CD151和MMP-9在膀胱癌中的表達及意義

虞偉星　何非平　陳　杰　張　健　章更生

CD151和MMP-9在膀胱癌中的表達及意義

虞偉星何非平陳杰張健章更生

目的 探討人類白細胞分化抗原151（CD151）和基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）在膀胱癌中的蛋白表達及其與膀胱癌發生﹑發展﹑復發等的關系。方法 采用免疫組織化學染色法檢測正常組織與膀胱癌組織中CD151和MMP-9的蛋白表達，并分析兩者在膀胱癌中表達的相關性。結果 CD151和MMP-9在膀胱正常組織中表達的陽性率分別為20%和15%，在膀胱癌組織中表達陽性率分別為58%和62%，CD151和MMP-9在膀胱正常組織和膀胱癌組織中的表達差異有統計學意義（P＜0.05）。兩種蛋白的陽性表達率與腫瘤的病理分級﹑分期及復發有密切關系（P＜0.05）。膀胱癌中CD151和MMP-9兩種蛋白的表達強度具有正相關性（rs=0.356）。結論 CD151和MMP-9在膀胱癌組織中異常高表達并與其發生﹑發展及復發有密切關系，聯合檢測可作為判斷膀胱癌生物學行為的重要指標。

人類白細胞分化抗原 基質金屬蛋白酶-9 膀胱癌 免疫組織化學染色

膀胱癌是最常見的泌尿系惡性腫瘤，在美國男性惡性腫瘤發病率中占第4位，女性占第7位［1］。在我國膀胱癌是第1位的泌尿系惡性腫瘤［2］。在所有初診的非肌層浸潤膀胱癌中，全膀胱切除術5年生存率50%左右［3］。研究表明CD151和 MMP-9在癌細胞的侵襲和轉移中有重要作用。作者檢測白細胞分化抗原151（CD151）和基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）在膀胱癌的表達，以評價兩者在膀胱癌發生、發展和復發中的價值。

1　臨床資料

1.1一般資料 收集2005年1月至2008年1月本院手術治療患者膀胱癌組織112例和同期手術的正常組織20例石蠟包埋標本，所有標本臨床資料完整，且經病理證實，術前均無放、化療及免疫治療史。112例膀胱癌組織中男80例，女32例；年齡45～83歲，中位年齡69歲。20例正常組織為對照組：其中男16例，女4例；年齡45～84歲，中位年齡66歲。收集患者的臨床資料包括基本資料，腫瘤大小、數目，病理分級、分期（依據AJCC2002標準）、復發情況等。所有標本常規石蠟切片4μm厚，65～70℃烤片1～1.5h。

1.2試劑 CD151單克隆抗體購自Abcom公司，工作液濃度為1：100，MMP-9為即用型試劑，與SP試劑盒及DAB顯色液均購自ADKO公司。石蠟切片機：LEICA RM2135（德國）。光學顯微鏡：OLYMPUS BX41（日本）。

1.3免疫組化方法 膀胱組織經福爾馬林固定，石蠟包埋，厚4μm，石蠟切片常規脫蠟水化，檸檬酸pH6.0 高溫修復抗原，切片于二甲苯中脫蠟，以0.3%的H2O2孵育10min，山羊血清封閉，一抗4℃冰箱孵育過夜，依次再加生物素標記二抗和辣根過氧化物標記的三抗室溫孵育，DAB顯色，蘇木精襯染，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.4結果判定 （1） 采用半定量積分法判定結果。顯色度按細胞著色深淺計分：基本無著色：0分；淺黃：1分；淺棕：2分；深棕：3分。著色面積根據陽性細胞所占百分比計分：無陽性細胞為0分；陽性細胞＜10%為1分；陽性細胞11%～50%為2分；陽性細胞51%～75%為3分；陽性細胞＞76%為4分。兩種分值相乘≥3分，為表達陽性，≤2分為表達陰性。（2）Image-ProPlus5.1專業圖像分析系統下測量陽性細胞平均光密度值（IODmean），將數據進行統計學分析。

1.5統計學分析 采用SPSS 17.0軟件。計量資料用t檢驗，計數資料用χ2檢驗，相關性分析采用等級相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1CD151及MMP-9蛋白的表達定位 CD151主要分布于細胞膜上（見圖1）。本組112例膀胱癌患者中，CD151陽性表達65例（58%），20例正常組織陽性表達4例（20%）。腫瘤組織中CD151陽性表達明顯高于對照組（P＜0.05）。MMP-9主要表達于細胞質（見圖2），以腫瘤細胞表達為主。112例膀胱癌患者中，MMP-9陽性表達69例（62%），20例正常組織陽性表達3例（15%）。腫瘤組織中CD151陽性表達明顯高于對照組（P＜0.05）。

