高效液相色譜法檢測鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α-萘酚雜質(zhì)

隋海山，戚威，王立娟

（1.山東省濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東濰坊261041；2.山東省濰坊市紅十字中心血站，山東濰坊261041）

高效液相色譜法檢測鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α-萘酚雜質(zhì)

隋海山1，戚威1，王立娟2

（1.山東省濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東濰坊261041；2.山東省濰坊市紅十字中心血站，山東濰坊261041）

目的建立測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α-萘酚雜質(zhì)含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法采用島津-GL Inertsil CN-3液相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為乙腈-正丁醇-磷酸緩沖液（13∶17∶70），流速為1.0 mL/min，檢測波長230 nm，柱溫為40℃。結(jié)果α-萘酚含量在8×10-4～8×10-3μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.997 6），平均回收率為99.08%，RSD為0.89%（n=12）。結(jié)論該方法專屬性強(qiáng)、耐用性好、準(zhǔn)確度高，可以控制鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α-萘酚的含量。

高效液相色譜法；鹽酸度洛西汀；α-萘酚；含量測定

高效液相色譜（HPLC）法是目前藥物分析中常用的色譜分離、分析技術(shù)，具有較高的分析速度及分離效率，且具有檢測靈敏度較高、適用測定范圍廣、樣品處理操作簡單、回收率高等特點(diǎn)。隨著現(xiàn)代質(zhì)譜、核磁共振波譜等色譜技術(shù)的日益成熟及色譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，HPLC法在藥物制劑分析中的應(yīng)用越來越廣泛［1-2］。因此，筆者通過建立HPLC法對鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中所含有的特殊雜質(zhì)α-萘酚進(jìn)行分離分析，控制藥物中雜質(zhì)α-萘酚的含量，以減少藥物中所含雜質(zhì)對人體造成的損害。

1　儀器與試劑

Aglient 1260型高效液相色譜儀（安捷倫<中國>科技有限公司）；DZF-150型恒溫真空干燥箱（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；PT25S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；ZF-20C型暗箱式紫外分析儀（上海和勤科學(xué)分析儀器有限公司）；BSZ-160F型電腦自動部分收集器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）。200～300目柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；230～400目柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工廠）。乙腈色譜純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；正丁醇色譜純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；磷酸分析純（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；一水己烷磺酸鈉分析純（中國山東東營市新旺化工有限責(zé)任公司）；鹽酸度洛西汀對照品（歐洲藥品質(zhì)量管理局，批號為Y0001453）；鹽酸度洛西汀系統(tǒng)適用性對照品（歐洲藥品質(zhì)量管理局，批號Y0001454）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊（市售品，批號為120801，120802，120803）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊對照品（美國EliLilly公司，批號為A858915D）；α-萘酚對照品（美國EliLilly公司，批號為43040901）

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：島津-GL InertsilCN-3柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-正丁醇-磷酸緩沖液（13∶17∶70）；流速：1.0mL/min；檢測波長：230nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)不低于2000。

2.2溶液制備

精密稱取鹽酸度洛西汀對照品10mg，溶解于適量流動相中，100mL容量瓶定容，搖勻即得對照品貯備液，4℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取本試驗(yàn)所用原輔料，將其用洗脫液稀釋至一定濃度；取適量鹽酸度洛西汀對照品，用同樣的方法將其配制成0.2 g/L的待用液；取試驗(yàn)所選用的α-萘酚對照品適量，用洗脫液將其配制成0.4μg/mL的待用液；取上述待用液各10μL，注入液相色譜儀測定并記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，藥品輔料與藥品中其他雜質(zhì)分離效果很好，對α-萘酚的含量測定無干擾。在擬訂色譜條件下，鹽酸度洛西汀測定結(jié)果表明，鹽酸度洛西汀與雜質(zhì)f的分離度r=2.33，拖尾因子T=1.14；與雜質(zhì)c的分離度r=2.76；鹽酸度洛西汀有效板數(shù)n=821 5，證明該HPLC分離系統(tǒng)具有較好的適用性。

