歐盟轉(zhuǎn)基因生物安全檢測技術(shù)現(xiàn)狀及啟示

吳剛金蕪軍謝家建沈平李文龍宋貴文

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所，武漢 430062；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，北京 100081；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193；4.農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心，北京 100122）

歐盟轉(zhuǎn)基因生物安全檢測技術(shù)現(xiàn)狀及啟示

吳剛1金蕪軍2謝家建3沈平4李文龍4宋貴文4

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所，武漢 430062；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，北京 100081；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193；4.農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心，北京 100122）

為了了解歐盟轉(zhuǎn)基因生物安全檢測技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀，提高我國轉(zhuǎn)基因安全監(jiān)管水平。本研究根據(jù)對歐盟8家轉(zhuǎn)基因檢測相關(guān)機(jī)構(gòu)現(xiàn)狀的調(diào)查和分析結(jié)果，闡述了轉(zhuǎn)基因檢測過程中的關(guān)鍵技術(shù)要點及歐盟的實施情況，具體包括抽樣與制樣方法，轉(zhuǎn)基因檢測方法的循環(huán)驗證與參數(shù)要求，樣品的檢測策略與實驗室環(huán)境要求，以及檢測結(jié)果的表述與不確定度評估。并結(jié)合我國轉(zhuǎn)基因生物安全檢測發(fā)展現(xiàn)狀，提出了開展檢測方法的實驗室聯(lián)合驗證和加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因定量PCR檢測技術(shù)的研發(fā)和應(yīng)用的建議。

歐盟；轉(zhuǎn)基因生物；檢測技術(shù)

隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的興起和快速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性問題逐漸成為國際社會普遍關(guān)注的熱點和焦點［1，2］。為促進(jìn)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，保障消費者的知情權(quán)和選擇權(quán)，世界上許多國家和地區(qū)頒布了相關(guān)的轉(zhuǎn)基因生物安全管理與標(biāo)識制度［3-5］。其中，歐盟是世界上轉(zhuǎn)基因生物安全管理與標(biāo)識管理制度較為嚴(yán)格和完善的地區(qū)，也是第一個提出進(jìn)行閾值管理的地區(qū)［6］。為了給轉(zhuǎn)基因生物安全管理與標(biāo)識制度提供技術(shù)支撐，歐盟花費龐大人力、物力和財力進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)研究。構(gòu)建了完善的轉(zhuǎn)基因檢測方法循環(huán)研制實驗室網(wǎng)絡(luò)和轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制機(jī)構(gòu)［7，8］。在歐洲，執(zhí)行轉(zhuǎn)基因檢測的機(jī)構(gòu)組成了歐洲轉(zhuǎn)基因檢測網(wǎng)絡(luò)實驗室（European Network of GMO Laboratories，ENGL）。ENGL除了進(jìn)行日常檢測，還對歐盟設(shè)置在歐盟聯(lián)合研究中心（Joint Research Centre，JRC）下屬健康與消費者保護(hù)研究所（Institute for Health and Consumer Protection，IHCP）的歐盟轉(zhuǎn)基因食物與飼料基準(zhǔn)實驗室（European Union Reference Laboratory for GM Food & Feed，EURL-GMFF）研制和提供的轉(zhuǎn)基因檢測方法進(jìn)行驗證［9，10］。目前國際上研制的轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和發(fā)布的轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)方法有一半以上來自歐盟，因此有必要對歐盟的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)平臺進(jìn)行分析研究。

