愈寧心軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

凱迪日耶·玉蘇普，白夢娜，譚睿，王艷

（1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川成都610031；2.西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，四川成都610031）

愈寧心軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

凱迪日耶·玉蘇普1，白夢娜1，譚睿2，王艷1

（1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川成都610031；2.西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，四川成都610031）

目的建立愈寧心軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對葛根進(jìn)行定性鑒別。采用高效液相色譜法測定葛根素的含量，色譜柱為Agilent HC-C18柱（150mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），檢測波長為250 nm，流速為1.0mL/min，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果在選定的薄層色譜條件下，層析斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾。含量測定時，葛根素質(zhì)量濃度在84.4～422.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 3），平均回收率為95.13%，RSD為3.09%（n=6）。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠，可作為愈寧心軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

愈寧心軟膠囊；葛根素；薄層色譜法；高效液相色譜法

愈寧心軟膠囊是廣州奇星藥業(yè)有限公司研制的現(xiàn)代復(fù)方制劑，由野葛、天麻、大棗等中藥材組方，具有解痙止痛、增強(qiáng)腦及冠狀動脈血流量等功效，臨床上用于高血壓頭痛、頭暈，頸項疼痛、冠心病、心絞痛、神經(jīng)性頭痛及早期突發(fā)性耳聾等癥。愈寧心軟膠囊主要活性成分為葛根素、大豆苷元等。本試驗中采用薄層色譜（TLC）法對方中葛根進(jìn)行了定性鑒別，并應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法測定葛根素的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了可行的方法［1-2］。

1　儀器與試藥

HP1100型HPLC儀（美國惠普）；SL302K型電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）。葛根購自成都市新荷花藥業(yè)公司，經(jīng)西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院譚睿教授鑒定為正品；葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110752-201015）；愈寧心軟膠囊（廣州奇星藥業(yè)有限公司）；陰性樣品（按處方工藝制得缺葛根樣品）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1葛根定性鑒別［3-4］

稱取軟膠囊內(nèi)容物約1 g，加水10 mL，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次，每次10 mL，合并萃取液，水浴揮干，殘渣加甲醇10mL溶解，作為供試品溶液。取陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。取葛根素對照品，加甲醇制成每1mL含1mg溶質(zhì)的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾。見圖1。

2.2葛根素含量測定［5-6］

2.2.1色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）；檢測波長：250 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按葛根素峰計應(yīng)不低于2 500。

圖1　薄層色譜圖

2.2.2溶液制備

精密稱取葛根素對照品21.1mg，加甲醇制成每1mL含4.22mg葛根素的溶液，作為對照品溶液；稱取軟膠囊內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，加甲醇稀釋并定容10 mL容量瓶中，吸取0.5 mL，加甲醇稀釋至10mL容量瓶中，作為供試品溶液。取陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制備，得陰性對照品溶液。

2.2.3方法學(xué)考察［7-9］

系統(tǒng)適用性試驗：取2.2.2項下3種溶液，按2.2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜峰，見圖2。結(jié)果表明，葛根素的峰保留時間約為12min；葛根素與其相鄰峰的分離度大于2；葛根素色譜峰分離良好，且本品中其他成分對葛根素的含量測定無干擾。

圖2　高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密稱取葛根素對照品21.1 mg，加甲醇制成每mL含4.22mg葛根素的溶液，作為對照品溶液，稀釋成質(zhì)量濃度分別為84.4，126.6，168.8，211.0，253.2，422.0μg/mL，進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）、對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=16.156-108.04X，r=0.999 3（n=6）。結(jié)果表明，葛根素質(zhì)量濃度在84.4～422.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取質(zhì)量濃度為253.2μg/mL的葛根素對照品溶液10μL連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果葛根素峰面積的RSD為0.56%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號為020520）樣品5份，分別按樣品測定法測定，測定5次。結(jié)果平均含量為2.86 mg/g，RSD為1.11%（n=5），表明本方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，于0，0.5，1，1.5，2，4 h時分別進(jìn)樣，每次10μL，記錄峰面積。結(jié)果RSD為1.099%（n=6），表明供試品溶液在4 h內(nèi)較穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批樣品，精密稱定，分別加入葛根素對照品溶液適量，按2.2.2項下供試品溶液制備方法制備，依法進(jìn)樣。結(jié)果見表1。

