輸精管結扎術后附睪液抗精子抗體的研究*

劉 晃 鄭厚斌 龐 韜 鄧順美 崔 蓉 姜彥嘉 唐運革

廣東省計劃生育科學技術研究所， 國家衛生和計生委男性生殖與遺傳重點實驗室（廣州 510600）

輸精管結扎術后附睪液抗精子抗體的研究*

劉 晃 鄭厚斌 龐 韜 鄧順美 崔 蓉 姜彥嘉 唐運革

廣東省計劃生育科學技術研究所， 國家衛生和計生委男性生殖與遺傳重點實驗室（廣州 510600）

目的 探討抗精子抗體（AsAb）在輸精管結扎術后患者附睪液中的表達及其對生育力的影響。方法對2011年1月至2014年9月住院行輸精管復通術的132例患者（A組）進行附睪液的AsAb檢測，與同期132例育齡男性（B組）的精漿AsAb表達情況進行對比，隨訪1年，觀察兩組對象配偶的妊娠情況。結果 A組患者附睪液AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132）；B組的精漿AsAb總陽性率為8.33%（11/132），其中IgG為2.27%（3/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為5.30%（7/132），兩組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。隨訪1年后，A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 輸精管結扎術后附睪液中AsAb的表達程度與正常育齡男性精漿AsAb表達相當，但其復通后配偶的妊娠率要略比正常育齡期男性配偶的妊娠率低，AsAb可能對輸精管復通后男性的生育力有一定影響。

輸精管； 附睪； 抗精子抗體； 生育力

世界衛生組織（WHO）的數據顯示，全世界男性不育癥的各種病因學分類中，大概有15%～30%可能是由于體內血清或者是精漿中存在抗精子抗體（antisperm antibody，AsAb）等免疫因素所導致，其目前的檢出率大約為20%～30%［1］。對于AsAb產生的原因，多數學者認為是由于輸精管道的梗阻，導致輸精管道內壓力增高，附睪小管膨脹，精子漏出或者是附睪內精子變性，促使精子被吞噬細胞或者是附睪上皮細胞吸收，從而刺激并啟動了自身免疫而產生抗體［2］。筆者對輸精管結扎術后患者附睪液中的AsAb表達程度與正常育齡男性精漿中AsAb的表達程度進行了對比，發現兩者AsAb的表達卻未見明顯差異，但其復通后配偶的妊娠率要略比正常育齡期男性配偶的妊娠率低，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

A組：2011年1月至2014年9月132例輸精管結扎者，因再生育要求持當地計劃生育管理部門證明前來我院要求行輸精管復通術。年齡在34～48歲間，平均（35.62±2.17）歲；結扎年限2～11年，平均（4.53±2.62）年；其中有一次生育史47人，有兩次或兩次以上生育史85人。住院期間進行詳細的病史收集，排除傳染性疾病、遺傳性疾病、獲得性外傷性疾病、全身系統性疾病等，排除手術禁忌證等，并由專人進行詳細的體格檢查，采用Prader's睪丸模型測量法測量睪丸大小，手術前采用化學發光免疫分析法檢測性激素水平（應用德國Bayel公司試劑盒，按試劑盒要求規范操作）。

B組：為同期在我院門診進行生育檢查的對象，年齡在33～44歲間，平均（34.47±2.93）歲，其中無生育史47人，有一次生育史52人，有兩次或以上生育史33人。所有對象在門診也由專人進行詳細的病史收集和體格檢查，排除相關疾病，按相同方法測量睪丸體積，并檢測性激素水平。

（三）

兩組對象的配偶年齡29～40歲，平均（31.3±4.6）歲，均監測月經規則，輸卵管通暢，子宮狀況良好，排卵功能正常，排除宮頸疾病，無放置節育環，盡可能排除導致配偶不孕的相關因素。兩組一般人口學特征比較無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

