茶餅病的發生規律及病原菌的生物學特性研究

譚榮榮+毛迎新+龔自明

摘要：系統調查了湖北地區茶餅病（Exobasidium vexans Massee）的消長規律與溫濕度、品種、海拔高度、地形地勢等因素的關系。結果表明，該病在湖北茶區的發生流行期為6～8月，在海拔500 m以上的陰坡茶園發病嚴重。同時對分離純化的茶餅病菌進行生物學特性研究，發現擔孢子在15～32 ℃的范圍內均能萌發，孢子萌發最適溫度是25 ℃；在pH 3～7的范圍內擔孢子均能萌發，適宜生長的pH為5～6；茶樹不同品種與抗病性存在一定的關系。該結果為進一步研究茶餅病病害流行及防控提供理論依據。

關鍵詞：茶餅病（Exobasidium vexans Massee）；發生規律；生物學特性

中圖分類號：S432.4+4；Q934 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）20-5027-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.20.026

Studies on the Occurrence Law of Tea Blister Blight and Biological Characteristics

of Exobasidium vexans Massee

TAN Rong-rong， MAO Ying-xin， GONG Zi-ming

（Institute of Fruit and Tea Hubei Academy of Agricultural Sciences/Hubei Tea Engineering Technology Research Center，

Wuhan 430064， China）

Abstract：The relationships of the dynamics of tea blister blight natural population and the humidity，varieties， altitude， terrain and other factors was systematically investigated. The results showed that the occurrence of epidemic disease was from June to August in Hubei province. Moreover， the disease would become more serious above elevation of 500 meters in shady tea garden. The biological characteristics of Exobasidium vexans Massee was studied and spores could germinate between 15～32 ℃，pH 3～7；The optimal temperature was 25 ℃ and the optimal pH was 5～6， respectively. Different varieties of tea and disease resistance were closely related，the result may provide theoretical basis for disease prevention and control in further work.

Key words：tea blister blight（Exobasidium vexans Massee）； occurrence law； biological characteristics

茶餅病（Exobasidium vexans Massee）是一種危害茶樹嫩梢嫩葉的重要病害，在印度、斯里蘭卡、印度尼西亞、日本等國都曾因茶餅病的流行造成過毀滅性的損失。近年來隨著產業結構的調整和種植水平的不斷提高，茶餅病的發生逐漸加重，每年因茶餅病的發生危害減產20%～30%。病葉制成的干茶味異常苦，葉底渾暗，品質下降[1]。茶餅病屬于低溫高濕型病害。江楚平等[2]研究發現，濕度對茶餅病的影響尤為顯著。當空氣相對濕度高于80%時，擔孢子就會借風傳播到嫩葉或新梢上，遇水滴萌發，侵入后經3～18 d潛育期形成新病斑，然后長出子實層。擔孢子成熟后飛散傳播進行多次再侵染[3]。近年來，該病在湖北省發生面積日益擴大。本研究于2013～2014年度通過對發生茶餅病嚴重的湖北省不同茶區進行系統調查，從品種、環境等方面分析茶餅病的發生特點及其影響因子，并對茶餅病病原菌生物學特性進行了探討，旨在為科學防治茶餅病提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

調查地點設在恩施、宜昌和十堰等主產茶區，采集病葉的病斑正面呈淡黃色，茶泡扁圓至圓形中空，白色疏松海棉狀質地，厚約2～3 mm，尚殘留有葉片的下表皮。其上布滿白色粉末狀子實層。

1.2 培養基

馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA）：稱取馬鈴薯200 g，去皮，用刀切成1 cm大小方塊，放入去離子水里煮沸30 min，用4層紗布過濾，將濾液繼續放在電爐上加熱，同時加入18 g瓊脂，用玻璃棒不停攪拌直到瓊脂完全溶解，再加入葡萄糖20 g，溶化后補足去離子水至1 000 mL，然后分裝入5個三角瓶內。

馬鈴薯葡萄糖茶汁培養基：稱取馬鈴薯200 g，去皮，用刀切成塊，放入去離子水里煮沸30 min，用4層紗布過濾，同時取10 g新鮮油茶葉片加入少許去離子水，放在電爐上加熱，使葉片內的汁充分溶于去離子水中再過濾，將2部分濾液混合加熱后加入瓊脂18 g，攪拌至完全溶解，最后加入葡萄糖20 g，溶化后補足去離子水至1 000 mL，然后分裝入5個三角瓶內[3，4]。endprint