根據(jù)在歐盟聯(lián)合研究中心健康及消費者保護(hù)研究所下屬歐盟轉(zhuǎn)基因食品和飼料基準(zhǔn)實驗室、意大利拉齊奧大區(qū)和托斯卡納大區(qū)動物預(yù)防性實驗研究院下屬轉(zhuǎn)基因檢測國家基準(zhǔn)實驗室、翁布里亞區(qū)食品科技園（3A-PTA）內(nèi)第三方食品安全檢測實驗室（Analysis）、洛迪省Tavazzano種子檢測實驗室等8家轉(zhuǎn)基因檢測相關(guān)機(jī)構(gòu)（實驗室）和單位進(jìn)行的調(diào)研和考察，本文重點闡述了轉(zhuǎn)基因檢測過程中的關(guān)鍵技術(shù)要點以及歐盟的實施情況。并結(jié)合我國轉(zhuǎn)基因生物安全檢測發(fā)展現(xiàn)狀提出相應(yīng)建議，旨為我國轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)的發(fā)展提供參考。

1 抽樣與制樣

抽樣是轉(zhuǎn)基因成分檢測的第一個環(huán)節(jié)，也是非常復(fù)雜和重要的環(huán)節(jié)。抽樣要有代表性，要能準(zhǔn)確反映出樣品的總體情況［11］。歐盟國家轉(zhuǎn)基因安全管理主要遵循預(yù)防原則，與我國采取的源頭控制理念類似。以意大利為例，目前意大利尚未批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化種植，在轉(zhuǎn)基因生物監(jiān)控計劃實施過程中，邊境檢查站、國家憲兵隊和地區(qū)衛(wèi)生部門等執(zhí)法機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)抽樣工作，樣品主要來自進(jìn)口等環(huán)節(jié)；農(nóng)業(yè)部執(zhí)法機(jī)構(gòu)抽檢樣品則主要來源于種子企業(yè)的種子庫，基本不對市場上銷售的產(chǎn)品進(jìn)行檢測。因此，意大利轉(zhuǎn)基因檢測抽樣主要是針對批次貨物，不涉及田間種植樣品。

在典型情況下，歐盟國家執(zhí)法機(jī)構(gòu)的抽樣工作參照《Rec. 2004/787/EC Technical guidance for sampling and detection of GMOs》進(jìn)行［12］，可以對多至109粒的樣品進(jìn)行抽樣。多個取樣點至少可以獲得105粒種子，將多個取樣點的樣品混勻，從中取出3份各3 000粒種子交給轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測。轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)將其中一份3 000粒種子粉碎，取少量（至少包含105個粉碎的顆粒）粉末提取DNA，用于轉(zhuǎn)基因檢測（批次樣品量大小及其組成，見表1）。

表1 批次樣品量及組成

通過了國際種子協(xié)會（International Seed Testing Association，ISTA）認(rèn)證的檢測機(jī)構(gòu)，在收樣時遵從ISTA規(guī)范的規(guī)定，每份檢測樣品至少含有3 000粒種子。種子檢測機(jī)構(gòu)一般將樣品分為5份，并研磨其中2份用于轉(zhuǎn)基因檢測，因此，總收樣量至少15 000粒。

在我國轉(zhuǎn)基因檢測工作中，種子類樣品一般至少檢測3 000粒。對比來看，我國標(biāo)準(zhǔn)和歐盟的規(guī)范均能在95%的置信度下保證0.1%的檢測靈敏度，我國做法是符合國際規(guī)范的。

在計算種子數(shù)量方面，Tavazzano種子檢測實驗室的做法有自己的特色，在我國標(biāo)準(zhǔn)中，規(guī)定了不同作物種子的千粒重，而Tavazzano種子檢測實驗室采用了實測的值。在現(xiàn)實情況中，相同作物不同品種種子千粒重可能有翻番的差別，因此采取一個固定值有較大誤差。在可能情況下，在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定和修訂時應(yīng)考慮這個因素。

歐盟從事轉(zhuǎn)基因檢測的第三方檢測機(jī)構(gòu)也采用了經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（Organization for Economic Co-operation and Development，OECD）的標(biāo)準(zhǔn)通過了良好實驗室管理規(guī)范（Good Laboratory Practice，GLP）認(rèn)證，與政府實驗室類似，其樣品也來源于委托方送樣，并僅對來樣負(fù)責(zé)。

