支原體肺炎患兒外周血Treg/Th17細(xì)胞平衡變化及臨床意義*

熊遠(yuǎn)青 黃河 姚霖 王筱璐 唐碧蓮 湯慧麗

支原體肺炎患兒外周血Treg/Th17細(xì)胞平衡變化及臨床意義*

熊遠(yuǎn)青①黃河①姚霖①王筱璐①唐碧蓮①湯慧麗①

目的：檢測不同時期支原體肺炎（MPP）患兒外周血Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β、IL-10、IL-17和IL-6水平，觀察其變化規(guī)律，探討MPP急性期免疫失衡發(fā)病機(jī)制。方法：40例MPP患兒及20例非MP感染性支氣管肺炎在急性期（發(fā)?。?周）及病程4周時空腹抽取外周靜脈血5 mL，使用流式細(xì)胞儀檢測Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞的百分率，ELISA方法檢測TGF-β、IL-10、IL-17和IL-6細(xì)胞因子水平，同時與20例健康體檢兒進(jìn)行比較。結(jié)果：急性期MPP組Treg細(xì)胞百分率低于正常對照組（P＜0.05）；病程4周時，MPP組Treg細(xì)胞百分率明顯提高，MPP組TGF-β、IL-10水平低于非MP感染組及正常對照組（P＜0.05）。急性期及病程4周時，MPP組患兒Th17細(xì)胞百分率及IL-17、IL-6水平均高于非MP感染組和正常對照組患兒（P＜0.05）。結(jié)論：兒童MPP感染與免疫調(diào)節(jié)紊亂密切相關(guān)，急性期存在明顯的免疫失衡，Treg/ Th17細(xì)胞失衡及其相關(guān)效應(yīng)因子的表達(dá)在兒童MPP感染起到重要的作用。

肺炎支原體肺炎； Treg細(xì)胞； Th17細(xì)胞； 兒童

First-author’s address：Shenzhen Futian People’s Hospital，Shenzhen 518033，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.36.020

肺炎支原體肺炎（MPP）近年來發(fā)病年齡明顯提前，發(fā)病率增加且伴有廣泛多系統(tǒng)的肺外并發(fā)癥。研究認(rèn)為MP感染與免疫有關(guān)，存在機(jī)體免疫反應(yīng)、免疫逃逸、免疫調(diào)節(jié)、免疫抑制等。但MP感染的發(fā)病機(jī)理仍不十分清楚。雖然MP是呼吸道細(xì)胞外病原，但也存在于呼吸道細(xì)胞內(nèi)，抗生素很難完全將其胞內(nèi)菌清除消滅，如抗生素應(yīng)用時間過短，治療不徹底則容易復(fù)發(fā)。本研究通過檢測不同時期MPP患兒外周血Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞及其分泌細(xì)胞因子IL-10、TGF-β、IL-17及IL-6水平，觀察支原體肺炎患兒外周血Treg/Th17細(xì)胞平衡變化，探討MPP急性期免疫失衡發(fā)病機(jī)制，為以后的免疫治療提供理論依據(jù)，并對判斷MPP感染的嚴(yán)重程度和預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月-2013年1月本院兒科收治的急性期MPP患兒40例為試驗組，其中男21例，女19例，平均年齡（5.6±2.8）歲，病程2周以內(nèi)，ELISA方法檢測血清特異性MP-IgM，≥1∶160為陽性。診斷符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》（第7版，胡亞美等主編）診斷標(biāo)準(zhǔn)。陽性對照組：非MP感染支氣管肺炎患兒20例（同期本院住院，采用15種呼吸道病原篩查及痰培養(yǎng)檢查，排除混合感染）。正常對照組：健康體檢兒20例（來自本院門診并經(jīng)家長同意），均無慢性病史，無哮喘史及過敏史，近2周內(nèi)無感染病史及服用影響免疫藥物。入選對象均排除先天性疾病、免疫缺陷及營養(yǎng)不良等。三組研究對象的一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 材料 TGF-β、IL-10、IL-17及IL-6 ELISA試劑盒（美國R&D公司）?？谷藛慰寺】贵w（美國貝克曼 Beckman公司）。流式細(xì)胞儀、溶血制備儀（美國貝克曼庫爾特公司），酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）。

