H7N9禽流感患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分析及臨床意義

黃燕　羅二平　朱義玲　闞延婷　甘建和*

H7N9禽流感患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分析及臨床意義

黃燕羅二平朱義玲闞延婷甘建和*

目的 探討H7N9禽流感患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及臨床意義。方法 將23例H7N9禽流感患者（感染組）根據(jù)臨床治療預(yù)后分為好轉(zhuǎn)組15例和死亡組8例，另選擇體檢健康者20例為正常對照組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1細(xì)胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2細(xì)胞）百分率的變化。結(jié)果 感染組治療前外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞百分率、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分率明顯低于正常對照組（P＜0.05），而Th17百分率、Th2細(xì)胞百分率較正常對照組明顯增高（P＜0.05）；好轉(zhuǎn)組治療后外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、Treg、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分率較治療前明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療后外周血Th17細(xì)胞百分率、Th1細(xì)胞百分率較治療前明顯下降（P＜0.05）；死亡組治療前、后上述指標(biāo)間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 H7N9禽流感患者存在嚴(yán)重的T淋巴細(xì)胞失衡，監(jiān)測H7N9禽流感患者T淋巴細(xì)胞指標(biāo)變化，對評估臨床預(yù)后具有重要的參考價(jià)值。

H7N9禽流感病毒 T淋巴細(xì)胞亞群 Th17 Treg

人感染H7N9禽流感是有H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其重癥肺炎患者常快速進(jìn)展為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）、膿毒癥、感染性休克甚至多臟器功能衰竭，目前研究認(rèn)為H7N9禽流感病毒感染人體誘發(fā)的細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)失衡是導(dǎo)致一系列危重并發(fā)癥的主要原因，同時(shí)機(jī)體免疫功能狀況也是決定禽流感病情發(fā)展和預(yù)后的重要因素。作者通過監(jiān)測近2年本院收治的H7N9禽流感患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群并分析其變化，探討H7N9禽流感的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，了解免疫功能變化對疾病預(yù)后的影響。

1　臨床資料

1.1一般資料 2013年4月至2015年4月本院救治的H7N9禽流感患者23例（感染組），其中男17例，女6例，年齡20～83歲。根據(jù)患者臨床治療預(yù)后分為好轉(zhuǎn)組15例，其中男12例，女3例；年齡20 ～ 75歲。死亡組8例，其中男5例，女3例；年齡28 ～ 83歲。診斷依據(jù)參照《人感染H7N9禽流感診療方案》（2014年版）［1］。另選擇同期本院體檢健康者20例為正常對照組，其中男14例，女6例；年齡23～75歲。

1.2檢查方法 T淋巴細(xì)胞亞群檢測：所有患者均于住院第2天空腹抽靜脈血4ml，采用肝素鈉抗凝。治療后所測數(shù)據(jù)均為患者最后1次空腹抽血檢測。檢測采用美國貝克曼庫爾特XL-100流式細(xì)胞儀，所用試劑均由貝克曼提供，并通過CXP軟件進(jìn)行熒光信號(hào)參數(shù)獲取和分析，獲得外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、Treg、Th17、CD3+CD8-IFN-γ+（Th1細(xì)胞）、CD3+CD8-IL-4+（Th2細(xì)胞）的百分率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用（x±s）表示，兩組間比較應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群百分率比較 見表1。

表1　兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群百分率比較（%）

2.2好轉(zhuǎn)組與死亡組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群百分率比較 見表2。

表2　好轉(zhuǎn)組與死亡組治療前后T淋巴細(xì)胞亞群百分率比較（%）

3　討論

T淋巴細(xì)胞是機(jī)體維持免疫穩(wěn)定，發(fā)揮免疫防御、免疫監(jiān)視功能的重要細(xì)胞之一，根據(jù)其在免疫應(yīng)答中的功能不同，分為輔助性T細(xì)胞、效應(yīng)性T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞等，一旦這些細(xì)胞在數(shù)量上或功能上發(fā)生變化，機(jī)體免疫平衡被打破，由此出現(xiàn)的免疫紊亂將導(dǎo)致臨床發(fā)病或病情惡化。因近年來流感病毒如H1N1、H1N5、H7N9在我國流行，嚴(yán)重威脅人民健康，目前也越來越重視T淋巴細(xì)胞在流感患者中的研究。

