犬冠狀病毒病的診斷與治療

王增輝（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

犬冠狀病毒病的診斷與治療

王增輝（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局 262200）

近年來，隨著寵物飼養(yǎng)量的迅速增加，類似犬瘟熱、犬細小病毒等傳染性疾病也日趨增多。如何快速準確診斷治療患病動物是目前基層獸醫(yī)工作者面臨的亟待解決的難題。在工作期間，遇到犬冠狀病毒病病例，對其進行了診療，效果良好，現(xiàn)將對患犬犬冠狀病毒的診斷和治療方法作一總結，以期為從事獸醫(yī)工作的同行能準確診斷和有效治療該病提供參考。

1 犬冠狀病毒病的基本特點

犬冠狀病毒（CCV）屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，病毒呈圓形或橢圓形，直徑在50～150nm左右，有囊膜，囊膜表面有長約20nm的纖突，病毒核酸為單股正鏈RNA，病毒囊膜內含有不分段的正股RNA，基因組大小為27～32kb，基因5′端的2/3是兩個大的開放閱讀框（ORF）la和lb，編碼兩個多聚蛋白誘導病毒復制酶的形成。ORFlb的下游有8～10個小ORF，表達完整的mRNA，并編碼結構蛋S（ORF2）、E（ORF4）、M（ORF5）、核蛋白（N）以及大量的假定非結構蛋白。核衣殼呈絲狀，直徑為9～13nm，螺旋對稱。電鏡負染可清楚地看到病毒粒子的冠，表面突起。衣殼由糖蛋白（S），膜蛋白（M），小膜蛋白（E）和核蛋白（N）4種結構蛋白組成。作為三聚體的棘突（S）蛋白，分子量180～220kD，主要誘導產生病毒的中和抗體（Gebauer等，1991），形成特有的病毒膜粒，其上有同細胞受體結合的病毒附件，使病毒-細胞融合。

犬冠狀病毒不耐熱，對乙醚、氯仿、苯酚、去氧膽酸鹽、次氯酸鹽及β-內酯敏感，易被福爾馬林、紫外線等滅活；反復凍融和長期存放易導致纖突脫落，使病毒感染性喪失。但在20～22℃的酸性環(huán)境（pH3.0）中不被滅活。在冬季其傳染性可持續(xù)數(shù)月。

病毒可在犬或貓的多種細胞上增殖，包括犬原代腎或胸腺細胞以及犬胸腺、滑液及纖維肉瘤（A72）的細胞系、貓腎原細胞系（CrFK）及胎貓成纖維細胞。通常在感染后2～3d產生細胞病變，但也有不產生者。A72細胞最為穩(wěn)定，且可產生空斑，細胞病變主要為出現(xiàn)腫大的異形細胞，有的可產生大合胞體。

2 犬冠狀病毒病的流行特點

犬冠狀病毒感染是由犬冠狀病毒引起犬急性胃腸炎的重要原因之一。既可單獨致病，也可與犬細小病毒、輪狀病毒和魏氏梭菌等病原混合感染，混合感染死亡率大大高于單獨感染。犬糞中的病毒是主要傳染源，發(fā)病率隨犬群的密度增加而增加，呈現(xiàn)急性胃腸炎綜合癥，表現(xiàn)為劇烈嘔吐、腹瀉、精神沉郁和食欲廢絕。

所有品種及年齡的犬都易感，還包括犬科的野生動物，如：郊狼、狐。其他非犬科動物未見感染CCV的報道，有些毒株可感染豬和貓。幼齡警犬（德國牧羊犬）最易感，而成年犬多為無癥狀感染。2～4月齡發(fā)病率最高，2～3日齡仔犬常成窩死亡。CCV感染的發(fā)病率較低，據(jù)報道，約為30%，其發(fā)生和嚴重程度常與斷乳、運輸、氣溫驟變、飼養(yǎng)條件惡化等應激因素和年齡及混合感染有關。病犬和帶毒犬的糞便中含有大量CCV，同時也有證據(jù)證明顯示CCV存在垂直傳播的可能性。