1.3 標(biāo)本采集、檢測 MPP患兒在急性期（發(fā)病2周內(nèi)）、病程第4周空腹抽取靜脈血5 mL（EDTA抗凝）；非MP感染支氣管肺炎患兒（發(fā)病7 d內(nèi)）、正常對照組：采血2 mL，離心，-70 ℃冷凍備用。流式細(xì)胞儀檢測Treg及Th17細(xì)胞的百分率，ELISA方法檢測TGF-β、IL-10、IL-17及IL-6等細(xì)胞因子水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，組間比較采用q檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Treg、Th17細(xì)胞的百分率 經(jīng)檢測，MPP組急性期Treg的細(xì)胞百分率低于正常對照組（P＜0.05），MPP組急性期與非MP感染組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。病程4周時MPP組和非MP感染組與急性期比較均有提高（P＜0.05）；在急性期和病程4周時MPP患兒的Th17細(xì)胞百分率均高于非MP感染組及正常對照組患兒（P＜0.05）；急性期非MP感染組患兒Th17細(xì)胞的百分率高于正常對照組（P＜0.05），病程4周時與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 血漿TGF-β、IL-10水平 急性期MPP組患兒TGF-β、IL-10水平低于非MP感染組及正常對照組（P＜0.05）；病程4周時MPP組及非MP感染組患兒TGF-β、IL-10水平均有明顯提高（P＜0.05），但MPP組低于非MP感染肺炎組及正常對照組（P＜0.05），見表2。

表1 各組外周血Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞的比較（±s） %

表1 各組外周血Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞的比較（±s） %

*與正常對照組比較，P＜0.05；△與非MP感染組比較，P＜0.05

病程4周組別急性期TregTh17TregTh17正常對照組（n=20）7.92±1.782.32±0.477.83±1.782.32±0.47非MP感染組（n=20） 4.61±1.61*2.59±0.52*6.74±1.74*2.34±0.53 MPP組（n=20） 4.52±1.15*3.79±0.67*△5.62±1.39*△4.72±0.45*△F值31.2356.2218.0169.07 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.05

表2 各組外周血細(xì)胞因子TGF-β、IL-10表達(dá)水平的比較（±s） pg/mL

表2 各組外周血細(xì)胞因子TGF-β、IL-10表達(dá)水平的比較（±s） pg/mL

*與正常對照組比較，P＜0.05；△與非MP感染組比較，P＜0.05

IL-10組別TGF-β急性期病程4周急性期病程4周正常對照組（n=20）2127.12±396.092465.23±331.15124.15±16.13120.12±16.24非MP感染組（n=20） 1576.50±357.41*2198.11±437.43 113.64±18.41*126.02±19.29 MPP組（n=20） 1217.14±364.65*△1653.87±342.65*△91.68±8.21*△106.31±24.78*△F值1321.721134.23511.76334.17 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

2.3 血漿IL-17、IL-6水平 急性期及病程4周時MPP患兒IL-17、IL-6水平均高于非MP感染肺炎組和正常對照組（P＜0.05）；非MP感染肺炎組患兒IL-17、IL-6水平在急性期高于正常對照組（P＜0.05），病程4周時與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。病程4周時，MPP患兒IL-17、IL-6水平較急性期升高（P＜0.05），非MP感染肺炎組患兒IL-17、IL-6水平較急性期下降接近正常對照組（P＜0.05），見表3。

表3 各組外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-6表達(dá)水平（±s） pg/mL

表3 各組外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-6表達(dá)水平（±s） pg/mL

*與正常對照組比較，P＜0.05；△與非MP感染組比較，P＜0.05

IL-6組別IL-17急性期病程4周急性期病程4周正常對照組（n=20）56.25±12.1156.25±12.114.72±1.234.72±1.23非MP感染組（n=20） 59.24±12.46*57.08±11.28 9.54±2.37*4.76±1.21 MPP組（n=20） 77.71±11.13*△84.57±15.43*△18.17±5.71*△24.43±5.68*△F值445.67354.78235.16335.49 P值＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

3 討論

Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞在機(jī)體免疫和疾病發(fā)生中起著不同的作用。Treg細(xì)胞作為一種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的免疫負(fù)調(diào)節(jié)功能，對維持機(jī)體免疫功能穩(wěn)定起著重要的作用［1］。Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞具有共同的起源，像Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞一樣，Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞在分化及其功能上呈互相抑制關(guān)系［2］。另外，Treg細(xì)胞不但可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的發(fā)育，而且可分化為Th17細(xì)胞，Treg細(xì)胞向Th17細(xì)胞的轉(zhuǎn)化可能是機(jī)體的一個生理性調(diào)節(jié)機(jī)制［3］，正常狀態(tài)下，Treg細(xì)胞可以調(diào)控機(jī)體自身免疫，發(fā)生感染時，其分泌的炎性細(xì)胞因子如IL-1β及IL-6，可誘導(dǎo)Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Th17細(xì)胞，從而產(chǎn)生清除感染所必需的有力的免疫應(yīng)答。

