當(dāng)歸、川芎不同配比中阿魏酸的含量測定

顧秀琰，王雪梅，王昕

（1.甘肅省中醫(yī)院，甘肅蘭州730050；2.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000）

當(dāng)歸、川芎不同配比中阿魏酸的含量測定

顧秀琰1，王雪梅1，王昕2

（1.甘肅省中醫(yī)院，甘肅蘭州730050；2.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州730000）

目的比較當(dāng)歸川芎不同配比中阿魏酸的含量變化，為臨床治療提供當(dāng)歸川芎的最佳配伍比例。方法用HPLC法，色譜柱：Agileht ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 m，5 μm），流動相：乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83，流速為1 mL·min-1，檢測波長為320nm。采用水煎法制備上述藥對作為供試品。結(jié)果阿魏酸回歸方程Y=97268X-12960，r=0.9999，在12.5～250μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率97.55%，RSD為2.10%。結(jié)論當(dāng)歸與川芎配比1∶5時(shí)阿魏酸的含量最高。

當(dāng)歸；川芎；不同配比；阿魏酸；HPLC

當(dāng)歸-川芎是臨床常用補(bǔ)血活血之藥對。當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸的根，性溫味甘辛，歸心、肝、脾經(jīng)，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸之功效，用于血虛萎黃、眩暈心悸、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、虛寒腹痛、風(fēng)濕痹痛、跌仆損傷、癰疽瘡瘍，有養(yǎng)血而不滋膩、活血而不傷正的優(yōu)點(diǎn)。川芎為傘形科草本植物川芎的根莖，性溫味辛，歸肝、膽經(jīng)，具有行氣開郁、祛風(fēng)燥濕、活血止痛的功效，用于頭痛、風(fēng)濕痹痛、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、瘡瘍腫痛、癥瘕腹痛、跌仆腫痛等，為“血中之氣藥”。二者均可用來治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、瘡瘍腫痛等，其主要成分均為阿魏酸，配伍使用，可增強(qiáng)養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、行氣活血的功效［1-2］，均為婦科要藥。王歡等［2］應(yīng)用數(shù)據(jù)與方法對當(dāng)歸-川芎在古方中的使用頻次統(tǒng)計(jì)表明，當(dāng)歸、川芎在治療婦科疾病時(shí)，使用頻次1 622次，配伍使用頻次在10次以上，且藥對川芎-當(dāng)歸組成的佛手散長期以來被用于治療動脈粥樣硬化和高血壓病［3］。近年來，就當(dāng)歸和川芎藥理作用的研究具有相似點(diǎn)，主要集中在抗血小板聚集和血栓形成、擴(kuò)血管、清除氧自由基、保護(hù)臟器的缺血損傷、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等方面［4-5］。

阿魏酸（ferulic acid）是當(dāng)歸、川芎的有效成分之一，其化學(xué)名4-羥基-3-甲氧基肉酸，是桂皮酸的衍生物之一。藥理學(xué)研究表明，阿魏酸能改善血液循環(huán)、抗凝血并能抑制血小板聚集，有明顯的抗血栓作用；有抑制巨噬細(xì)胞活化、抑制花生四烯酸（AA）代謝、拮抗組胺、降低血管通透性、抗氧化和清除自由基等廣泛藥理作用。臨床用于治療血管栓塞性脈管炎、動脈粥樣硬化、急性腦血栓和偏頭痛及動脈粥樣硬化等［6］。阿魏酸能通過抑制細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2）、應(yīng)激活化蛋白激酶（JNK）而顯著抑制有血管緊張素II誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞VSMC增生。結(jié)果顯示，阿魏酸將有可能成為有效治療心血管疾病的藥物［7］。因此，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定當(dāng)歸-川芎不同比例配伍后阿魏酸含量的變化，為含當(dāng)歸-川芎的復(fù)方方劑分析和臨床治療藥物監(jiān)測提供質(zhì)量依據(jù)，現(xiàn)介紹如下。

1　儀器與材料

Waters600高效液相色譜儀；電子天平（BS124S北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定研究院，110773-201012）；乙腈為色譜純，購自山東禹王公司；磷酸為分析純，購自天津凱信公司；川芎飲片、當(dāng)歸飲片（均來源于甘肅省中醫(yī)院飲片藥房，由李喜香主任藥師鑒定）；水為重蒸餾水。

2　方法

2.1對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品2.5 mg，用流動相定容于10 mL棕色容量瓶中，作為對照品貯備液。分別取貯備液0.25 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL置于5 mL棕色容量瓶中，用流動相定容作為標(biāo)準(zhǔn)曲線制備液。

2.2樣品溶液的制備

分別稱取適量當(dāng)歸-川芎不同配比（1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1）的藥材置于不銹鋼鍋中，加入4倍量水浸泡30分鐘，電磁爐加熱煮沸30分鐘，過濾，殘?jiān)儆?倍量水加熱煮沸20分鐘，過濾，合并藥液，文火濃縮至60 mL，備用。