2 轉(zhuǎn)基因檢測方法的認(rèn)定

轉(zhuǎn)基因檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化是獲得準(zhǔn)確可靠、具有可比性檢測結(jié)果的基礎(chǔ)［13］。JRC下屬歐盟轉(zhuǎn)基因檢測基準(zhǔn)實驗室的主要任務(wù)是為歐盟的立法提供技術(shù)支持，工作的重點在檢測方法的研究和驗證上，不從事一般的日常檢測工作。

依據(jù)歐盟法規(guī)，申請在歐洲釋放的轉(zhuǎn)基因生物，需要通過某一成員國主管當(dāng)局申請。成員國主管當(dāng)局在確認(rèn)收到申請的同時，應(yīng)在90 d內(nèi)作成一份評估報告。若同意申請，成員國主管當(dāng)局應(yīng)盡快將評估報告和相關(guān)的信息發(fā)送給歐盟委員會和其他歐盟成員國。歐盟委員委托歐盟食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）在醫(yī)學(xué)、營養(yǎng)學(xué)、毒理學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)和其他相關(guān)學(xué)科方面的專家進(jìn)行評估。如果歐盟食品安全局和其他歐盟成員國沒有提出反對意見，則應(yīng)以書面形式批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因生物投放市場。

與此同時，申請者需向歐盟轉(zhuǎn)基因檢測基準(zhǔn)實驗室（或稱參考實驗室）提交檢測方法和對照材料，由歐盟參考實驗室組織12家歐盟實驗室網(wǎng)絡(luò)成員，對檢測方法進(jìn)行循環(huán)驗證。檢測方法達(dá)到歐盟相關(guān)法規(guī)要求的，方可依據(jù)安全評價結(jié)果，給予授權(quán)。歐盟轉(zhuǎn)基因生物授權(quán)程序，見圖1。

圖1 歐盟轉(zhuǎn)基因生物授權(quán)程序

由于歐盟要求對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行標(biāo)識，并設(shè)置了標(biāo)識閾值，因此提交給歐盟參考實驗室的轉(zhuǎn)基因檢測分析方法均為實時熒光定量PCR檢測方法，依據(jù)歐盟對轉(zhuǎn)基因檢測分析方法最低性能要求的定義，歐盟對檢測方法認(rèn)定分為兩個階段，第一階段為申請者提交方法文本的檢查，第二階段為檢測方法的循環(huán)驗證。

在第一階段，主要考察申請者提交檢測方法的如下性能特性：（1）適用性；（2）可操作性；（3）特異性；（4）動態(tài)范圍，即檢測的精確性和準(zhǔn)確性在線性范圍內(nèi)的轉(zhuǎn)基因成分濃度區(qū)間；（5）準(zhǔn)確性，±25%范圍內(nèi)；（6）擴(kuò)增效率，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率在-3.6至-3.1之間；（7）相關(guān)系數(shù)，R2≥0.98；（8）重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，線性范圍內(nèi)RSDr＜25%；（9）定量極限，RSDr＜25%前提下小于法規(guī)要求的標(biāo)識閾值0.9%的1/10，即0.09%或50拷貝；（10）檢測極限，在95%置信度下，小于法規(guī)要求的標(biāo)識閾值的1/20，即0.045%；（11）穩(wěn)健性，即可以忍受檢測實驗條件的小的變化，在此變化下檢測結(jié)果偏差不會超過±30%。

在第二階段，主要通過多實驗室聯(lián)合測試，確保申請者所提交方法符合歐盟要求，并且在不同實驗室有同樣性能表現(xiàn)?？疾斓闹饕笜?biāo)為動態(tài)范圍、再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差和準(zhǔn)確性。實驗室聯(lián)合驗證中，在精確度方面，所有濃度樣品的RSDr均應(yīng)低于35%。當(dāng)濃度小于0.2%時，RSDr在小于50%的范圍內(nèi)都是可以接受的。在準(zhǔn)確度方面，所有濃度樣品的偏差不得超過±30%。

