胎盤胎膜中細胞凋亡與分娩發動、產程進展的研究

康 凌李夢夢

（1 河南省南陽市第二人民醫院婦產科，河南 南陽 473012；2 南陽醫專附屬醫院，河南 南陽 473000）

胎盤胎膜中細胞凋亡與分娩發動、產程進展的研究

康 凌1李夢夢2

（1 河南省南陽市第二人民醫院婦產科，河南 南陽 473012；2 南陽醫專附屬醫院，河南 南陽 473000）

目的 研究胎盤胎膜中羊膜上皮細胞、絨毛膜滋養細胞、胎盤絨毛滋養細胞及蛻膜細胞凋亡情況與分娩發動的關系。方法 回顧性分析我院49例未臨產和順產患者，用Hochest 33258染色法檢測細胞形態學變化和用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。結果 羊膜上皮細胞、絨毛膜滋養細胞、胎盤絨毛滋養細胞及蛻膜細胞的凋亡指數在未臨產組與順產組有顯著性差異（P＜0.05）。結論 胎盤胎膜中細胞凋亡的變化可能與分娩發動、產程進展有關。

胎盤胎膜；細胞凋亡；分娩發動

細胞凋亡是細胞的生理性死亡。在胚胎形成與生長、內環境的穩定、神經系統以及調節免疫功能等方面有重要作用。近年來，胎盤胎膜中細胞凋亡與分娩發動的相關性研究已成為熱點。胎盤胎膜細胞的凋亡對妊娠以及結局至關重要，其增殖分化與凋亡的發生可能導致一系列的病理性妊娠，有文獻報道，細胞凋亡的變化及異常表達與妊娠的發生、發展有著密切的關系［1］。本實驗通過對未臨產剖宮產和順產病例的研究，探討細胞凋亡與分娩動因的關系，分析細胞凋亡與分娩發動的相關性，為病理性妊娠提供理論依據。

1　資料與方法

1.1一般資料：所有入選病例均為我院2008年5月至2010年10月的妊娠患者，均為足月妊娠初產婦。入選條件：全部病例均無妊娠高血壓、前置胎盤、胎盤早剝、羊水過多或過少、胎兒宮內發育受限以及胎膜

早破以及無糖尿病、肝炎、甲狀腺功能亢進癥、心臟病和肺結核等妊娠合并癥，且產程中均無特殊用藥。月經周期規律（28～30 d），準確記錄末次月經時間，妊娠期間未使用激素或放置宮內節育器，身體素質良好。所有病例分為未臨產和順產兩組，其中未臨產組18例，患者因臀位、頭盆不稱或相對頭盆不稱等選擇性剖宮產終止妊娠，B超檢測及臨床證實胎兒已成熟而無產兆者，年齡22～34歲，平均26.9歲，孕齡37～41周，平均39周；順產組31例，B超檢測及臨床證實胎兒已成熟，年齡23～35歲，平均25.9歲，孕齡38～41周，平均39周。兩組之間在年齡和孕齡上無統計學差異（P＞0.05）。

1.2方法

1.2.1取材：取胎盤母面中央部約1.2 cm×1.2cm×1.2 cm大小組織塊，避開出血、壞死及鈣化部位。用Hank's液洗3次，手術剪將胎盤胎膜剪成小塊（1 mm2），再用Hank's液3次，轉移至小青霉素瓶中，加入5～6倍的0.5%胰酶液，37 ℃消化20～30 min，每隔5 min振蕩1次，使細胞分離。加入5 mL DMEM培養液終止胰酶消化，靜置10 min，取懸液加入到離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄上清液，再加入Hank's液5 mL，離心，棄上清液，將細胞調整到5×105/mL，轉移至25 mL細胞培養瓶中，37 ℃下培養，取對數生長期細胞用于實驗。

1.2.2試劑：Hank's液（購于上海生科生物科技有限公司）；0.5%胰酶（購于上海博升生物科技有限公司）；PBS緩沖液（購于上海生科生物科技有限公司）；DMEM培養液（購于Gibco公司）；Hoechst33258-PI試劑盒（購于南京碧波生物科技有限公司）；Annexin/PITC試劑盒（購于上海優寧維生物科技有限公司），具體操作按試劑盒步驟進行，并設對照組。