表1　葛根素加樣回收試驗（n=6）

2.2.4樣品含量測定

取5批樣品，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算含量。結(jié)果批號為020520，020521，020522，020803，020806樣品中葛根素含量分別為2.68，2.77，2.56，3.01，2.98mg/g。

3　討論

方中葛根的薄層鑒別，曾用硅膠H-CMCNa作薄層板，醋酸乙酯-丙酮-水（6.5∶4.5∶1.2）作展開劑，鑒別效果不理想，各斑點與葛根素主斑點未能分開。經(jīng)摸索后采用展開條件為氯仿-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）進(jìn)行展開，在樣品斑點中，葛根素和大豆苷元斑點均能與其他斑點達(dá)到很好分離，且斑點圓整，無拖尾現(xiàn)象。

葛根為愈寧心軟膠囊制劑的主藥，葛根素為葛根中的主要有效成分，因此測定葛根素含量可作為樣品質(zhì)量控制的一個重要指標(biāo)。色譜條件的建立時，通過比較不同的色譜柱的分離度，結(jié)果無差別，本試驗選用Agilent HC-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱。通過比較不同的柱溫（25，30，35℃），結(jié)果柱溫對樣品的分離幾乎無影響，本試驗采用30℃。在流動相的選擇過程中，嘗試了不同比例的甲醇濃度，篩選最佳的條件，降低流動相的pH，加入磷酸，結(jié)果可較好地分離葛根素。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技社，2010：1.

［2］苗明三，李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：694.

［3］張世勤，李樹琦，胡長風(fēng)，等.根痛平片中葛根素的含量測定［J］.中草藥，1996，27（7）：405-406.

［4］夏宏.葛根芩連微丸中葛根素的含量測定［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（11）：681-682.

［5］葉春朝，武達(dá)，王瑋.腦得生片中葛根素的含量測定［J］.黑龍江醫(yī)學(xué)，2005，18（3）：159-160.

［6］于永洲，朱淼.葛根寶軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2007，18（4）：313-316.

［7］陳黎，酈宏巖，楊佩文.心安寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.江蘇藥學(xué)與臨床研究，2003，11（3）：26-28.

［8］黃順旺，曹明成.參蘇感冒膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2008，14（3）：13-14.

［9］劉同祥，王勇.玉泉膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國藥房，2010（31）：2 937-2 939.

Quality Standard Study for Yuningxin Soft Capsule

Kaidiriye Yusupu1，Bai Mengna1，Tan Rui2，Wang Yan1
（1.College of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan，China 610031；2.College of Medicine，Southwest Jiao
tong University，Chengdu，Sichuan，China 610031）

Objective To establish the quality standards of Yuningxin Soft Capsules.M ethods The Radix Puerariae was qualitatively identified by TLC.The content of puerarin was determined by HPLC.The chromatographic column was Agilent HC-C18column（150 mm×4.6 mm，5μm），the mobiie phase was methanol-water-phosphoric acid（47∶53∶0.2），1.0 mg/mL as the fiow rate at detection wave length of 250 nm at normal temperature；sample size was 10μL.Results At the TLC，the chromatographic spots were clear，the separation effect was good，and there was no interference on negative control.The linear range of puerarin was 84.4-422.0 μg/mL（r=0.999 3），and the average recovery rate was 95.36%，RSD=3.09%（n=6）.Conclusion This method is simple，accurate and reliable，which can be used for the quality control of Yuningxin Soft Capsules.

Yuningxin Soft Capsules；puerarin；TLC；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）24-0162-02

凱迪日耶·玉蘇普（1990-），女，碩士研究生，研究方向為生物工程，（電子信箱）1178094368@qq.com。

2015-10-14）

*國家科技重大專項“重大新藥創(chuàng)制”項目，項目編號：VQ21SS1113Y14004。