3 樣品檢測

歐盟轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)無論采用何種技術(shù)規(guī)范，參加何種體系的認(rèn)證，出具的定性或定量報告，基本都采用熒光定量PCR進(jìn)行檢測。與常規(guī)PCR相比，熒光定量PCR顯著減少了實驗室PCR產(chǎn)物污染的可能性。這是因為PCR產(chǎn)物是轉(zhuǎn)基因檢測實驗室最主要的污染來源之一，而熒光定量PCR不需要電泳，因此反應(yīng)結(jié)束后不需要開蓋，避免了反應(yīng)產(chǎn)物泄漏造成的污染。此外，與常規(guī)PCR相比，熒光定量PCR具有檢測靈敏度更高、檢測速度更快的優(yōu)點。在意大利轉(zhuǎn)基因檢測國家基準(zhǔn)實驗室定性判斷也是基于熒光定量PCR的結(jié)果進(jìn)行，這種做法減少了實驗室污染，提高了檢測結(jié)果的可靠性。因此，我國應(yīng)在制定和修訂的轉(zhuǎn)基因檢測相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)時考慮增加采用熒光定量PCR檢測的內(nèi)容。

EURL-GMFF 是歐盟主要轉(zhuǎn)基因檢測方法的研制機(jī)構(gòu)之一，核心檢測室都有獨立的溫度、濕度和氣壓控制系統(tǒng)。實驗室內(nèi)的氣壓分為+20 mbar、+10 mbar、0 mbar、-10 mbar及-20 mbar 等5個等級，EURL-GMFF采用的不僅是簡單的正負(fù)壓控制，還根據(jù)實驗要求的潔凈程度和污染程度的不同進(jìn)行了細(xì)分。氣壓的多級控制事實上形成了實驗室內(nèi)部的連續(xù)穩(wěn)定氣流方向，進(jìn)一步提高了實驗室潔凈程度，從而保證了歐洲基準(zhǔn)實驗室方法研究和評價的準(zhǔn)確性，這一點值得我國未來的基準(zhǔn)實驗室參考。除了擁有實驗室正負(fù)壓控制系統(tǒng)外，歐洲基準(zhǔn)實驗室大量使用了100%外排生物安全柜。同時，所有的PCR準(zhǔn)備工作都在生物安全柜等專門的隔離的設(shè)施設(shè)備內(nèi)進(jìn)行。成本增加不多，但極大減少了污染的可能性。

意大利轉(zhuǎn)基因檢測國家基準(zhǔn)實驗室雖然面積緊張，但仍然采用了DNA自動提取設(shè)備，自動分液機(jī)械臂，高通量自動進(jìn)樣熒光定量PCR儀等高端設(shè)備，以減少人員的操作誤差和提高工作效率，這是未來轉(zhuǎn)基因檢測工作的發(fā)展方向之一，值得國內(nèi)跟蹤。

根據(jù)意大利轉(zhuǎn)基因檢測國家基準(zhǔn)實驗室介紹，其在DNA提取過程中除了使用傳統(tǒng)的CTAB法，也采取了3種不同的商品化試劑盒。由于利用不同方法從不同原料中提取DNA的效率不同，因此在定量時必須采用與標(biāo)準(zhǔn)相同的DNA提取方法。歐洲基準(zhǔn)實驗室公布的方法均是基于CTAB的方法，特別是IRMM提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在質(zhì)量百分比換算到拷貝數(shù)百分比時需要一個矯正系數(shù)，這個系數(shù)的獲得與CTAB法的提取效率相關(guān)聯(lián)［14，15］。如果實驗室貿(mào)然使用了非標(biāo)準(zhǔn)方法，而沒有考慮以上這些因素，可能造成較大的定量誤差。非標(biāo)準(zhǔn)方法的使用不僅在政府檢測實驗室中存在，而且在企業(yè)轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)也同樣存在，如意大利的一些第三方食品安全檢測實驗室等在樣品量大時為了加快檢測速度，使用了快速熒光定量PCR技術(shù)。

