硝酸咪康唑乳膏中防腐劑測定方法的建立

劉燕

（陜西省榆林市藥品檢驗所，陜西榆林719000）

硝酸咪康唑乳膏中防腐劑測定方法的建立

劉燕

（陜西省榆林市藥品檢驗所，陜西榆林719000）

目的建立測定硝酸咪康唑乳膏中防腐劑含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（72∶28）為流動相，檢測波長為235 nm。結果苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯的檢出限分別為4.77，5.26，10.24 ng，進樣量線性范圍分別12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg，相關系數分別為0.999 96，0.999 97，0.999 91（n=6）。結論該方法操作簡單、重復性好、檢測結果準確，能更好地檢測硝酸咪康唑乳膏中防腐劑的含量。

硝酸咪康唑；防腐劑；高效液相色譜法；含量

硝酸咪康唑為咪唑類廣譜抗真菌藥，對許多臨床致病真菌如白色念珠菌、新生隱球菌、芽生菌、球孢子菌、擬酵母菌等深部真菌和一些表皮真菌及酵母菌等均有良好的抗菌作用，還對葡萄球菌、鏈球菌和炭疽桿菌等革蘭陽性菌有抑菌作用［1-3］。硝酸咪康唑乳膏作為外用多劑量制劑，生產廠家為確保產品的穩定性，往往會添加不同種類和劑量的防腐劑。本研究中收集了市場上37家生產企業的產品，建立了能同時測定硝酸咪康唑乳膏中可能添加的3種防腐劑的高效液相色譜（HPLC）法，為更好地控制產品質量提供了有效的檢測方法。現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀；Empower工作軟件；賽多利斯BP211D型電子分析天平（精度0.01 mg）。硝酸咪康唑乳膏（37家生產企業市售樣品共146批）；苯甲酸對照品（批號為100870-200801），山梨酸對照品（批號為100870-200801），羥苯乙酯對照品（批號為100870-200801），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純（Merck公司），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果［4-5］

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（72∶28）；檢測波長：235 nm；流速：1.0 mL/min。理論板數按苯甲酸峰計算不低于5 000，苯甲酸峰與山梨酸峰分離度不低于2.0。精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯對照品適量，加乙醇溶解并稀釋成質量濃度分別為0.05，0.02，0.1 g/L的溶液，作為混合對照品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀。結果色譜圖中苯甲酸峰與山梨酸峰的分離度為4.7（見圖1）。

2.2 溶液制備

取供試品內容物約2.5 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振搖至完全溶解，濾過，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液。精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯各適量，用乙醇稀釋成含苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯0.05，0.02，0.10 g/L的混合溶液，作為對照品溶液。按處方量精密稱取不含防腐劑的樣品2.5 g，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振搖至完全溶解，濾過，棄去初濾液，取續濾液作為空白溶液。

2.3 測定方法

精密吸取空白溶液、混合對照品溶液、供試品溶液、對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。按自身對照外標法計算各防腐劑含量，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 方法學考察

線性關系考察：取苯甲酸對照品、山梨酸對照品、羥苯乙酯對照品適量，加流動相制成每1 mL含苯甲酸12.5，25.0，50.0，100.0，200.0 μg，含山梨酸5，10，20，40，80 μg，含羥苯乙酯25，50，100，200，400 μg的溶液，分別取10 μL，注入高效液相色譜儀，以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積的對數（Y）為縱坐標進行線性回歸。結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n=5）

檢出限和定量限確定：將對照品溶液進行適當稀釋，制得一系列不同質量濃度的溶液，依法進行分析，以S/N=3為檢測限，S/N=10為定量限。結果苯甲酸檢測限為4.77 ng，定量限為9.54 ng；山梨酸檢測限為5.26 ng，定量限為10.52 ng；羥苯乙酯檢測限為10.24 ng，定量限為20.48 ng。