2.3色譜條件

Agileht ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 m，5 μm）；流動相：乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83（v/v）；流速為1 mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長為320 nm。色譜圖見圖1。

圖1　當(dāng)歸-川芎不同配比中阿魏酸HPLC圖

3　結(jié)果

3.1線性關(guān)系分析

取2.1項(xiàng)中標(biāo)準(zhǔn)曲線制備液，分別進(jìn)樣20 μL測定。由峰面積（Y）對相應(yīng)的濃度（X）做線性回歸，阿魏酸回歸方程為Y= 97 268X-12 960，r=0.999 9，表明阿魏酸在12.5～250 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2精密度實(shí)驗(yàn)

取2.1項(xiàng)中對照品貯備液，精密吸取20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定阿魏酸的峰面積，其峰面積RSD=1.47%，表明儀器精密度良好。

3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取20 μL配比為1∶5的樣品溶液，分別在0小時(shí)、2小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)內(nèi)測定，其阿魏酸峰面積RSD=1.93%，表明樣品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

3.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取20 μL配比為1∶5的樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，其阿魏酸峰面積RSD=2.60%，重復(fù)性符合要求。

3.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取約6 g已知含量配比為1∶5的藥材飲片，精密加入阿魏酸對照品溶液（3種不同濃度水平，各3份）。按2.2項(xiàng)下條件制備樣品溶液，定容至10 mL；各進(jìn)樣20 μL，測定阿魏酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：平均加樣回收率為97.55%，RSD為2.10%，加樣回收率符合規(guī)定，說明方法的準(zhǔn)確度較好。

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3.6樣品的測定

按2.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣20 μL，測定當(dāng)歸、川芎不同配比下阿魏酸的含量，結(jié)果見表2。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，當(dāng)歸與川芎配比為1∶5時(shí)阿魏酸的含量最高，配比為4∶1時(shí)阿魏酸的含量最低。

表2　樣品測定結(jié)果

4　討論

（1）阿魏酸結(jié)構(gòu)中有酚羥基和苯環(huán)共軛的雙鍵而使其性質(zhì)極不穩(wěn)定，特別是具有光不穩(wěn)定性，配制時(shí)應(yīng)存放在棕色容量瓶里。方法學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，該法線性關(guān)系良好，回收率、精密度高，具有準(zhǔn)確、靈敏的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)歸與川芎配比為1∶5時(shí)，阿魏酸的含量最高，而隨著配比的變化，阿魏酸含量也發(fā)生了不同程度降低，這為當(dāng)歸-川芎的復(fù)方方劑分析和臨床藥物檢測提供了質(zhì)量依據(jù)。

（2）本實(shí)驗(yàn)曾選用過甲醇、乙腈-冰醋酸-水和甲醇、乙腈-磷酸-水作為流動相，對樣品溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，流動相條件為乙腈∶0.085%磷酸水溶液=17∶83（v/v）時(shí)，樣品溶液色譜峰分離效果好，且雜質(zhì)少。

（3）根據(jù)白晶等［8］在當(dāng)歸-川芎藥對中阿魏酸在體腸吸收研究結(jié)果表明，與單味藥相比較，藥對中阿魏酸的吸收在質(zhì)量濃度、pH值及胃腸道方面均表現(xiàn)出較大的優(yōu)越性。相同質(zhì)量濃度（以阿魏酸為準(zhǔn)）給藥時(shí)，藥對中阿魏酸的吸收更完全、更迅速。因此，本實(shí)驗(yàn)通過比較當(dāng)歸、川芎不同配比中阿魏酸的含量，尋找出阿魏酸含量最高時(shí)當(dāng)歸、川芎的配比，從而指導(dǎo)臨床合理有效用藥。

［1］李偉霞，唐于平，郭建明，等.當(dāng)歸川芎藥對及其組成藥味對3種血虛模型補(bǔ)血作用的比較研究［J］.中國中藥雜志，2011，36（13）：808.

［2］王歡，唐于平，丁安偉，等.當(dāng)歸-川芎藥對不同配比的中醫(yī)應(yīng)用數(shù)據(jù)分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15（11）：44-47.

［3］張煥，王一濤，嚴(yán)燦，等.當(dāng)歸與川芎藥理作用研究進(jìn)展與比較［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19（2）：293-295.

［4］夏泉，張平，李紹平，等.當(dāng)歸的藥理作用研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004，15（3）：164.

［5］李秋怡，干國平，劉焱文.川芎的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17（7）：1298.

［6］胡益勇，徐曉玉.阿魏酸的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展［J］.中成藥，2006，28（2）：253-255.

［7］Hou Yongzhong，Yang Jie，Zhao Guangrong.Ferulic acid inhibits vascular smooth muscle cell proliferation induced by angio tensin II［J］.European Journal of Pharmacology，2004（499）：85.

［8］白晶，丁振鐸，徐昶儒，等.“當(dāng)歸-川芎”藥對中阿魏酸在體腸吸收研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（2）：129-132.

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1671-1246（2015）22-0158-02