歐洲基準(zhǔn)實驗室公布的轉(zhuǎn)基因檢測方法都公開發(fā)布在網(wǎng)站并不斷更新（http：//gmo-crl.jr-c.ec.europa. eu/StatusOfDossiers.aspx）。如果成員國在檢測過程中需要使用的方法歐洲基準(zhǔn)實驗室沒有公布，則該國可以組織驗證，并由該國國家基準(zhǔn)實驗室發(fā)布。在突發(fā)事件的檢測中，立法機(jī)構(gòu)可以臨時發(fā)布新的檢測方法，并直接授權(quán)檢測機(jī)構(gòu)采用。這一點與我國做法類似，但具有更高的靈活性。

理論上轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)可分為通用元件篩查、目標(biāo)基因檢測、載體特異性檢測和轉(zhuǎn)化事件特異性檢測4個水平。但絕大多數(shù)檢測機(jī)構(gòu)均只進(jìn)行通用元件篩查和轉(zhuǎn)化事件特異性檢測，而且以上檢測均是以通用元件篩查為基礎(chǔ)，在通用元件篩查結(jié)果呈陽性的基礎(chǔ)上，再根據(jù)通用元件的信息進(jìn)行所有可能的轉(zhuǎn)化事件的檢測，如果篩查結(jié)果均為陰性，則不再進(jìn)行事件特異性檢測。檢測流程如圖2所示。

從以上分析可知，通用元件篩查的結(jié)果是歐盟轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)判斷樣品是否含轉(zhuǎn)基因成分的關(guān)鍵。同時，不同機(jī)構(gòu)篩查的轉(zhuǎn)基因元件有所不同，轉(zhuǎn)基因檢測國家基準(zhǔn)實驗室篩查的元件最多，共篩查CaMV 35S啟動子、NOS終止子、PAT基因、NPTII基因和CP4-EPSPS等5個元件，而Tavazzano種子檢測實驗室僅檢測CaMV 35S啟動子，選檢NOS終止子。根據(jù)公開信息可知，這種策略有較大的漏檢風(fēng)險。

在歐盟采用的定量標(biāo)識中，如果采用相對定量PCR技術(shù)，僅能標(biāo)識標(biāo)準(zhǔn)曲線最高和最低濃度范圍內(nèi)的含量，如采用5%的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，連續(xù)稀釋至0.1%，那么僅能給出5%-0.1%范圍內(nèi)的值。超過標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點的測定值僅能標(biāo)識為＞5%，低于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點的測定值僅能標(biāo)識為＜0.1%。在沒有擴(kuò)增信號的情況下，結(jié)果表述為＜LOD，在有擴(kuò)增但含量低于定量極限的情況下，結(jié)果表述為＜LOQ。

圖2 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測流程（以大豆為例）

根據(jù)以上所述，我國與歐盟在轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)方面的對比，如表2所示。

表2 我國與歐盟在轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)方面的對比

4 結(jié)果的表述和不確定度

任何定量的結(jié)果，均應(yīng)提供測定值及測定值的不確定度，轉(zhuǎn)基因含量的定量也不例外［16］。不確定度的計算大體可以分為Bottom up和Top down兩種方式，分別適用于不確定度來源清晰、可分別測量的工作和來源復(fù)雜不可分拆的情況。

在歐盟轉(zhuǎn)基因檢測工作中，轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制事實上采用的是Bottom up方式，分別測定各測量、加工步驟產(chǎn)生的不確定度，并最終合成到總的不確定度中。

而轉(zhuǎn)基因檢測方法的不確定度的來源則非常復(fù)雜，包括了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度、不同儀器設(shè)備產(chǎn)生的不確定度、不同試劑產(chǎn)生的不確定度，不同操作人員引起的不確定度等（圖3）。這些不確定度有些來源于系統(tǒng)誤差，有些則是隨機(jī)因素引起。在系統(tǒng)誤差難以測量的情況下，可以將所有的不確定度當(dāng)作隨機(jī)誤差引起的B類不確定度進(jìn)行計算。

