獸醫實驗室血清學診斷注意事項

文│李娟 黃仁樹（四川省什邡市動物疫病預防控制中心）

獸醫實驗室血清學診斷注意事項

文│李娟 黃仁樹（四川省什邡市動物疫病預防控制中心）

隨著畜牧業的發展，獸醫實驗室在動物疫病防控體系的作用日趨凸顯，而實驗室檢測結果的準確性，直接影響后續畜牧生產指導和動物疫病防控的方向。目前獸醫實驗室診斷主要分三大類：血清學診斷、病毒學診斷、細菌學診斷。細菌學與病毒學檢測工作在基層實驗室開展得不多，使用最普遍的是血清學診斷。由于基層獸醫實驗工作起步晚、人員素質參差不齊等原因，在血清學診斷實驗實施和操作中常出現一些問題，筆者就該實驗應該注意的問題進行了總結和分析，旨在提高動物疫病的實驗室檢測能力和水平，增強動物疫病防控的針對性和有效性。

一、血液樣品的采集、保存和運送

1.血液采集和血清制取中應注意問題。在血清學診斷中，診斷樣品主要是血清。對于不同的畜禽采血方法較多，通過實踐，筆者發現家禽采用翅下靜脈采血、小豬采用臥式采血、中豬和大豬采用立式采血以及奶牛采用尾靜脈采血的方式，是畜禽應激最小、最為方便的方式。在血清學診斷中應注意采血的時間，需在抗體的高峰期進行血樣采集。

在血樣采集過程中，應嚴格遵守無菌操作，針頭、血樣容器、采血部位須全部消毒。采樣人員務必熟練掌握采血技術，選用合適的注射器及針頭，做好保定工作，選準采血進針的部位。例如豬的前腔靜脈越往頭部越淺，但也越細；越靠胸部越粗，但也越深。在采血過程中要掌握好一定的方向、角度和深度，針尖進入血管后應順著血管的方向向前推進，推偏刺穿血管會引起血腫。

2.血清的制取。血清的制取通常有兩種方法：第一種自然析出法，采血后，應使注射器活塞向后拉一兩厘米，留血清析出的空隙，并放在30度左右夾角上靜置，讓血清自然析出，通常溫度高血清析出快，夏日一般一個小時血清即可析出；另一種方法是離心法，該方法是立即將注射器內的血液沿容器壁（血清管壁）徐徐注入，不能用力擠，也不能震蕩，否則易使紅細胞破裂而發生溶血，待容器內的血液凝固后，用離心機4000轉5分鐘左右離心，上層即是血清，須凝血后再離心，否則離心出來是血漿。

3.血液樣品的保存和運送。血清制備后，應4℃冷藏，在24小時內送到實驗室。如24小時內不能送達，則將血清置于冰箱-20℃凍存，切記不可反復凍融。樣品運輸過程中，為避免因劇烈震動使容器破損，樣品裝入冷藏箱前應鋪設襯墊并用柔軟的東西互相隔開防止碰撞，而且要保持溫度在必要的范圍內（通常加入冰袋）。需要注意的是所有盛裝送檢樣品的容器，應貼上可防止因各種原因（冷凍、擠碰等）脫落的標簽，同時填完整采樣單，標明采樣時間、地點、編號和樣品名稱、畜禽品種、免疫情況等。

二、實驗室血清學診斷

1.試劑、器具的選擇。在血清學診斷中的試劑要選擇有批文批號的，并注意試劑的有效期。特別要注意的是診斷試劑的有效期通常比較短，甚至有的有效期只有3個月。化學試劑應主要選擇分析純，并注意試劑的保存方法。

另外，移液器量程的選用也要注意，因為其準確性直接影響實驗結果。選用最大量程與所量體積最為接近的移液器，誤差會較小。

在血清學檢測中經常會用到96孔血凝板，通常豬瘟的間接血凝試驗選用110度V型板，而禽流感和新城疫的血凝試驗選用90V型度板，因為在同等時間內不同型號的板血沉降效果是不同的。

2.實驗室儀器的校正。在血清學診斷中，常用的儀器有電子天平、水浴鍋、酶標儀、純水器、滅菌鍋、移液器和恒溫箱。電子天平應注意在第一次使用、長時間未使用、天平移動位置和天氣溫差變化等情況下都要做校準，才能保證結果的準確性。應經常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內）實測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差。對酶標儀應經常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能，因為不同試劑盒要求采用不同的波長。純水器應注意器濾芯、反滲透膜和純化柱子是否超出使用壽命，如果失效，立即更換，否則影響純水的質量。滅菌鍋的安全閥、溫度表、壓力表要定期校驗，以確保設備的安全和正常使用。移液器可用分析天平稱量所取純水的重量并計算的方法，來校正取液量。恒溫箱的電動機軸承應每半年加油一次，經常檢查恒溫箱所示的溫度和溫箱內實測溫度是否一致。

3.實驗室操作的規范。實驗室操作的規范性，直接影響著實驗結果的準確性。在血清學診斷中，一是應注意所用的器皿都要洗凈，配好的溶液需要進行滅菌，并注明日期和名稱，放置低溫或冷凍保存。二是所用的電子儀器設備在使用之前都應提前10分鐘打開，讓儀器預熱，達到最佳的工作狀態。三是在移液器的使用時，為獲得的較高的精度，吸頭最好預先吸取一次樣品溶液，然后正式移液；吸液時應保證槍頭內沒有氣泡；每次實驗后務必將刻度調整至最大，讓彈簧恢復原型以延長移液槍的使用壽命。四是對于所用溶液和試劑，盡量做到取多少用多少，對于取出又未用完的溶液或試劑，絕不能倒回瓶中。五是實驗中應注意控制好實驗環境溫度，通常溫度控制在20～25℃，對于特定的實驗要控制好相應的實驗環境溫度。

4.實驗室檢測中的生物安全。作為基層獸醫實驗室，一般不從事高致病性病原微生物實驗活動，但是在做人畜共患病檢測（比如布魯氏菌病血清學檢測）時對實驗室工作人員仍有潛在危險，實驗室的其他血清學監測的生物安全也有隱患。所以實驗室工作人員應提高防護意識，懂得生物安全對自身和環境的重要性，而且在實驗時應該做好防護措施。

對于實驗室環境應定期或不定期的通過紫外燈或消毒劑進行消毒；每次實驗結束后都應對實驗室、實驗臺面進行消毒，廢棄物不能隨便丟棄，對其消毒后，做統一處理；對于個人，應佩戴好手套、口罩、鞋套和實驗服，每次實驗結束都要洗凈雙手。

三、實驗室記錄

采樣記錄應一式兩份，一份隨樣品送實驗室，一份采樣單位備案。通常血清學實驗的采樣記錄，包括以下幾方面的內容：畜主的姓名、電話、畜禽場的地址、動物種類、數量、日齡和免疫情況。采樣記錄單一定要填寫詳實，因為它對實驗結果的分析起著很關鍵的作用。在實驗室血清學診斷中的實驗也應做好原始記錄，記錄應包括：檢測時間、樣品名稱、檢測項目、實驗方法、實驗設備、環境溫度和濕度、檢查結果以及檢查人員等。

四、結語

血清學診斷是基層獸醫實驗室主要進行的實驗，隨著畜牧業的發展和疫病譜的變化，基層獸醫實驗室應該在此基礎上，引進各種新設備、新方法、專業人員，開展更多實驗，為養殖業服務好，對提高動物疫病監測水平、提升預警預報能力、合理安排疫病防控措施、保證畜產品質量安全有重要意義。