the effects of folium isatidis，phellodendron，gentian on skin inflammation ofmouse allergic contact dermatitismodels.Methods:Themodels of contact dermatitiswere induced by FITC 1%(acetone∶DBP 1∶1).The effects of different drugs，including folium isatidis，phellodendron，gentian，saline and dexamethasone onmurine ear swelling and histopathological changeswere assessed.Saline was used as control.Results:Compared with saline group，the ears swelling and inflammation was markedly suppressed in the folium isatidis group，phellodendron，gentian group and dexamethasone group(P＜0.05). Conclusion:Folium isatidis，phellodendron，gentian and dexamethasone have equivalent effect in restraining the inflammation reaction.

folium isatidis；phellodendron；gentian；allergic contact dermatitis

1南京中醫(yī)藥大學(xué)在職研究生，南京，210029?現(xiàn)工作單位:蘇州市相城區(qū)第三人民醫(yī)院皮膚科，蘇州，215134 2江蘇省中醫(yī)院皮膚科，南京，210029