JRC在《Guidance document on measurement uncertainty for GMO testing laboratories》中推薦了兩種轉(zhuǎn)基因檢測不確定度測定方法［17］，分別適合單個實驗室內(nèi)部確定和利用檢測方法循環(huán)驗證數(shù)據(jù)測定。在采用沒有多家實驗室循環(huán)驗證數(shù)據(jù)的方法的情況下，可以由單一實驗室的歷史數(shù)據(jù)來確定該實驗室采用該方法的不確定度。但由于歐盟基準(zhǔn)實驗室公布的方法均經(jīng)過多家實驗室的循環(huán)驗證，代表了該方法在一般實驗室使用的情況，并公布了包括檢測方法在各實驗室使用結(jié)果的驗證報告，因此可以直接計算出該方法在一般轉(zhuǎn)基因檢測實驗室使用的不確定度。多數(shù)轉(zhuǎn)基因檢測實驗室選擇了利用循環(huán)驗證報告直接計算本實驗室數(shù)據(jù)的不確定度。事實上，參照《Guidance document on measurement uncertainty for GMO testing laboratories》還可以利用檢測方法的驗證報告計算該檢測方法的LOD和LOQ。因此，這個指南解決了轉(zhuǎn)基因定量檢測的主要數(shù)據(jù)處理問題。

置信區(qū)間事實上是根據(jù)t分布計算的。根據(jù)《Guidance document on measurement uncertainty for GMO testing laboratories》可知，在擴(kuò)展系數(shù)取2時，利用這種方法測定的不確定度事實上是測定值的雙尾95%置信區(qū)間。這個計算方法本身并沒有問題。但當(dāng)該區(qū)間的下限超過0.9%時，實際上是有97.5%的概率大于0.9%的歐盟標(biāo)識閾值，這種做法實際上比法律要求的更高，歐盟的轉(zhuǎn)基因檢測實驗室工作人員實際上也承認(rèn)這個缺陷，但由于這個方法來源于歐盟推薦的文獻(xiàn)，因此他們必須采用。我國將來如采用定量檢測和標(biāo)識，應(yīng)重新考慮這個問題。

圖3 利用Real-time PCR對DNA中轉(zhuǎn)基因含量檢測時不確定度的來源

5 對我國轉(zhuǎn)基因生物安全檢測的啟示和建議

5.1 建立我國轉(zhuǎn)基因檢測方法的實驗室循環(huán)驗證制度

科學(xué)、有效的轉(zhuǎn)基因檢測方法是轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管的重要前提和基礎(chǔ)。歐盟在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品授權(quán)程序中，突出強(qiáng)調(diào)檢測方法的審查與循環(huán)驗證，制定了專門的文件對檢測方法性能要求、認(rèn)定及驗證程序進(jìn)行規(guī)定，并將檢測方法是否符合歐盟監(jiān)管要求作為是否給予授權(quán)的必要條件。我國對轉(zhuǎn)基因生物實施全程監(jiān)管并要求對列入標(biāo)識目錄的進(jìn)行標(biāo)識，檢測方法是我國安全監(jiān)管和標(biāo)識制度實施的基礎(chǔ)。目前，我國對于申請安全評價的轉(zhuǎn)基因生物沒有明確法規(guī)要求研發(fā)機(jī)構(gòu)提供陽性樣品，對其提供的檢測方法，僅進(jìn)行文字材料審查。這些無法保證提供的方法滿足我國轉(zhuǎn)基因檢測機(jī)構(gòu)的使用和安全監(jiān)管需求。建議將提供陽性樣品和檢測方法作為申報安全證書的必要條件，并開展提供的檢測方法的實驗室循環(huán)驗證。