精密度試驗：取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定色譜主峰峰面積。結果峰面積的RSD苯甲酸為0.36%，山梨酸為0.74%，羥苯乙酯為1.41%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一混合對照品溶液，測定其室溫放置0，0.5，1，2，4，8，12，24 h時的主峰峰面積。結果苯甲酸、山梨酸及羥苯乙酯的RSD分別為0.51%， 0.49%，0.91%（n=8），表明溶液在24 h內較穩定。

破壞性試驗［5］：取混合對照品溶液10 mL，置強光下照射0，1，2，4，6，8，12，24 h，分別取各時間段破壞的溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測定各主峰峰面積。結果苯甲酸、山梨酸及羥苯乙酯峰面積的RSD分別為1.24%，1.36%，1.89%（n=8），表明溶液在光照條件下24 h內較穩定。

加樣回收試驗：取硝酸咪康唑乳膏原料及相關輔料，按處方量制成樣品，分別加適量苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯，測定其含量，計算加樣回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果

2.5 樣品含量測定

對全國37個生產企業生產的146批次硝酸咪康唑乳膏進行測定，結果有11個生產企業的產品檢出苯甲酸，占29.73%；有1個生產企業的產品檢出山梨酸，占2.70%；有22個生產企業的產品檢出羥苯乙酯，占59.46%；有3個生產企業的產品均未檢出上述3種防腐劑，占8.11%。

3 討論

由樣品檢測結果可見，各生產企業產品添加防腐劑的種類不盡相同，表明各生產企業生產工藝有一定差異，故產品質量也存在差異；甚至有些企業不同批次間樣品防腐劑檢測結果相差4倍以上，說明部分生產企業在添加防腐劑量上有一定隨意性。該方法的建立，對于控制企業產品質量、建立較合適的防腐劑限度標準具有很好的指導意義。

為得到較理想的分離條件，曾使用0.15%乙酸銨-甲醇（90∶10）為流動相，結果羥苯乙酯相對保留時間為2.54 min，通過不斷改變流動相比例，羥苯乙酯相對保留時間變化不大；最后嘗試使用0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈為流動相，通過不斷改善兩相配比，最終得到較理想的分離條件。

本研究中所建立的色譜條件可同時對硝酸咪康唑乳膏中所添加的防腐劑進行定量檢測，方法檢測靈敏度高、分析時間短、分離效果好，結果準確可靠，可作為有效控制硝酸咪康唑乳膏產品質量的標準。同時，對其他外用多劑量制劑中防腐劑的檢測也具有很好的借鑒意義。

［1］劉海玲，吳燕，曹曉云.高效液相色譜法測定硝酸咪康唑栓中兩種雜質的含量［J］.天津藥學，2002，14（1）：65-66.

［2］王小亮，劉雪峰，席志芳，等.硝酸咪康唑原料及其制劑有關物質測定方法的建立［J］.藥物分析雜志，2012，32（11）：2 025-2 030.

［3］張秉華，宋莉，杜珊，等.HPLC法測定硝酸咪康唑原料有關物質的研究［J］.藥物分析雜志，2013，33（4）：638-641.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：952.

［5］傅強.藥物分析實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2008 54.：

Construction of a Method to Determine the Antiseptics in Miconazole Nitrate Cream

Liu Yan
（Shaanxi Yulin Institute for Drug Control，Yulin，Shaanxi，China 719000）

ObjectiveTo establish a method to determine the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.MethodsThe HPLC analysis was performed on Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column；the mobile phase consisted of 0.05 mol/L monopotassium phosphate and acetonitrile（72∶28）；the detective wavelength was 235 nm.ResultsThe limit of detection was 4.77，5.26 and 10.24 ng for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.It had good linear relationship at the range of 12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg respectively and the correlation coefficient was 0.999 96，0.999 97 and 0.999 91（n=6）for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.ConclusionThe method is simple，good in repeatability，accurate for quantitation and can be used for determining the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.

Miconazole Nitrate；antiseptic；HPLC；content

R927.11；R978.5

A

1006-4931（2015）20-0085-02

2014-12-11）