本研究顯示，急性期MPP組患兒外周血Treg細(xì)胞百分率低于正常對照組（P＜0.05），IL-10、TGF-β水平低于非MP感染肺炎組及正常對照組（P＜0.05）。MPP急性期外周血Treg細(xì)胞數(shù)量及IL-10、TGF-β水平均明顯降低，提示在MPP急性期Treg細(xì)胞的免疫抑制作用降低。Th17細(xì)胞百分率均高于非MP感染肺炎組和正常對照組（P＜0.05），在急性期及病程4周時，MPP患兒IL-17、IL-6水平均高于非MP感染肺炎組和正常對照組（P＜0.05），推測Th17細(xì)胞可能參與了MPP病理生理的發(fā)展過程。Th17和Treg細(xì)胞正常機(jī)體狀態(tài)下兩者相互制約，其免疫平衡有利于維持機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)［4］。研究證實(shí)Th17/Treg免疫平衡與MPP的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)［5］。

病程4周時MPP組Treg細(xì)胞的百分率與正常對照組比較有顯著提高，而MPP組、非MP感染組Treg細(xì)胞的百分率仍低；MPP組及非MP感染組患兒TGF-β、IL-10水平有顯著提高，MPP組低于非MP感染組及正常對照組。提示MPP急性期存在明顯的免疫失衡，Treg細(xì)胞數(shù)量下降引起的免疫抑制功能下降，一方面可導(dǎo)致免疫失衡，而另一方面有利于免疫系統(tǒng)清除支原體。Treg細(xì)胞可通過調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答和MP感染之間的平衡，參與MPP的發(fā)病機(jī)制，從而為MP感染的免疫治療提供了新的思路。

MPP患兒病程4周時Th17細(xì)胞的百分率較急性期升高，IL-17、IL-6水平較急性期升高（P＜0.05），非MP感染肺炎組患兒Th17細(xì)胞百分率、IL-17、IL-6水平顯著下降接近正常對照組?？赡苡捎贗L-17具有趨化炎性細(xì)胞的作用，可以連接固有免疫和適應(yīng)性免疫［6］，Th17細(xì)胞在一些感染早期可能具有保護(hù)作用，而Th17細(xì)胞在一些感染早期可能具有保護(hù)作用，而一旦不能完全清除病原體，Th17細(xì)胞的這種炎性特征則有可能使感染進(jìn)入慢性階段，有關(guān)Th17細(xì)胞在一些病毒及細(xì)菌感染性疾病中也有研究報道［7］。

綜上所述，兒童MPP感染與免疫調(diào)節(jié)紊亂密切相關(guān)，急性期存在明顯的免疫失衡，Treg/Th17細(xì)胞失衡及其相關(guān)效應(yīng)因子的表達(dá)在兒童MPP感染起到重要的作用。因此，MP感染不僅需要抗MP治療，還應(yīng)根據(jù)不同的臨床表現(xiàn)和疾病進(jìn)展情況，加強(qiáng)對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和治療；Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞及其相關(guān)效應(yīng)因子可以用于MPP的輔助診斷和治療監(jiān)測。

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Changes and the Clinical Significance of the Balance of Treg/Th17 Cells in Peripheral Blood of Children with Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia

XIONG Yuan-qing，HUANG He，YAO Lin，et al//Medical Innovation of China，2015，12（36）：059-061

Objective： To observe the percentages of Treg cells and Th17 cells ， the levels of IL-10，TGF-β，IL-17 and IL-6 in peripheral blood of children with mycoplasma pneumoniae pneumonia and explore the role of them

Mycoplasma pneumoniae pneumonia； Th17 cell； Treg cell； Child

2015-09-04） （本文編輯：蔡元元）

國家繼續(xù)教育發(fā)展中心課題項目（2013-065-06-12）；深圳市衛(wèi)人委科研項目（201303162）

①廣東省深圳市福田區(qū)人民醫(yī)院 廣東 深圳 518033

熊遠(yuǎn)青

in pathogenesis of MPP. Method： 40 children with MPP，20 children with non- MPP and 20 healthy children were enrolled.The percentages of Treg cells and Th17 cells in peripheral blood were detected by flow cytometer（FCM），and the levels of IL-10，TGF-β，IL-17 and IL-6 in plasma were determined by ELISA， at the same time， compared with 20 cases healthy children. Result： In the acute stag， The percentage of Treg cells in children with MPP were significantly lower than healthy infants（P＜0.05）. The percentage of Treg cells in the 4th week were significantly higher than those in the acute stag， the levels of IL-10 and TGF-βin children with MPP were significantly lower than those in children with non- MPP and healthy infants in the acute stag and the 4thweek（P＜0.05）. The percentage of Th17 cells and the levels of IL-17 and IL-6 in children with MPP were significantly higher than those in children with non- MPP and healthy infants in the acute stag and the 4thweek（P＜0.05），while the percentage of Th17 cells and the levels of IL-17 and IL-6 in children with non- MPP were significantly low in the 4thweek， it was not significant difference between the children with MPP and the children with non-MPP. Conclusion：There is markedly mimunoresponsiveness unbalance in acute phase of MPP. Treg cell ，Th17 cells， IL-10， TGF-β， IL-17 and IL-6 may be involved in pathogenesis of MPP.