1.2.3儀器：細胞培養箱（上海隆拓設備儀器有限公司）；流式細胞儀（北京東訊天地醫療儀器有限公司）；熒光顯微鏡（上海蔡康光學儀器廠）。

1.3統計學處理：采用統計學軟件SPSS 17.0，所得數據進行統計學分析，兩組率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

2.1Hoechst 33258/PI染色觀察凋亡細胞形態改變：未臨產組與順產組細胞Hoechst 33258/PI染色觀察細胞凋亡形態變化比較，可見順產組凋亡細胞增多，表現為染色質凝集，細胞核碎裂成碎片狀等細胞凋亡特征性變化（圖1、2）。

圖1　未臨產組Hoechst 33258/PI染色凋亡細胞形態變化

圖2　順產組Hoechst 33258/PI染色凋亡細胞形態變化

2.2胎盤胎膜中細胞凋亡情況：順產組羊膜上皮細胞、絨毛膜滋養細胞、胎盤絨毛滋養細胞及蛻膜細胞凋亡指數均比未臨產組升高，兩組之間差異有顯著性（P＜0.05）。見表1。

2.3流式細胞儀分析細胞凋亡情況：流式細胞儀分析羊膜上皮細胞、絨毛膜滋養細胞、胎盤絨毛滋養細胞、蛻膜細胞可見，順產組與未臨產組比較，凋亡率顯著升高（P＜0.05）。見圖3、4。

表1　未臨產組與順產組凋亡指數比較

圖3　未臨產組流式細胞儀檢測凋亡細胞（A：羊膜上皮細胞；B：絨毛膜滋養細胞；C：胎盤絨毛滋養細胞；D：蛻膜細胞）

圖4　順產組流式細胞儀檢測凋亡細胞（A：羊膜上皮細胞；B：絨毛膜滋養細胞；C：胎盤絨毛滋養細胞；D：蛻膜細胞）

3　討 論

1972年Kerr首次提出細胞凋亡的概念，宣告細胞凋亡探索的開始，之后進行了較多的研究［2］。細胞凋亡在胚胎發育、細胞更替、激素退化、萎縮和、老化以及自身免疫性疾病和腫瘤中，起著舉足輕重的作用［3］。細胞凋亡是受環境的刺激引起的一種受基因調控的主動的生理性死亡，以形態學和生化改變為特性［4-5］。本實驗用熒光顯微鏡技術發現，順產組凋亡細胞增多，表現為染色質凝集，細胞核碎裂成碎片狀等細胞凋亡特征性變化，未臨產組細胞凋亡相對較少。流式細胞儀分析羊膜上皮細胞、絨毛膜滋養細胞、胎盤絨毛滋養細胞、蛻膜細胞可見，順產組與未臨產組比較，凋亡率顯著升高（P＜0.05）。實驗結果顯示隨分娩發動胎盤、胎膜組織中發生凋亡的細胞逐漸增多，產程進展越到后期發生凋亡的細胞數目也越多，表明胎盤、胎膜細胞凋亡的變化與分娩發動和產程進展有關。

目前，關于分娩發動與產程進展學說主要理論有雌孕激素理論、前列腺素理論，受體理論，免疫因素理論以及宮頸成熟理論等。現已證明蛻胎盤胎膜可合成和代謝雌、孕激素，使局部子宮內雌激素水平升高，超過孕激素的抑制作用，就可使分娩發動［1］。本實驗認為胎盤細胞凋亡與分娩發動關系密切，機制可能為胎盤中的細胞凋亡發生率升高，影響胎盤的作用，使對雌激素、孕激素、前列腺素等的合成和代謝發生變化，從而導致分娩發動與產程進展。細胞凋亡與分娩發動、產程進展的關系以及與上述理論因素的相關性仍需進一步研究。

［1］Kokawa K，Shikone T，Nakano R.Apoptosis in human chorionic villi and decidua during normal embryonic development and spontaneous abortion in the first trimester［J］.Placenta，1998，19（1）： 21-26.

［2］Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis ： abasic biological phenomenon with wide-ranging implications intissue kinetics［J］. Br J Cancer，1992，26（4） ：239-257.

［3］李玉林.病理學［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2008： 17-18.

［4］李巨.產科理論與手術［M］.沈陽：遼寧科學技術出版社，1998：147-152.

［5］Aqarwal S，Roy S，Ray A，et al.Arsenic trioxide and lead acetate induce apoptosis in adult rat hepatic stem cells［J］.Cell Biol Toxicol，2009，25（4）： 403-413.

R714

B

1671-8194（2015）29-0175-02