王會(huì)軍等［2］發(fā)現(xiàn)，H7N9禽流感患者外周血CD3+、CD8+、CD4+T細(xì)胞絕對數(shù)均低于正常對照組，治愈患者治療后上述指標(biāo)絕對數(shù)較治療前明顯升高，死亡組治療前后上述指標(biāo)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與本資料結(jié)果大致相仿，提示在H7N9病毒感染患者中均存在比較嚴(yán)重的T淋巴細(xì)胞亞群失衡，其免疫功能紊亂導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病甚至病情進(jìn)展惡化。除絕對數(shù)上的差異，本資料還發(fā)現(xiàn)，好轉(zhuǎn)組治療后患者外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞百分率、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞百分率高于治療前，且與正常對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與王會(huì)軍等［2］的研究結(jié)果也類似，提示經(jīng)過治療后患者機(jī)體免疫紊亂狀態(tài)得以糾正，免疫平衡的恢復(fù)促進(jìn)機(jī)體康復(fù)。有研究證明，H7N9感染與SARS及H5N1一樣存在突發(fā)的細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)失衡［3］，機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)被打破，表現(xiàn)為免疫抑制作用弱而炎癥反應(yīng)強(qiáng)的相對過激或亢進(jìn)狀態(tài)，因此，作者還監(jiān)測具有免疫抑制或免疫無能作用的Treg細(xì)胞，以及能招募中性粒細(xì)胞等多種炎性反應(yīng)細(xì)胞，且可分泌眾多炎性反應(yīng)因子明顯促進(jìn)炎癥反應(yīng)的Th17細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，好轉(zhuǎn)組治療前Treg較正常對照組明顯下調(diào)，Th17百分率較正常明顯升高，而治療后好轉(zhuǎn)組患者外周血Treg較前表達(dá)上調(diào)且與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而好轉(zhuǎn)組治療后Th17雖較正常仍高，較治療前卻有明顯下降，這樣的變化趨勢亦提示經(jīng)治療后癥狀改善的患者體內(nèi)具有抑制性作用的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例明顯增多，其抑制其他免疫效應(yīng)細(xì)胞的激活和增殖的作用亦明顯增強(qiáng)，可以有效阻止免疫過激反應(yīng)，表現(xiàn)為Th17細(xì)胞的百分率下調(diào)。徐娟等［4］研究發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感危重患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例較正常顯著降低，機(jī)體免疫抑制相對不足，細(xì)胞免疫異常在此類疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。然而，方木通等［5］研究認(rèn)為Th17淋巴細(xì)胞在甲型H1N1流感患者中的比例較健康人群顯著下降，雖然均為甲型流感病毒感染，但結(jié)果與本資料H7N9禽流感中明顯有差異，可能H7N9病情進(jìn)展快，大多早期即進(jìn)展為重癥肺炎、呼吸衰竭、ARDS甚至多臟器功能衰竭，合并細(xì)菌感染甚至真菌感染幾率高有關(guān)，而H1N1流感輕癥患者多，相對炎癥反應(yīng)弱；同時(shí)使用的檢測方法不盡相同，病例數(shù)不多等因素影響。

本資料顯示H7N9禽流感患者外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Th1細(xì)胞百分率在好轉(zhuǎn)組患者治療前后差異顯著，但在死亡組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明細(xì)胞免疫異常在此類病毒性流感的發(fā)病機(jī)制中作用顯著，治療后若患者免疫失衡狀態(tài)得以改善，可能代表較好的臨床預(yù)后，因此，監(jiān)測H7N9禽流感患者細(xì)胞免疫指標(biāo)，對評估患者臨床預(yù)后具有重要的參考價(jià)值。

1中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì). 人感染H7N9禽流感診療方案（2014年版）. 傳染病信息，2014，27（1）：Ⅰ～Ⅳ.

2毛會(huì)軍，陳戴紅，邱建萍，等.H7N9禽流感患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分析及意義. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28（9）：758～761.

3Chen Y， Liang W， Yang S，et al.Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry： clinical analysis and characterisation of viral genome. Lancet，2013，381：1916～1925.

4徐娟，顏學(xué)兵，周培培，等.甲型H1N1流感危重癥患者淋巴細(xì)胞亞群和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測及其意義.中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志（電子版），2011，5（1）：18～22.

5方木通，崇雨田，楊桂林，等.Th17淋巴細(xì)胞對甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探討. 中華傳染病雜志，2010，28（10）：593～596.

Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9）virus infection patients. Methods According to the prognosis，23 patients with avian influenza A （H7N9） virus infection （infection group） were classified into 15 cases of improvement group and 8 cases of dead group. There were 20 cases healthy subjects as the control group，the T lymphocyte subsets in peripheral blood were detected by flow cytomery. Results Compared with the control group，before the treatment，the percentage of CD3+CD4+T cell，CD3+CD8+T cell of the infection group decreased significantly （P＜0.05），and the percentage of Th17、Th2 of the infection group increased significantly （P＜0.05）. In the improvement group，the percentage of CD3+CD4+T cell、Treg、CD3+CD8+T cell were significantly higher than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment，but the percentage of Th17、Th1 cell were significantly lower than those before the treatment（P＜0.05）after the treatment. In dead group，there was no statistical significance for all parameters before and after the treatment（P＞0.05）. Conlusions There is imbalance of T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients，to monitor the changes of the T lymphocyte subsets in influenza A （H7N9） virus infection patients has important reference value.

Avian influenza A（H7N9）virus T lymphocyte subsets Th17 Treg

國家“十二五”科技重大專項(xiàng)（2012ZX10002004）

215000 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染病科