病犬和帶毒犬是本病的主要傳染源。經呼吸道、消化道隨口涎、鼻液、糞便等排毒，污染飼料、飲水、籠具和周圍環(huán)境，直接或見接地傳給易感動物。Keenan等（1976年）的實驗表明，CCV在糞便中可存活6～9d，在水中也可保持數(shù)日的傳染性，因此，一旦發(fā)病，很難制止傳播流行。CCV主要存在于感染犬的糞便，腸內容物、腸上皮細胞和腸系膜淋巴結內，但在健康犬的心、肺、肝、脾、腎及淋巴結中也發(fā)現(xiàn)有冠狀病毒樣粒子。

病毒非經腸接種并不引致腸道感染，且不排毒，盡管其血清抗體滴度較高，但并不能抵抗經口感染。經口感染的康復犬對同型毒株的再次感染有免疫力，但其血清抗體滴度可能不高，主要靠腸道IgA的保護作用。幼犬經母乳獲得的抗體可維持4～5周，一般滴度不高，但可阻斷病毒的感染。豬傳染性胃腸炎病毒及貓傳染性腹膜炎病毒人工感染的犬，并不能獲得保護免受本病的感染。

早期病例可見小腸局部發(fā)炎臌氣，后期病例出現(xiàn)整個小腸炎性壞死，腸系膜淋巴結出血水腫，腸系膜血管呈樹枝樣淤血，漿膜紫紅；腸粘膜脫落，腸內容物呈果醬樣，胃粘膜也見有出血；小腸常套疊；脾腫大；多數(shù)病犬不發(fā)熱，白細胞數(shù)略有降低，通常可在7～10d內康復。有些犬，特別是幼犬在發(fā)病的24～36h死亡。

3 犬冠狀病毒病的診斷方法

采用犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙（Antigen Rapid CCV Ag Test Kit）檢測CCV。該方法的原理：能以免疫色譜分析法定性地檢測犬糞便中的犬冠狀病毒抗原。試紙條表面有字母“T”和“C”作為測試紙的控制線。在提供任何樣品前，測試線和控制線在結果窗中都不顯示。控制線被用作程序控制。如果測試正常地完成，控制線試劑會工作，而且控制線會始終顯示。如果在樣品中含有足夠的犬冠狀病毒抗原，1條紫色的測試線會在結果窗中顯示。在測試線處綁定了特異性的犬冠狀病毒抗體用來捕捉和檢測該抗原。這些能使Antigen犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙以高準確度地識別犬糞便中的犬冠狀病毒抗原。

試驗所用的試紙，迅速、簡便和準確。準確率在98%以上。CCV抗原快速檢測試紙是定性地檢測，不分品種和年齡差異。避開了電鏡的負染、病毒的培養(yǎng)等過程，而且也節(jié)約了檢測用的時間和材料，在臨床上應用較廣。

3.1 檢測試紙

犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙。

3.2 患病寵物犬

前來就診的12只寵物犬。品種包括：可卡、哈士奇、德國牧羊犬、博美、雪納瑞、金毛。

3.3 診斷方法

臨床檢查病犬的精神、體溫、呼吸、有無嘔吐及腹瀉等臨床癥狀，詢問了解病犬年齡、是否免疫等情況，對病犬進行初步診斷。

實驗室診斷利用犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙進行檢測。

測試步驟：用棉簽收集犬類的糞便作為樣品→將棉簽浸入裝有1ml反應緩沖液的樣品收集管→將棉簽上的樣品和反應緩沖液充分混勻→取出試紙，將它平放于寬敞和干燥的表面→用提供的滴管取出收集管中的混合液→用滴管向樣品孔中緩慢并且精確地加入4滴混合液→當反應進行時，會看到紫色的條帶在試紙中間的結果窗中移動。如果1分鐘以后仍然沒有條帶移動，請再往樣品孔中加入1滴混合液→5～10min后判斷結果。不要超過20min，測試過程圖解見圖1。

結果判定：如果在結果窗的左面出現(xiàn)1根條帶說明測試是正常的。這條是控制線。結果窗的右面顯示測試結果。如果在結果窗的右面出現(xiàn)另1根條帶，這條是測試線。

