ELISA試驗灰區設置對結果的影響

馬曉旭

（本溪市中心血站檢驗科，遼寧 本溪 117000）

ELISA試驗灰區設置對結果的影響

馬曉旭

（本溪市中心血站檢驗科，遼寧 本溪 117000）

目的 探究ELISA試驗灰區設置對結果的影響，為臨床輸注安全血液提供有效保障。方法 從2010年1月至2014年1月選取42例在我血站檢驗科經酶聯免疫吸附法檢測為乙型肝炎病毒表面抗原為陽性的獻血者血清進行研究，探究灰區的設定對獻血者最終檢測結果的影響。結果 根據不同濃度血清檢測結果可見，獻血者血清ELISA檢測的S/CO值隨著血清濃度的增加而減小，CV則隨著血清濃度的減小而增大；隨著灰區設置范圍的逐漸提高，檢測的敏感度逐漸提高，特異度隨之降低；通過理想狀態下的計算（即X=1），得出CV=0.247，灰區上限=1.59，灰區下限=0.406，即灰區設置為0.406～1.59為最佳狀態。結論 灰區設置能夠明顯影響到檢測結果，本研究最佳灰區設置0.406～1.59，即在該灰區設置下，檢測結果最為準確，實際檢測中應視情況對灰區進行合理的設置。

ELISA；灰區；乙型肝炎

酶聯免疫法是臨床上應用最為廣泛的檢測方法之一，由于其具有價格低廉、操作簡便、得出結果快的優點，因此其能得到醫學界的認可［1］。但由于酶聯免疫試劑是一種半定量試劑，使得其在進行檢測時變異系數較大，灰區的范圍相對較寬，因此合理的設置灰區分為對于實驗結果有著重大影響［2］。本研究為探究ELISA試驗灰區設置對結果的影響，特選取病例血樣標本進行研究，得到了一些結論，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：選取2010年1月至2014年1月在我血站檢驗科經雙試劑檢測為陽性42例獻血者，所取標本均為乙型肝炎病毒表面抗原OD值均在0～0.1的陽性標本，其中男性患者22例，女性20例，年齡25～52歲，平均年齡（40.7±5.1）歲。所有標本均未出現凝集不完全、脂血、黃疸等現象。

1.2試劑及儀器：①試劑：HBsAg試劑由北京萬泰生物制品有限公司提供，由北京康徹斯坦公司提供弱陽性質控品，濃度為0.2 IU，所有試劑均在其有效使用范圍內。②儀器：采用帝肯EVO加樣儀（瑞士帝肯公司）以及FAME全自動酶免分析儀（瑞士奧斯邦生物工程有限公司）。

1.3研究方法：將本研究所選取的42例標本，用AB型血清對所選標本進行一系列濃度的稀釋，分別對各個濃度的血清標本進行重復檢測20次，得到一組S/CO的值以及變異系數（CV），并計算平均值。

1.4統計學方法：采用SPSS13.0統計軟件分析，百分比數據比較采用χ2檢驗，計量數據以（）表示，實施t檢驗，根據回歸方程計算S/CO為1時臨界值血清的CV，并計算出灰區的上下限。

2　結 果

2.1不同濃度血清的檢測結果分析：根據不同濃度血清檢測結果可見，獻血者血清ELISA檢測的S/CO值隨著血清濃度的增加而減小，CV則隨著血清濃度的減小增大。見表1。

表1　不同濃度血清的檢測結果分析

2.2灰區范圍變化對檢測敏感度和特異度的變化分析：隨著灰區設置范圍的逐漸提高，檢測的敏感度逐漸提高，特異度隨之降低。見表2。

表2　灰區范圍變化對檢測敏感度和特異度的變化分析

2.3灰區范圍：以S/CO為自變量，CV為應變量，采取擬合優度檢驗，選取出擬合度最好的回歸方程（決定系數R2=0.999，P=0.001）。通過理想狀態下的計算（即X=1），得出CV=0.247，灰區上限=1.59，灰區下限=0.406，即灰區設置為0.406～1.59為最佳狀態。根據回歸方程作圖如下（圖1）。

圖1　不同濃度標本S/CO與CV的二次回歸方程圖像

3　討 論

酶聯免疫法是一種臨床應用最為廣泛的免疫測定法，但其會受到許多外界因素的影響，如板間差異，實驗室溫度等，會出現敏感性較低，非特異性結合較高的情況。此外，由于缺乏標準品的校驗，再加上判讀方式比較獨特，使得同樣的標本在多次測定中出現不同的吸光值的現象。如果這個吸光值很高或者很低，那這個樣本最后得到的結果并不會受到影響，但是如果這個樣本的吸光值在CO值的附近，則該樣本的吸光值的波動則可能造成檢測結果的差異。因此，灰區的設定對于實驗檢驗結果存在一定程度上的影響。

為探究ELISA試驗灰區設置對結果的影響，本研究特選取雙陽性標本進行研究發現，隨著灰區設置不同，結果產生了較大的差異。隨著灰區范圍的逐漸升高，檢測的敏感度得到了提升。有報道選取了大量的實驗樣本進行研究發現，灰區分為S/CO值設定在0.684～1.314是目前使用價值最高的灰區范圍。而本研究發現，隨著標本血清的稀釋，S/CO值在不斷的減小，而CV值則相應的出現增大，由于HBsAg檢測方法以及判定方式的特殊性，S/CO的值越大，則該標本陰性的可能性就越大，假陽性的發生概率則越小［3-4］。但考慮到對HBsAg進行酶聯免疫檢測會受到加樣時間、孵育溫度以及不同操作人員所造成的差異等因素的影響，使得CV的值會出現明顯的變化，因此在進行實際的檢驗時，需要嚴格規范的按照說明書的流程進行操作。此外，本研究的灰區設置是在理想狀態下進行的，但在實際情況中無法達到這種理想狀態，在日常的實際操作中，這種理想狀態是比較難達到的，所以無法直接得到實際的灰區設置。需要根據具體情況設定灰區范圍。當灰區范圍設定成功后，需要對所設定的灰區進行驗證，以確定灰區設置的合理性。

綜上所述，灰區設置會明顯影響到檢測結果的差異，合理的對分區范圍進行設置能夠有效減少假陽性、假陰性的發生概率，提高檢測的準確度。

［1］魏蘭華，梁俊，吳守成，等.ELISA法檢測抗-HIV實驗中灰區設置的探討［J］.醫學信息，2014，27（38）：219-219.

［2］陳善華，朱麗莉，李浩，等.ELISA方法檢測HBsAg設置灰區的必要性探討［J］.中國輸血雜志，2013，26（10）：1013-1014.

［3］劉胡敏，陶傳敏，黃錦江，等.ELISA檢測丙型肝炎病毒設置灰區的必要性［J］.現代預防醫學，2013，4（8）：1490-1491.

［4］陳顯，朱紹汶，黃成垠，等.ELISA法檢測抗-HCV灰區設置探討［J］.臨床輸血與檢驗，2013，15（30）：243-244.

R446；R512.6+2

B

1671-8194（2015）29-0133-02