二、方法

（一）手術方法

所有輸精管復通手術對象采用局部麻醉或者硬外麻醉下行顯微輸精管吻合術，術中用1mL注射器配鈍針頭吸取輸精管結節近睪端溢出液，個別輸精管結節近睪端溢出不多者可加注0.9%生理鹽水沖洗附睪小管后回抽，抽取所得附睪液體送實驗室行AsAb檢測。

（二）檢測方法

A組患者按照手術方法收集附睪液標本，B組對象參照第5版《世界衛生組織人類精液檢查與處理實驗室手冊》［3］的標準收集禁欲3～7d后的精液標本。所得附睪液標本和精液標本，均依據WHO推薦的IBT試驗法，按照IBT試劑盒（美國BIO-RAD公司生產）的使用操作說明書進行規范操作，每份標本同時檢測IgA、IgG、IgM。

（三）診斷標準

1. AsAb陽性標準：參照IBT試劑盒（美國BIORAD公司生產）的使用操作說明書標準。

2. 研究對象配偶受孕標準：有專人負責隨訪1年，以B超確診受孕或術后已分娩小孩為準。

（四）統計學方法

所得數據均采用SPSS18.0軟件進行統計學分析，計量資料采用均數±標準差（s）表示，兩組間比較采用t檢驗。計數資料比較采用x2檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、兩組對象一般人口學特征比較

A、B兩組在年齡、睪丸體積、性激素水平等一般人口學特征方面比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

二、兩組AsAb表達水平與配偶妊娠情況比較

A組患者附睪液AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132）；B組的精漿AsAb總陽性率為8.33%（11/132），其中IgG為2.27%（3/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為5.30%（7/132）。隨訪1年后，A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統計學意義，（F1=0.051，P1=0.821；F2=4.239，P2=0.040）。

表1 兩組間一般人口學特征比較（s）

表1 兩組間一般人口學特征比較（s）

組別 例數（n） 年齡（歲） 睪丸體積（mL） FSH（mIU/mL） LH（mIU/mL） PRL（ng/mL） T（nmol/L）A組 132 35.62±2.17 14.87±2.51 7.29±1.45 5.14±1.47 8.73±2.21 9.47±1.88 B組 132 34.47±2.93 15.12±2.49 7.13±1.32 5.35±1.52 8.61±2.07 9.75±1.71 T - 0.259 -0.858 -0.708 0.855 0.961 -1.267 P - 0.396 0.194 0.238 0.191 0.173 0.102

討 論

一、輸精管結扎與AsAb的產生

目前國內外眾多的學者都普遍認為AsAb的產生是機體免疫系統異常引起，它是導致男性不育的一個比較明確的重要因素［4］。AsAb的基本概念是生物機體產生了一種能夠附著在精子表面、并且能夠與精子表面特異性抗原相互結合的特殊物質，理論上認為它能夠包被精子、凝集精子和抑制精子的運動等等，通過阻礙精子與卵子的結合，阻礙受精卵的形成，從而導致不育癥的發生。眾所周知人類男性精子的產生是在睪丸的生精小管，而曲細精管有著血睪屏障的保護作用，使得精子被隔離開來，避免了機體免疫系統的識別，從而完成了減數分裂和精子的發生，然而當這種特殊的屏障環境受到破壞的情況下，生精小管產生的精子就有可能被自身免疫系統所識別，從而產生AsAb，影響生殖的繁衍。當前多數學者認為，輸精管結扎術后，生殖管道受到了梗阻，勢必會導致精液淤積，引起生殖管道內的壓力增高，附睪小管膨脹，精子漏出形成精子肉芽腫或者是刺激了附睪內皮細胞，造成內皮細胞對精子的吸收加強和吞噬細胞的吞噬作用加強，刺激了人類敏感的免疫系統產生免疫反應，從而引起AsAb的發生［2］。國外學者利用動物模型進行了相應的研究，其中Chehval等［5］發現成年大鼠在切去單側輸精管后15d，大鼠體內血液中便開始有AsAb的產生。Flickinger等［6］發現輸精管結扎后立即吻合的大鼠產生的血清AsAb明顯比結扎后一段時間后吻合的大鼠少。在人類輸精管結扎術與AsAb的研究中，國內外學者發現，輸精管結扎術后男性血清AsAb的陽性率可以高達50%～80%，而且多數是在術后半年到1年之間AsAb的表達程度達到最高峰，有的輸精管結扎后男性可以在術后20～30年內均存在AsAb［7］。我們在研究中也發現，A組132例輸精管結扎對象在行輸精管結扎術2～11年，平均（4.53±2.62）年后仍有9.10%（12/132）的對象能從附睪液中檢測到AsAb的表達，本研究的AsAb表達程度比相關文獻的低，這可能與我們檢測的標本不同有一定關系，我們檢測是的附睪液，而目前多數學者檢測的是血清。這表明血清AsAb與附睪液AsAb的表達不一定相關，這與國內外有關學者的研究相一致［8，9］。