陰性結果：如果在結果窗中只出現(xiàn)1根條帶說明是陰性結果見圖2。

圖1 犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙步驟

圖2 犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙陰性結果

圖3 犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙陽性結果

陽性結果：如果在結果窗中出現(xiàn)兩根條帶（“T”“C”），無論哪條先出現(xiàn)都表明陽性結果見圖3。

無效的結果：如果在反應開始后紫色條帶看不見，結果可被認為是無效的。可能使用方法不當或者試紙已經變質。推薦重新測試樣品見圖4。

4 治療方法

對于犬冠狀病毒病，一旦發(fā)生本病，按傳染病的規(guī)定防治措施進行，無特效藥物，以對癥治療為主，對患病犬進行靜脈輸液、止吐、消炎等以防脫水或繼發(fā)感染引起死亡。根據(jù)各患病犬的癥狀不同，分別對癥下藥，采用不同的處方，具體見表1。

表1 治療方法

圖4 犬冠狀病毒抗原快速檢測試紙無效結果

輸液治療療程一般7～10d，可以控制腹瀉和嘔吐等基本癥狀。以后，口服抗生素，一般為Marbocyl片劑，2mg/kg體重，連用10～25d。待飲食欲和大便正常時，可以口服驅蟲藥（汽巴或普沙）。

5 診斷結果

本病的臨床癥狀和流行病學與輪狀病毒感染相似，而且長于輪狀病毒，犬細小病毒等混合感染，診斷較為困難。因此，運用實驗室檢驗，如糞便病料的電鏡檢查，病毒分離或熒光抗體檢查對本病的確診具有重要意義。

臨床診斷結果，該病的發(fā)生物品種、年齡之分，患病犬幼犬較成年犬癥狀劇烈。嘔吐和腹瀉是本病的主要癥狀，初期先嘔吐未消化的食物，后吐黃色酸味粘液。繼而出現(xiàn)急性胃腸炎性腹瀉。糞便先稠后稀，最后成水樣。橙黃色，灰色或綠色。常混有粘液或暗黑色血液。精神沉郁，臥地懶動，強行趕走，步態(tài)搖擺。食欲大減或無食欲。鼻鏡干燥，迅速消瘦，眼球下陷，脫水癥狀明顯。成年犬癥狀輕微。見表2。

實驗室診斷結果，對12只CCV病犬進行糞便鏡檢和試紙檢測，診斷結果糞便鏡檢一般無明顯變化，試紙檢測CCV均呈陽性。具體見表3。

6 治療結果

12只CCV病犬，經過治療，死亡6只，成活6只，死亡率為50.0%；單獨感染6只，成活4只，死亡率為25%；混合犬細小病毒感染及繼發(fā)其它疾病的犬有7只，成活3只，死亡率為66.7%。其中（序號9～12）的4只犬是成窩發(fā)病，癥狀很典型。

7 治療與預后

目前沒有犬冠狀病毒病的特效藥，所以其治療現(xiàn)在仍以對癥和支持療法為主，主要是進行補液、抗菌、消炎、止吐止瀉和維持酸堿平衡等。同時對患病犬要求禁食禁水，防止食物等對胃腸道的進一步刺激而造成病情的惡性循環(huán)。治療過程中，若病犬同時出現(xiàn)嘔吐和腹瀉癥狀時，應先以治療嘔吐為主。在應用抗生素進行消炎的同時，應注意不要長時間地使用同一種抗菌素，也不應該從一開始就用最好的抗菌素，否則很容易產生抗藥性和依賴性。抗生素一般可建議使用2～3周左右。若病犬脫水極其嚴重及血常規(guī)指標很低時，采取輸入犬血的方法是十分有效的。

表2 臨床診斷結果

表3 實驗室診斷結果

表4 治療及預后

在病犬的基本癥狀控制后的恢復階段要注意：不要飼喂太多或是腐敗的食物，以防止其消化道癥狀復發(fā)，特別是幼犬。最好在醫(yī)生的建議下選擇一些專門對犬胃腸道具有保護和調節(jié)功能的處方類罐頭（i/d），同時食用一些提高免疫力的藥物（IgY）。溫度盡量保持在26～29℃。病犬未完全康復以前最好不要洗澡，盡量減少出門，以防止繼發(fā)其他疾病。成年犬的治愈率很高，一般不出現(xiàn)死亡，以上治療的兩只（6、8號）成年犬全部成活，而且預后良好。