1.3 調查方法

在調查區隨機選擇一行茶蓬為調查點。每點隨機選取新梢的芽下第3葉，調查100片葉，記錄病葉數及各級病葉數，計算發病率和病情指數。

采用闕全生[5]、江楚平等[6]、鄧欣等[7]使用的茶餅病分級標準。病情指數分級標準為：0級，整個芽梢無病斑；1級，葉上有l～2個病斑；3級，葉上有3～4個病斑或病斑占葉面積1/3以下；5級，葉上有5～7個病斑或病斑占葉面積1/2；7級，葉上有8個以上病斑或病斑占葉面積2/3以上，葉柄或嫩梢上有病斑者。

1.4 病原菌分離、純化及鑒定

在采摘的茶泡里選取部分較幼嫩、生命力旺盛，沒有被其他真菌污染的茶餅病病斑，在無菌操作臺上用滅菌手術刀切取5 mm×5 mm組織，葉片背面朝下粘于PDA平板蓋上，置于25 ℃培養箱（中興PGX型）中光照培養，讓擔孢子自由彈落；或者在無菌操作臺上用挑針輕刮白色子實層于培養基上，25 ℃倒置光照保濕培養。待平板上長出菌絲后，在邊緣挑取菌絲尖端移至新鮮PDA平板上培養后鏡檢[4，8]。

獲得純化菌株后，回接到茶樹嫩葉上，當產生茶餅病癥狀，并產生白色子實層時，從發病的離體葉片病斑上重新分離得到該菌株。

1.5 孢子懸浮液的制備

將純化的病原菌接種在PDA培養基上，在25 ℃的恒溫箱中培養5 d，然后加入適量含有0.05%吐溫-80的無菌水，用無菌手術刀將孢子刮下，經無菌紗布過濾后配成含孢子2×107～5×107個/mL的懸浮液[9]。

2 結果與分析

2.1 茶餅病的發生規律

通過連續2年對湖北省茶區茶餅病發生規律的系統調查，查明茶餅病屬于低溫高濕型病害。5月隨著氣溫升高，降雨量增加，茶樹嫩葉上出現淡黃色的病斑；當6月空氣濕度達到80%以上時，受害茶樹增多，平均發病率達15%～35%；7～8月降雨量最多，溫度適宜，擔孢子大量釋放，達到發病高峰期；9～10月，氣溫下降，空氣濕度減小，擔孢子難以釋放；11月平均溫度低于15 ℃，茶樹停止生長，病害不再繼續發生，擔孢子開始越冬。

2.2 影響茶餅病發生的其他因素

2.2.1 發病與茶樹品種的關系 在宜昌、恩施、十堰等海拔1 000 m左右的茶園調查（表1）發現，鄂茶1號和福鼎大白抗病性較強，群體品種抗性中等，大葉品種最易感病；室內人工接種試驗表明，鄂茶1號和福鼎大白的平均發病率為10%左右，群體品種可達19%，而茶樹持嫩性較強的平湖早和十堰大葉種發病率高達53%和46%，特別是嫩度較高的1芽2葉的嫩梢，極易感染，且病斑擴展速度較快。結果表明，茶餅病的發病程度（感病率）與茶樹品種有一定的關系。

2.2.2 發病與海拔高度的關系 茶餅病屬高山型病害，在海拔500 m以上地區才有發生。在調查中發現，海拔400 m左右的茶園偶有發生，隨著海拔高度的增加，茶餅病的病情指數從1.67升至31.00，危害逐步加重。這是因為海拔較高的茶園，常年處于低溫多霧的環境下，日照少，濕度大，有利于擔孢子的萌發與釋放。

2.2.3 發病與茶園坡向的關系 調查表明，茶餅病的發生受小氣候影響很大，同一地區不同地形地勢的茶園，茶餅病的發生程度不同[10]。在同一海拔高度（1 000 m）的群體種茶園，背陰茶園發病率高達54%，遠遠高于陽坡茶園20%的發病率。

2.2.4 發病與茶園修剪的關系 修剪時期與病害發生有明顯的關系，因此掌握修剪時期是一項重要的避病措施。在茶樹生長季節不宜進行修剪，避免茶樹代謝旺期長出大量的幼嫩芽葉給病原菌提供適宜的侵染源。

2.3 病原菌生物學特性觀察

2.3.1 茶餅病菌的菌落形態 分別于2013年6月和2014年6月采集宜昌興山和太平溪群體種上的茶餅病病葉，以 PDA 為基礎培養基分離病原菌，并采用柯赫氏證病律驗證所分離到的菌株。菌株保存于湖北省農業科學院果樹茶葉研究所茶植保實驗室，編號為YC-1、YC-2。