二、附睪液AsAb對生育力的影響

有研究分析出人類抗精子抗體的產生時間可以短至數天，當機體免疫系統做出免疫應答后數天內即可在人體內檢測到AsAb的存在，其可以存在血液、精液、睪丸鞘膜積液或者是女性宮頸黏液等人類體內組織液中。Safarinejad對行睪丸鞘膜積液手術的患者進行了研究，發現在睪丸鞘膜積液中可以檢測到AsAb的存在，其檢出率高達27%［10］。人類的AsAb主要有IgM 、IgG和IgA三種亞型。首先表達的時間也有先后之分，以IgM最早出現，繼而轉化為IgG和IgA并可以長期存在于體內，其中IgG主要分布于血液中，IgA主要分布于除血液以外的其他組織液中。各種亞型的AsAb的作用部位和作用機制也有所區別，國外學者［11，12］發現IgM型主要作用于是抑制頂體反應；IgG型主要是使得精子凝聚，制約精子活動能力；IgA型能夠降低精子的宮頸粘液穿透能力；他們還發現當AsAb結合于精子頭部或者是精子表面全部時，生育的能力下降80%以上，當AsAb結合的部位是精子尾部或者是體部時，生育的能力下降30%左右。國外還有分析認為［13］，血清學AsAb的表達強度與生育力水平呈負相關，其中11例AsAb滴度≥1 024的男性竟然無1例能夠生育。我們在既往的研究中也發現，雖然輸精管復通術后的患者其精子質量能夠在一年后達到正常參考范圍，但是其配偶受孕率要低于育齡人群自然受孕率［14］；而輸精管附睪吻合術后再通的患者2年內的配偶受孕率也比WHO育齡人群2年的自然受孕率低［15］，其可能原因尚不明確。在此次研究中我們發現，132例復通術后的A組患者在附睪液中AsAb的總陽性率為9.10%（12/132），其中IgG為1.52%（2/132）、IgM為0.76%（1/132）、IgA為6.82%（9/132），主要是以IgA的形式存在，隨訪1年內A組患者配偶的妊娠率為23.48%（31/132），略比B組34.85%（46/132）低，兩者間比較差異有統計學意義（P＜0.05），因此，我們認為這可能是由于AsAb的作用部位不同所導致了兩組的配偶受孕率出現一定的差異，這也可能是解釋我們既往研究所發現的復通術后配偶受孕率會比正常育齡人群低的一個重要原因，AsAb可能對輸精管復通后對象的生育力存在一定的影響。

1 WHO:WHO manual for the standardized investigation，diagnosis and management of the infertile male， Cambrige University Press. Cambrige 1st ed.2006:11-46

2 Mazzilli F， Rossi T， Delno M， et al. Azoospermia: incidence， and biochemical evaluation of seminal plasma by the differential pH method. Panminerva Med 2000；42（1）: 27-31

