CD133、Ki—67在胃癌的表達(dá)及臨床病理意義

劉娜

[摘要] 目的 探討CD133、Ki-67在胃癌的表達(dá)及臨床病理意義。 方法 隨機(jī)選取本院2008年5月～2012年9月的首發(fā)胃癌患者300例，所有患者進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，對(duì)胃癌組織中CD133、Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)及病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析，觀察患者的術(shù)后生存時(shí)間。 結(jié)果 300例胃癌中，CD133陽(yáng)性的患者184例，陽(yáng)性率為61.33%。Ki-67陽(yáng)性的患者179例，陽(yáng)性率為59.67%。CD133和Ki-67的表達(dá)隨著腫瘤增大、分化降低、浸潤(rùn)加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、TNM分期遞增，出現(xiàn)腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素而逐漸增高（P<0.05）。Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 結(jié)論 CD133和Ki-67聯(lián)合檢測(cè)可作為胃癌的臨床評(píng)價(jià)腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的有用指標(biāo)之一。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；CD133；Ki-67；表達(dá)；臨床病理

[中圖分類號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）20-157-04

The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance

LIU Na

Department of Pathology， Yilan County People's Hospital， Yilan 154800， China

[Abstract] Objective To investigate the The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance. Methods 86 cases of patients with diabetic retinopathy from May 2008- September 2012 were selected as the observation group， 98 cases of diabetic patients without retinopathy were selected as the control group， 80 cases of healthy people were selected as normal group . All subjects were resting fasting urine microalbumin（UmAlb） and glycosylated hemoglobin （HbA1C）， using ABC- enzyme-linked immunosorbent assay and analysis of peripheral blood IGF-1 and TGF-β1 expression and among the three groups level situation. Results In 300 cases of gastric cancer， 184 cases of CD133 positive patients， positive rate of Ki-67was 61.33%. Positive patients in 179 cases， the positive rate was 59.67%. The expression of CD133 and Ki-67 increased with the increase of tumor， differentiation， invasion， lymph node metastasis， TNM stage， P<0.05. Cox， and survival analysis showed that the independent prognostic factors were age， tumor size， histological type， Ki-67， CD133， abdominal and distant metastasis. Conclusion The combined detection of CD133 and Ki-67 can be used as a useful index for clinical evaluation of tumor biological behavior and prognosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； CD133； Ki-67； Expression； Clinical pathology

胃癌（gastric cancer，GC）作為臨床常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率及死亡率皆均高。患者一旦發(fā)現(xiàn)，就已經(jīng)是胃癌晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)，嚴(yán)重影響患者的生活及生存時(shí)間，給患者造成極大的痛苦[1-2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與腫瘤干細(xì)胞的生存有著重要的關(guān)系[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)及時(shí)對(duì)患者腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，可以預(yù)測(cè)惡性腫瘤的術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[5]。本研究主要探討增殖細(xì)胞核抗原（Kit-67），CD133在在胃癌的表達(dá)及臨床病理意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2008年5月～2012年9月來(lái)本院就診的首發(fā)胃癌患者300例，所有患者術(shù)前未經(jīng)過(guò)放化療或免疫治療；無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。男152例，女148例；年齡35～70歲，平均（58.4±12.3）歲。按照2003年國(guó)際抗癌聯(lián)盟修訂的胃癌臨床病理TNM分期， Ⅰ期56例， Ⅱ期87例， Ⅲ期110例， Ⅳ期47例； 組織學(xué)類型， 管狀腺癌（中高分化腺癌）75例， 黏液腺癌32例， 低分化腺癌183例， 印戒細(xì)胞癌35例， 其他類型11例。endprint

1.2 構(gòu)建組織芯片

在所有胃癌患者癌旁正常組織的石蠟標(biāo)本上采集組織芯， 直徑選擇1.0mm， 孔間距設(shè)置為1.2 mm， 排列成9行×8列共72點(diǎn)微陣列， 每2點(diǎn)代表1例患者組織， 共制成11塊組織芯片。