線性關(guān)系考察：取適量（約16 mg）α-萘酚對照品，置20 mL容量瓶中，將其用洗脫液定容至刻度、搖勻；用移液槍精密量取上述配制液1mL，將其置100mL容量瓶中用洗脫液定容。分別用精密量取儀器量取該溶液2，5，10，15，20mL，并將量取試液分別于200mL容量瓶中用洗脫液定容，配制一系列待測液。在上述色譜條件下，用精密儀器分別量取10μL上述溶液，對其分別進(jìn)行色譜分析，并記錄其色譜圖。以α-萘酚進(jìn)樣量（W）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，α-萘酚進(jìn)樣量在8×10-4～8×10-3μg（r=0.9976）范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品，依法制備待測液6份，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，樣品中α-萘酚含量的RSD=0.64%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

精密度試驗(yàn)：按照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對照品溶液，然后由不同人員在不同色譜儀上測定，每人測定6份，對12份試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果的RSD=0.475%（n=12），表明儀器精密度良好。

檢測限確定：將適量的α-萘酚對照品溶解于流動相中，將所得溶液逐級稀釋，分別取20μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定。當(dāng)信噪比S/N=3時(shí)，對照品檢測限為0.013 ng。

圖1　高效液相色譜圖

回收試驗(yàn)：分別精密量取16，20，24mg的α-萘酚對照品，每次各量取4份，置100mL容量瓶中定容，并按處方量設(shè)置空白輔料對照組；精密量取2mL上述制備溶液，于10mL容量瓶中用洗脫液定容。精密量取1mL上述溶液，于100 mL容量瓶中用試驗(yàn)用洗脫液定容至刻度，搖勻過濾即得供試品溶液，對其進(jìn)行色譜分析；同時(shí)根據(jù)樣品中α-萘酚的含量及限度確定對照品的加入量，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果見表1。

表1　α-萘酚回收試驗(yàn)結(jié)果（n=12）

2.4樣品中有關(guān)物質(zhì)檢測

將3批鹽酸度洛西汀腸溶膠囊及鹽酸度洛西汀腸溶膠囊對照品制備的供試品溶液各10μL分別注入液相色譜儀中，應(yīng)用峰面積與校正因子計(jì)算α-萘酚的含量，應(yīng)用峰面積歸一化法計(jì)算藥品中其他雜質(zhì)的含量。結(jié)果見表2。

表2　鹽酸度洛西汀中相關(guān)物質(zhì)含量測定結(jié)果

3　討論

鹽酸度洛西汀腸溶膠囊是目前具有口服活性的新型高效抗抑郁治療藥物，由美國Eli Lilly公司研發(fā)。度洛西汀對5-輕色胺（5-HT）及去甲腎上腺素（NE）具有雙重抑制作用，不僅可發(fā)揮抗抑郁作用，且對改善抑郁癥患者的軀體癥狀也有特殊作用。但鹽酸度洛西汀中所含α-萘酚是具有較強(qiáng)生理毒性的一類雜質(zhì)，經(jīng)口服或皮膚接觸吸收均能引起中毒反應(yīng)，因此對α-萘酚進(jìn)行限量檢查十分必要。

查閱鹽酸度洛西汀制劑中主藥含量及雜質(zhì)限量檢查的HPLC法相關(guān)文獻(xiàn)［3］發(fā)現(xiàn)，均未考察鹽酸度洛西汀中所含有的特殊雜質(zhì)α-萘酚。為保證其長期用藥的安全性和有效性，參考美國藥典及國家食品藥品監(jiān)督管理總局規(guī)定，擬建立一種專屬性強(qiáng)、耐用性好、準(zhǔn)確度高，能有效檢測鹽酸度洛西汀藥物制劑中α-萘酚含量的HPLC法［4-5］。

本試驗(yàn)中以相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)HPLC分析試驗(yàn)［6］，對所用色譜條件作了適當(dāng)改變，如更換不同型號的色譜柱、改變色譜柱柱溫、改變流動相流速，甚至也可更改供試品的過濾次數(shù)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，該HPLC法的耐用性良好。鹽酸度洛西汀在空氣、強(qiáng)酸以及濕熱條件下穩(wěn)定性較低，易降解變質(zhì)，而在強(qiáng)堿、高溫以及光照條件下則具有相對較高的穩(wěn)定性［7-8］。本試驗(yàn)專屬性試驗(yàn)顯示，鹽酸度洛西汀所有降解產(chǎn)物與度洛西汀的分離度R≥1.5。故本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的HPLC法具有系統(tǒng)適用性高、精密度好、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

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R927.2；R971+.43

A

1006-4931（2015）24-0156-03

2015-07-23）