3 WHO.WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Fifthed.WHO 2010； 224-225

4 Dohle GR， Colpi GM， Hargreave TB， et al. EAU guideline on male infertility. Eur Uro1 2005； 48（5）: 703-711

5 Chehval MJ， Doshi R， Kidd CF， et al. Antisperm autoantibody response after unilateral vas deferens ligation in rats: when does it develop？ J Androl 2002； 23（5）: 669-673

6 Flickinger CJ， Vagnetti M， Howards SS. Antisperm autoantibody response is reduced by early repair of a severed vas deferens in the juvenile rat. Fertil Steril 2000； 73（2）: 229-237

7 傅廣波， 錢立新， 崔毓桂. 男性自身抗精子抗體的臨床研究. 國外醫學計劃生育分冊 2005； 24（6）: 317-321

8 Naz RK， Chauhan SC. Presence of antibodies to sperm YLP （12） synthetic peptide in sera and seminal plasma of immunoinfertile men. Mol Hum Reprod 2001； 7（1）: 21-26

9 李宏軍， 郭應祿， 王彥， 等. 精漿及血清抗精子抗體的比較研究. 生殖與避孕 1997； 17（5）: 308-310

10 Safarinejad MR. Antisperm antibodies in hydroceles before and after surgery. Fertil Steril 2003； 79（2）: 457-458

11 Kipersztok S， Kim BD， Morris L， et al. Validity of a rapid assay forantisperm antibodies in semen. Fertil Steri 2003；79（3）: 522-528

12 Myogo K， Yamano S， Nakagawa K， et al. Spermimmobilizing antibodies block capacitation in human spermatozoa. Arch Androl 2001； 47（2）:135-142

13 Shibahara H， Hirano Y， Takamizawa S， et al. Effect of spermimmobilining antibodies bound to the surface of ejaculated human spermato zoa on sperm motility in immunologically infertile men. Fertil Steril 2003； 79（3）: 641-642

14 劉晃， 唐立新， 唐運革， 等. 輸精管吻合術后男性生育力的臨床觀察. 中國男科學雜志 2011； 25（10）: 35-38

15 劉晃， 唐立新， 湯樂， 等. 附睪輸精管吻合術后男性生育力的臨床評估. 山西醫科大學學報 2014； 45（3）: 220-223

（2015-09-12收稿）

Study on antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy*

Liu Huang， Zheng Houbin， Pang Tao， Deng Shunmei， Cui Rong， Jiang Yanjia， Tang Yunge
Family Planning Research Institute of Guangdong Province， Guangzhou 510600 ， China

Objective To investigate the expression of antisperm antibody in epididymal fi uid after vasectomy and explore its effects on the fertility. Methods Total of 132 patients （group A） who underwent vasectomy reversal during the 2011-1 ～ 2014-9 were enrolled in the study. The antisperm antibody in the epididymal fi uid of patients were detected. Other 132 fertile men （group B） were set as the controls. All subjects were followed up for 1 year， and their spouse's pregnancy were observed. Results The total positive rate of antisperm antibodies in the epididymal fi uid of group A was 9.10%（12/132）， among them the IgG was 1.52%（2/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 6.82% （9/132）， and the total positive rate of antisperm antibody in the seminal plasma of group B was 8.33% （11/132） ， among them the IgG was2.27% （3/132）， IgM was 0.76% （1/132）， IgA was 5.30% （7/132）， there was no significant difference between the two groups （P＞0.05）， after followed up for 1 years， the spouse's pregnancy rate of group A was 23.48%（31/132）， it was little lower than that of the group B（ 34.85%，46/132）， There was statistical difference between the two groups（P＜0.05）. Conclusion The expression level of antisperm antibody in the epididymal fi uid of the patients after vasectomy was close to that of the normal reproductive age men， but the spouse's pregnancy rate of the patients who underwent vasectomy reversal is little lower than that of the normal reproductive male's apouse.

epididymis； vas deferens； antisperm antibody； fertility

資助: 廣東省醫學科研基金（項目編號：A2015245）

10.3969/j.issn.1008-0848.2015.11.011

R 169.4