表1 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與病理特征的關(guān)系

臨床病理因素 CD133 x2 P Ki-67 x2 P

+ - + -

年齡（歲） 1.029 >0.05 1.057 >0.05

n≤40 42 30 41 39

40

n>65 46 29 34 20

腫瘤大小 6.579 <0.05 6.894 <0.05

d<4 cm 51 39 43 41

4 cm≤d<8 cm 94 56 89 60

d≥8 cm 39 21 47 20

組織學(xué)分級(jí) 7.159 <0.05 7.596 <0.05

Ⅰ級(jí) 9 11 8 13

Ⅱ級(jí) 25 30 27 31

Ⅲ級(jí) 150 75 144 77

浸潤(rùn)深度 10.297 <0.05 10.567 <0.05

達(dá)黏膜下層 5 7 6 8

達(dá)漿膜下層 31 28 32 26

出漿膜層 121 60 116 64

鄰近器官 27 21 25 23

淋巴結(jié)受累 12.040 <0.05 11.982 <0.05

LN = 0 32 30 31 28

LN = 1～6 35 29 36 31

LN = 7～15 74 38 72 42

LN>15 43 19 45 20

TNM分期

Ⅰ期

25

23 9.206 <0.05

21

22 9.673 <0.05

Ⅱ期

Ⅲ期 29

99 25

44 27

107 24

52

Ⅳ期 31 24 29 23

腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

無(wú)轉(zhuǎn)移

170

113 13.204 <0.05

167

116 14.203 <0.05

轉(zhuǎn)移 14 3 12 5

5年生存率

生存

41

39 11.239 <0.05

40

41 12.357 <0.05

死亡 143 77 144 80

1.3 試劑

兔抗人CD133多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司、 鼠抗人Ki-67 mAb購(gòu)自美國(guó)Zymed公司、 使用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的枸櫞酸抗原修復(fù)液（pH6.0），DAB顯色液及PBS也購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.4 免疫組織化學(xué)染色方法

SP法（Labelled streptavidim biotln） 。（1）切片脫蠟至水。（2）0.3%H2O2甲醇處理切片10～20min。（3）水洗。（4）抗原修復(fù)。（5）PBS洗3次，1min/次。（6）加入血清孵育10min。（7）摔去血清，加入一抗孵育30～60min。（8）PBS洗3次，每次2min。加入二抗，孵育20min。（9）PBS洗3次，每次2min。（10）加入SP復(fù)合物孵育20～30min。（11）PBS洗3次，每次2min。（12）DAB-H2O2孵育5～10min。（13）PBS洗，水洗。（14）Harris蘇木素染核5～10min。（15）水洗，分化，藍(lán)化，蒸餾水漂洗，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，中性樹膠封片。

1.5 結(jié)果判斷

DAB陽(yáng)性染色為棕（黃）色。高倍視野下計(jì)數(shù)4個(gè)不同位置，大約200個(gè)癌細(xì)胞，如果陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于10%則記為陽(yáng)性，小于等于10%則記為陰性。

表2 術(shù)后生存時(shí)間多因素分析

變量 回歸系數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)誤 x2 自由度 P 危險(xiǎn)比

年齡 0 .76 0.112 15.367 1 0.000 1.611

組織學(xué)分級(jí) 0.045 0.016 0.679 1 0.879 1.044

組織學(xué)類型 0.228 0.079 8.569 1 0.005 1.264

浸潤(rùn)深度 0.207 0.173 1.513 1 0.221 1.327

淋巴結(jié)受累 0.241 0.142 2.989 1 0.876 1.271

遠(yuǎn)處及腹腔轉(zhuǎn)移

TNM分期 0.971

-0.129 0.315

0.192 9.654

0.537 1

1 0.002

0.547 2.641

0.871

腫瘤大小 0.558 0.129 19.635 1 0.000 1.746

CD133 0.587 0.147 15.672 1 0.000 1.824

Ki-67 0.697 0.148 22.035 1 0.000 1.998

1.6 觀察指標(biāo)

觀察CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與病理特征的關(guān)系，及術(shù)后生存時(shí)間多因素分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行分析。CD133和Ki-67在胃癌表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)資料相關(guān)分析；計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)；對(duì)生存率影響的單因素分析采用Log-rank檢驗(yàn)； 多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)

300例胃癌中CD133陽(yáng)性184例， 陽(yáng)性率為61.33%。 Ki-67陽(yáng)性179例，陽(yáng)性率為59.67%。CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)圖片見圖1、2。

圖1 胃癌組織ki-67陽(yáng)性表達(dá)（SP×200）

圖2 胃癌組織CD133陽(yáng)性表達(dá)（SP×200）

2.2 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)與病理特征的關(guān)系

表1顯示，CD133和Ki-67的表達(dá)隨分化降低、腫瘤增大、浸潤(rùn)加深、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、 TNM分期遞增， 出現(xiàn)腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢(shì)（P<0.05）。見表1。

2.3 術(shù)后生存時(shí)間多因素分析

Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。見表2。

3 討論

胃癌（gastric carcinoma）是目前世界上最為常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均很高。我國(guó)胃癌發(fā)病率和死亡率高居世界第二位，成為嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民的身體健康以及生命安全的惡性腫瘤之一[6-8]。胃癌患者的早期診斷率不高，就診時(shí)已發(fā)展到晚期，失去了根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，患者的預(yù)后時(shí)間明顯不如較早發(fā)現(xiàn)和手術(shù)者[9-10]。

增殖細(xì)胞核抗原Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)。Ki-67抗原是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物指標(biāo)，可以通過(guò)Ki-67抗原的檢測(cè)，Ki-67了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性。腫瘤增殖Ki67表達(dá)范圍覆蓋除G0 期以外的各增殖周期細(xì)胞。研究結(jié)果提示PCNA 和Ki67 均可較好地用于檢測(cè)乳腺癌組織中的增殖細(xì)胞，二者基本可以互為代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表達(dá)，更具可用性。兩者具有一定的互補(bǔ)性。Ki-67在低分化腺癌組織中的表達(dá)較在中高分化腺癌組織的表達(dá)明顯升高，表明Ki67 染色陽(yáng)性程度與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性。表明Ki67表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，是一個(gè)不良預(yù)后因素，對(duì)乳腺癌的診斷治療及預(yù)后評(píng)價(jià)有重要的參考價(jià)值 [11-13]。Ki-67的表達(dá)控制著細(xì)胞的增殖周期，故可利用Ki-67單抗標(biāo)記指數(shù)來(lái)檢測(cè)腫瘤的增殖細(xì)胞率，反映細(xì)胞的增殖能力。因此Ki-67被認(rèn)為是一個(gè)判斷細(xì)胞凋亡和增殖的有價(jià)值的標(biāo)記物，和腫瘤的分化程度、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和患者臨床預(yù)后有密切的關(guān)系[14-15]。

