三氮唑類抗真菌藥物的合成及其生物活性檢測

張崢++張建峰++謝小強

摘 要：為了探討三氮唑類抗真菌藥物的合成方法和生物活性檢測，將間二氟苯作為原料，采用傅里德-克拉夫茨反應（下簡稱“傅-克反應”）合成中間體物質，再經過縮合、亞甲基轉移、開環等合成反應制得氟康唑。選擇白色念珠菌和黑曲霉作為抑菌活性檢驗參照物，利用PDA培養法培養兩種真菌，接種合成氟康唑，并記錄抑菌活性。根據選擇的對照藥物和氟康唑抑菌活性對比實驗顯示，氟康唑和對照藥物對白色念珠菌的抑制作用非常明顯，但對黑曲霉的抑制作用不明顯，同時氟康唑的抑菌作用明顯高于對照藥品。由此可知，三氮唑類抗真菌藥物是一種合成抗菌藥物，其合成過程可在實驗室內完成，較為簡便，同時這種藥物對真菌的抑制作用比較明顯，具有極大的臨床應用價值。

關鍵詞：唑類抗真菌藥物；合成方法；氟康唑；中間體物質

中圖分類號：TQ463 文獻標識碼：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2015.22.098

唑類抗真菌藥物早在20世紀60年代末就已經被研發和應用，發展速度較快，對真菌的抑制作用非常好，但隨著藥物應用范圍的不斷擴大，耐藥菌株數量也在不斷增加，因此研究者還在不斷完善這類藥物，以求研制出藥效更好的藥物。本文主要研究三氮唑類抗真菌藥物的合成方法和生物活性檢驗效果，具體如下。

1 材料及方法

1.1 三氮唑類抗真菌藥物的合成

1.1.1 實驗材料

合成實驗原料為間二氟苯，實驗儀器包括恒溫水浴鍋、蒸發儀、真空泵、紫外線分析儀、攪拌器、烘干箱、調壓器、紅外光譜儀、核磁共振儀、熔點毛細管。

1.1.2 實驗原理

以間二氟苯為原料，通過傅-克反應制得中間體物質（2-氯-2，4-二氟苯乙酮），之后利用縮合反應將1，2，4-三氮唑（一分子量）接入中間體當中，得到2，4-二氟-2（1H-1，2，4-三氮唑-1）-苯乙酮鹽酸鹽。將實驗環境調節為堿性，利用碘化后的三亞基亞砜對鹽酸鹽的羧基進行亞甲基轉移反應，制備得到甲磺酸鹽，最終利用三氮唑將氧環開環后即可得到氟康唑。

1.1.3 實驗方法

將11.3 g間二氟苯藥粉與14.7 g無水三氯化鋁混合，在冰浴下攪拌均勻，緩慢加入氯酰氯，然后將溶液轉入室溫環境中連續攪拌3 h，攪拌后將混合液倒入冰水當中。萃取二氯甲烷，并干燥無水硫酸鈉，過濾和蒸發之后得到的白色針狀結晶體即為中間體物質。

提取氟康唑的具體實驗步驟為：①混合碳酸氫鈉和三氮唑，然后用甲苯溶解混合物質，并將溶解后的物質放入三口瓶中加熱回流；②用甲苯溶解中間體物質，然后將溶解液滴入三口瓶當中，反應生成的水利用分水器分離，并將溶液溫度冷卻到室溫，采用減壓蒸發的方式去除甲苯，再用乙酸乙酯和正己烷同體積混合液洗滌得到的固體，最終得到淡黃色結晶物質；③利用甲苯溶解該淡黃色結晶物質后進行濃縮，加入乙酸乙酯、甲磺酸，析出甲磺酸鹽結晶體；④使用無水碳酸鉀溶解該甲磺酸鹽結晶體，并加入三氮唑，將反應溫度設定為90 ℃，并連續攪拌4.5 h，冷卻后加入氯仿進行提純，并用水清洗，最后干燥硫酸鎂，減壓蒸發得到的結晶物即為氟康唑。

1.2 氟康唑的體外抑菌活性實驗

1.2.1 實驗材料

實驗材料為合成后的氟康唑藥劑，對照藥劑為2-（2，4-二氟苯基）-3-（1H-1，2，4-三唑-1-基）-1，2-丙二醇（下簡稱“對照藥劑”）。實驗真菌為白色念珠菌和黑曲霉。實驗儀器有超凈工作臺、恒溫培養床、滅菌器、電子天平和恒溫水浴鍋等。

1.2.2 實驗方法

將200 g馬鈴薯切成小塊放入1 000 mL水當中，將溫度設定為80 ℃，浸泡超1 h。用紗布過濾液體，并在100 Pa壓力下滅菌，得到馬鈴薯液。在馬鈴薯液中加入2 g葡萄糖，煮沸后放入瓊脂，邊加熱邊補充水分，在二次高壓滅菌后制得PDA培養基。

在培養基斜面上分別接種白色念珠菌和黑曲霉，然后在29 ℃的恒溫培養箱內進行培養。培養時間控制在24 h左右，這樣就可以使其保持在對數生長期。利用接種環挑出培養后的菌株，放入無菌蒸餾水當中充分震蕩，使其能夠混合均勻。

選擇氟康唑和對照藥劑各10 mg，用氯仿進行溶解，然后將菌液接種在無菌培養基上，并用濾紙蘸取藥液，用吹風機將其風干后放在菌液接種部位的正中央，在恒溫培養箱內進行培養，時間為2 d，觀察接種菌落的變化。

2 結果

實驗結果顯示，在同樣的接種濃度下，氟康唑和對照藥劑對白色念珠菌均有抑制作用，但兩種藥劑對黑曲霉的抑制作用不明顯，其中，氟康唑的抑制活性明顯高于對照藥劑。將抑制后的菌株烘干，氟康唑抑制的白色念珠菌干重為0.024 g，而對照藥劑抑制的白色念珠菌干重為0.051 g。

在抑制前，黑曲霉的干重為0.099 g，抑制后，氟康唑的干重為0.053 g，而對照藥劑為0.072 g。由此可知，兩種藥劑對黑曲霉的活性也有一定的抑制作用，但相比于白色念珠菌，對黑曲霉的抑制性較低。其中，氟康唑對白色念珠菌和黑曲霉的抑制作用均大于對照藥劑。

3 討論

三氮唑類藥物屬于抗生素之一，其主要針對真菌進行治療。早在20世紀60年代末期，國際醫學界就研發出了克霉唑和咪康唑這兩種唑類藥物，并逐步衍生出三氮唑類藥品，其中以氟康唑、伊曲康唑等的應用最為廣泛。但隨著這些藥物應用范圍的不斷擴大，氟康唑的抗菌菌株數量大幅度提升，而伊曲康唑在服用后所產生的不良反應率較高，因此現代醫學者還在不斷探索新的藥物。

氟康唑對真菌的抑制作用明顯，且在發揮藥效的過程中不會對人體健康細胞造成影響，也不會破壞細胞膜的功能和結構。本次實驗驗證了氟康唑能夠在實驗室內合成，生產成本較低，能夠滿足現代大批量的生產；同時，這一藥物對白色念珠菌和黑曲霉具有較好的抑制作用，尤其對白色念珠菌的抑制作用突出，臨床應用效果更好。

參考文獻

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〔編輯：王霞〕