5.2 提高我國農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因檢測能力建設(shè)水平

通過幾年來的建設(shè)，我國轉(zhuǎn)基因檢測體系基本完善，技術(shù)水平也有了很大提高，但與歐盟檢測實驗室及化學(xué)類檢測實驗室相比較，整體自動化水平還比較低，檢測通量還很小，檢測成本偏高。因此有必要參考?xì)W盟檢測實驗室的發(fā)展經(jīng)驗，進(jìn)一步提高我國轉(zhuǎn)基因檢測能力水平，同時加快推薦配套的標(biāo)準(zhǔn)體系和管理體系的建設(shè)。

我國目前尚未設(shè)置轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識閾值，現(xiàn)今生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，零閾值的定性標(biāo)識導(dǎo)致實際操作困難。因此，有必要參考?xì)W盟經(jīng)驗及考慮我國的具體情況調(diào)整標(biāo)識制度。同時對各檢測機(jī)構(gòu)的檢測能力和水平進(jìn)行進(jìn)一步提升，大力加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因定量檢測支撐體系建設(shè)。

在檢測技術(shù)方面，我國主要采用定性PCR檢測方法，此方法具有對設(shè)備技術(shù)要求簡單，檢測成本低等優(yōu)點，在我國轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管中發(fā)揮了重要作用，但隨著檢測技術(shù)水平和監(jiān)管要求的提高，其不足之處也有所體現(xiàn)。一是與普遍采用定量檢測方法的歐盟等國家或地區(qū)檢測結(jié)果無法比較、互認(rèn)，不利于貿(mào)易爭端的解決；二是進(jìn)行凝膠電泳增加了檢測步驟，易產(chǎn)生氣溶膠污染；三是在檢測的靈敏度、準(zhǔn)確性方面與定量PCR有差距。另外，我國大部分檢測機(jī)構(gòu)都配備了定量PCR儀，掌握了實時熒光PCR檢測操作技術(shù)。因此，建議推進(jìn)定量PCR在我國檢測機(jī)構(gòu)中的應(yīng)用并逐步替代定性PCR，推進(jìn)轉(zhuǎn)基因檢測與國際接軌。此外，由于轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)既是保障轉(zhuǎn)基因定量檢測準(zhǔn)確可靠的基本前提，也是轉(zhuǎn)基因檢測工作的核心。因此，建議加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制，研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以促進(jìn)轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)和方法研究的發(fā)展，為我國轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管和安全評價提供更好的物質(zhì)保障。

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（責(zé)任編輯 狄艷紅）

The Status and Inspiration on the Safety Detection Technology of Genetically Modified Organisms in European Union

Wu Gang1Jin Wujun2Xie Jiajian3Shen Ping4Li Wenlong4Song Guiwen4
（1. Oil Crops Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Wuhan 430062；2. Biotechnology Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081；3. Institute of Plant Protection，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193；4. Development Center of Science and Technology，Ministry of Agriculture，Beijing 100122）

In order to view the current status and inspiration on the safety detection technology of genetically modified organisms in European Union， this study was fulfilled on the basis of visiting eight detection agencies for genetically modified organisms（GMO）in the European Union（EU）. Several key technical points in GMO detection process and the implementation in EU were elaborately expounded. The specific contents included sampling and preparation methods of samples， loop verification of transgenic detection method and parameter requirements， strategies of sample testing and requirements of laboratory environments， representations of test results and evaluation of uncertainty. Finally， combined with the development status of GMO detection techniques in China， suggestions of carrying out inter-laboratory trial validation of detection method and strengthening quantitative PCR detection technology were proposed.

European Union；genetically modified organism；detection technology

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.001

2015-03-31

國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項（2014ZX08012-003）

吳剛，男，研究員，研究方向：轉(zhuǎn)基因生物安全檢測；E-mail：wugang@caas.cn

宋貴文，男，高級農(nóng)藝師，研究方向：轉(zhuǎn)基因生物安全檢測；E-mail：songguiwen@agr.gov.cn