在25 ℃的恒溫條件下，YC-1和YC-2在馬鈴薯葡萄糖茶汁培養基上生長性狀一致，菌落圓形，邊緣不整齊，菌絲呈白色天鵝絨狀略具光澤，正面乳白色，背面茶黃色，生長緩慢，20 d后，菌落直徑為16～20 mm（圖1）。

2.3.2 茶餅病菌擔子及擔孢子形態 在16×40倍光學顯微鏡下觀察，擔子頂部著生擔孢子，無色，腎形或橢圓形，有無膈和有膈之分，無膈擔孢子大小約（9.0～13.0） μm×（3.0～4.0） μm（圖2）。

2.3.3 溫度對擔孢子萌發的影響 將孢子懸浮液接種于載玻片上，置于10～37 ℃不同溫度下進行萌發，于12 d后檢查孢子萌發率，重復3次。通過顯微鏡觀察讀數，計算擔孢子的萌發率（圖3）。結果表明，擔孢子在15～32 ℃的范圍內均可萌發，最適溫度為25 ℃，高于35 ℃停止萌發。

2.3.4 不同光照對擔孢子萌發的影響 培養箱溫度設置為25 ℃，用半光照（12/12 h，光照/黑暗，交替處理）、黑暗、全光照連續處理24 h，每種處理重復3次，孢子萌發結果見表3。由表3可知，3種條件下，擔孢子均可萌發，其中半光照條件下孢子的萌發率最高，與處于黑暗狀態的孢子萌發率差異極顯著，全光照和半光照條件下孢子萌發率無顯著性差異。由此可見，茶樹常年處在高山多霧，日照少的自然條件下，是茶餅病嚴重發生的原因之一。

2.3.5 pH對擔孢子萌發的影響 將孢子懸浮液點接至pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的PDA培養基中，置于25 ℃恒溫箱中進行無光照培養，7 d后測量菌落直徑，每個處理3次重復。擔孢子在pH 3～7的范圍內均可萌發，其適宜萌發的pH范圍為5～6（圖4），在pH小于3或大于8時擔孢子停止萌發。

3 小結與討論endprint

茶餅病在湖北茶區從4月下旬開始發病，一直持續到10月上旬，給茶葉生產造成嚴重的危害。茶餅病發生流行時期與危害程度在不同地區、不同年份均有不同[11]。發病時期與發病程度取決于外界環境條件與茶樹品種和茶園管理情況的綜合影響。根據在湖北茶區近兩年的觀察結果，該病的發生流行主要取決于2個因素：一是有大量嫩梢嫩葉存在，二是溫和濕潤的氣候條件。

2013～2014年茶餅病害調查中發現，2014年茶餅病發生較2013年遲，但由于5～7月雨水較往年多，氣溫持續走低，使該病發生高峰持續周期長。7月底至8月高溫達35 ℃，病害開始越夏。入秋后，由于病害越夏基數大，溫度適宜，又再次形成發病小高峰。

茶餅病菌在培養基上生長緩慢，屬較難分離培養的病原物。選擇適宜的分離方法和培養基是提高分離效率的有效方法。郭春秋等[3]采用常規方法在PDA+新鮮油茶葉片培養基上得到該病原菌分離物。在本研究中采用此法沒有獲得目標菌，而是利用擔孢子自身彈射能力使其在馬鈴薯葡萄糖茶汁培養基上生長并產生擔孢子。對病原菌進行培養發現，菌絲在 15～32 ℃范圍內均可生長，當溫度為35 ℃時，病菌停止生長，說明茶餅病菌適宜于中低溫環境，與病害在田間發生溫度一致。病菌在偏酸性的環境中均能生長，最適宜的pH范圍為5～6。這與茶樹生長所需的土壤的pH相近。因此，寄主體內的弱酸性環境是否是引發茶餅病的因素之一還有待進一步的研究和證實。不同光照條件對茶餅病菌菌落生長有顯著的影響，25 ℃時，光周期為12 h，孢子萌發率較黑暗條件和全光照條件高，說明弱光有利于病菌生長，更有利于其產孢。本研究首次對湖北省茶主產區發生茶餅病害的發生規律及其病原菌生物學特性進行了探究，該研究結果可為制定中國茶餅病害的防治措施奠定基礎。

參考文獻：

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