圖1　膀胱癌中CD15表達陽性（SPx200

圖2　膀胱癌中MMP-9表達陽性（SPx200）

2.2CD151及MMP-9在膀胱癌與正常膀胱組織中的蛋白表達比較 見表1。

表1　CD151和MMP9在膀胱癌組織和正常組織中的平均光密度值比較（x±s）

2.3CD151及MMP-9蛋白表達與膀胱癌臨床病理特征的關系 見表2。

表2　膀胱癌CD151和MMP-9蛋白表達與臨床病理學因素之間的關系［n（%）］

2.4CD151和MMP-9在膀胱癌中表達的相關性 據CD151和MMP-9在膀胱癌中表達IODmean進行相關性分析，兩者具有明顯正相關性（rs=0.356）。

3　討論

3.1CD151在膀胱癌發生、發展過程中的意義 CD151是四跨膜蛋白家族（TM4SF）重要成員。越來越多的學者認為CD151可以作為腫瘤預后的一個新的指標［4］。本資料顯示CD151在膀胱癌中的表達明顯高于對照組，差異有統計學意義。CD151的表達與腫瘤分期、分級及復發有關，而與年齡、性別、腫瘤數量、大小無關，且CD151在這些腫瘤組織中的表達越高，患者的腫瘤分級越高，惡性度越高，這與多數文獻報道結果一致。本資料結果提示CD151可能在膀胱癌的發生發展中起重要作用，初步判斷CD151蛋白在膀胱癌中的表達可作為膀胱癌進展、演化有關的重要指標之一，對膀胱癌的預后評估及靶向治療等有一定指導意義。

3.2MMP-9在膀胱癌發生、發展過程中的意義 MMP-9又稱明膠酶B（gelatinase B），研究表明，MMP-9在多種惡性腫瘤的發生、發展和侵襲、浸潤過程中發揮著重要的作用［5］。本資料MMP-9陽性表達率61.6%，其表達與分級、分期、有無復發顯著相關，而與年齡、性別、腫瘤大小、數目無關。實驗中發現MMP-9陽性表達主要分布在細胞間質、血管臨界面以及癌侵入膀胱深層組織前緣，特別是呈浸潤性生長的癌組織周圍表達較強，呈不均勻性分布，這或許表明膀胱癌細胞可能通過分泌MMP-9直接破壞基底膜和腫瘤基質，從而浸潤周圍組織并進行的腫瘤浸潤和轉移。表明MMP-9的過表達對膀胱癌的進展可能具有非常重要的意義，進一步研究MMP-9的作用機制對揭示膀胱癌初期進展中的生物學基礎具有重要意義。

3.3CD151和MMP-9相關性的意義 膀胱癌的進展和演化是一個多基因、多因子共同作用的復雜過程。最新研究表明CD151是MMPs的重要調控子，它通過調節MMPs促進浸潤轉移［6］。本資料顯示CD151和MMP-9蛋白在膀胱癌中的表達成正相關（rs=0.335，P=0.026 ），提示兩者可能有協同作用，結合以上研究，作者推斷CD151可能通過激活基質金屬蛋白酶MMP-9對膀胱癌的進展、演化以及復發發揮重要作用。但二者的具體作用機制還有待進一步研究。

綜上所述，CD151和MMP-9在膀胱癌的發生、發展過程中具有重要的作用，聯合檢測CD151和MMP-9表達可為膀胱癌的診斷及治療提供參考依據。有助于指導臨床治療，從而進一步提高膀胱癌的治療效果。

1 Jemal A， Siegel R， Xu J. Ward E. Cancer statistics.CA Cancer J Clin，2010，6（10）：277～300.

2 Zhang W， Xiang YB， Liu ZW， et al. Trends analysis of common urologic neoplasm incidence of elderly people in Shanghai.Cancer，2012，23（4）：555～558.

3 Zlotta AR， Roumeguere T，Kuk C， et al. Select screening in a specific high-risk population of patients suggests a stage migration toward detection of non-mscle-invasive bladder. Cancer Eur Urol，2010， 59（5）：1026～1031.

4 Zoller M Z. Gastroenterol.Gastrointestinal tumors： metastasis and tetrasp anins，2006，44（7）：573～586.

5 Zeng ZS.Prediction of colorectal cancer relapse and survival via tissue RNA levels of matrix metalloproteinase 9.J Clin Oncol， 1996， 14（12）：3133～3140.

6 Li ZJ， Jiang WG， Wang JO. CD151 and MMP-7 Expression and Its Significance in Colorectal Cancer. Chinese J Clin Oncol， 2012，39（7）：392～395.

312300 浙江省紹興市上虞人民醫院泌尿外科