CD133是一種分子量為120kD的跨膜蛋白， CD133抗原為5次跨膜（5-transmembrane，5-TM）糖蛋白。CD133抗原可被3種CD133抗體識(shí)別：克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接與CD133/；1糖基化抗原表位結(jié)合，可用于從外周血、骨髓、臍帶血及其他組織中分析和分選CD133+細(xì)胞。目前CD133主要用于各種惡性腫瘤癌干細(xì)胞的研究。CD133是較早應(yīng)用于癌干細(xì)胞研究的生物標(biāo)志物之一[16-18]。

本研究中，300例胃癌中，CD133陽(yáng)性的患者184例， 陽(yáng)性率為61.33%. Ki-67陽(yáng)性的患者179例，陽(yáng)性率為59.67%。CD133和Ki-67的表達(dá)隨著腫瘤增大、分化降低、浸潤(rùn)加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、TNM分期遞增，出現(xiàn)腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素而逐漸增高（P<0.05）。Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 綜上所述， CD133和Ki-67聯(lián)合檢測(cè)可作為胃癌的臨床評(píng)價(jià)腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的有用指標(biāo)之一。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉廣飛，王璐，李勇，等. CD133 和 Ki-67 在骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志，2015，20（8）：690-693.

[2] 張華，李蘇宜.CD133與腫瘤干細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 癌癥，2010，29（3）： 259-264.

[3] 薛英明，孫培春，吳剛，等.CD133 在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中華實(shí)用診斷與治療雜志，2011，25（4）：355-357.

[4] 韓軍平，劉 斌，孟曉燕，等. 多藥耐藥基因產(chǎn)物及 CerbB-2、ki-67 在胃癌中的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義[J]. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011，19（11）：2281-2284.

[5] Zhang H， Wu H， Zheng J， et al. Transforming growth factor β1 sig-nal is crucial for dedifferentiation of cancer cells to cancer stem cells in osteosarcoma[J]. Stem Cells， 2013， 31（3）：433-446.

[6] Saini V， Hose CD， Monks A， et al. Identification of CBX3 and AB-CA5 as Putative Biomarkers for Tumor Stem Cells in Osteosarcoma[J]. PloS One， 2012， 7（8）：e41401.endprint

[7] 王曉瑜，甘潤(rùn)良.胃癌相關(guān)基因的功能和作用[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（6）：854-858.

[8] Torosyan Y， Simakova O， Naga S， et al. Annexin-A7 protects normal prostate cells and induces distinct patterns of RB-associated cytotoxicity in androgen-sensitive and resistant prostate cancer cells [J] . Int J Cancer， 2009， 125（11） ： 2528-2539.

[9] Xie HL， Li ZY， Gan RL， et al. Differential gene and protein expression in primary gastric carcinomas and their lymph node metastases as revealed by combined cDNA microarray and tissue microarray analysis[J]. J Dig Dis，2010，11（3） ： 167-175.

[10] Yerushalmi R， Woods R， Ravdin PM.Ki -67 in Breast Cancer：Prognostic and Predictive Potential[J]. Lancet Oncol， 2010，11（2）：74-83.

[11] 張艷紅，呂曉軍，馬香穩(wěn)，等.Ki-67在胃癌組織浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2011，19，（1）：33-34.

[12] 劉偉，余英豪，歐陽(yáng)學(xué)農(nóng)，等.P53和Ki-67在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].世界華人消化雜志，2011，19（4）：367-373.

[13] 孔東方，何慶泗，孫國(guó)瑞，等.胃癌組織中 Ki-67 及 CD34 的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2012，15（6）：451-454.

[14] 林金鑾，林建華， 吳朝陽(yáng)，等. 骨肉瘤CD133 CD117 Ki-67的表達(dá)及與臨床病理因素和危險(xiǎn)度的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)腫瘤臨床，2014，41（5）：304-310.

[15] 周麗.p53 和 Ki67 蛋白在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 臨床合理用藥，2015，8（5C）：27-28.

[16] 羅慶豐， 饒華民， 黃傳生. CXCL12 和 CD133 蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（13）：2045-2047.

[17] ZHOU F， MU Y D， LIANG J， et al.Expression and prognostic value of tumor stem cell markers ALDH1 and CD133 in colorectal carcinoma[J].Oncol Lett，2014，7（2）： 507-512.

[18] 王曉亮，李紹剛，李賽飛，等. 胃癌復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素和ABCC4、p53的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（34）：51-54.

（收稿日期：2015-05-28）endprint