腦功肽口服液抗焦慮作用實驗研究*

雷健，胡長鵬，邢茂，向俊馬，張蓉

（中國人民解放軍第三軍醫大學新橋醫院藥學部，重慶400037）

腦功肽口服液抗焦慮作用實驗研究*

雷健，胡長鵬，邢茂，向俊馬，張蓉

（中國人民解放軍第三軍醫大學新橋醫院藥學部，重慶400037）

目的通過動物行為學試驗模型研究腦功肽口服液的抗焦慮作用。方法采用小鼠高架十字迷宮試驗（EPM）和大鼠敞箱試驗（OFT），EPM試驗選取開臂時間百分比（OT%）、開臂次數百分比（OE%）、總入臂次數、總入臂時間為觀察指標；OFT試驗選取總路程、中央區域路程、中央區域時間為觀察指標。分別設空白對照組、地西泮組、腦功肽高劑量組與腦功肽中劑量組進行觀察。結果在EPM試驗中，OT%與OE%地西泮組分別為（51.23±17.47）%和（53.28±14.96）%，腦功肽高劑量組分別為（38.67±15.23）%和（57.43±8.16）%，均與空白對照組有顯著性差異（P＜0.05）；OFT試驗中，地西泮能顯著增加中央區域時間（P＜0.05）。結論EPM試驗顯示，腦功肽口服液具有抗焦慮作用。

腦功肽口服液；焦慮；高架十字迷宮試驗；大鼠敞箱試驗

腦功肽口服液為我院院內制劑，由遠志、酸棗仁、天麻、石菖蒲等14味中藥組方，具有調節腦功能、平衡大腦興奮與抑制過程、增強記憶力、促進腦細胞代謝、改善腦循環和醒腦提神等作用［1-4］，能緩解睡眠障礙患者的焦慮癥狀。我科對該制劑分別進行了質量標準研究和急性毒性研究［5］，但對其抗焦慮作用的機制未進行研究。本研究中通過小鼠高架十字迷宮試驗（EPM）與大鼠敞箱試驗（OFT）［6］，研究腦功肽口服液對動物行為學的影響，以考察其抗焦慮作用。

1　材料與方法

1.1儀器、動物與試藥

ZH-DSG型高架十字迷宮試驗視頻分析系統，ZH-ZFT型自發活動視頻分析系統（安徽淮北正華生物儀器設備有限公司）；ME235S型電子分析天平（德國賽多利斯公司）。清潔級健康雄性昆明種小鼠60只，初始體重18～22 g；清潔級健康雄性SD大鼠［許可證號：SCXK（渝）2012-0005］60只，初始體重160～180 g，由第三軍醫大學大坪醫院動物實驗中心提供。所有動物提前1周購入，清潔級動物［許可證號：SYXK（渝）2012-0011］常規飼養。地西泮片（湖北制藥有限公司，批號為20110604），試驗時用雙蒸水配制成0.2 g/L的溶液；腦功肽原液（NGT）由第三軍醫大學新橋醫院藥劑科中藥制劑室提供（批號為20130114），高、中劑量組用雙蒸水分別配制每1mL含1.8，0.9 g生藥的藥液，雙蒸水為新橋醫院藥劑科普通制劑室制備。

1.2試驗方法

分組與給藥：行為學試驗前，將動物飼養于正常晝夜循環的環境中。室溫控制在（20±2）℃，自由攝食飲水，適應性喂養3 d后，每天安撫動物2min，持續3 d，減少無關刺激對試驗的影響。給藥前將動物隨機分為空白對照組（A組）、地西泮陽性對照組（B組）、腦功肽高劑量組（C1組）、腦功肽中劑量組（C2組），各15只，各組每天8：00～21：00灌服給藥，灌胃量小鼠每20 g體重0.2mL，大鼠每200 g體重2 mL，連續7 d，末次給藥30min后進行行為學試驗，試驗時間段為8：00～14：00。

EPM與OFT試驗：實驗室光線保持恒亮，以1.5m距離處能辨認小鼠細微活動的最低亮度為準，室溫約15℃，保持實驗室安靜。測試前將每只小鼠放于60 cm×60 cm×35 cm敞箱中，自由探究5 min，然后迅速置試驗系統的中央平臺上，頭朝向一開放臂，放開后開始計時，由儀器記錄5min內的活動指標。觀察指標包括，進入開放臂次數（OE）；進入到任一開放臂的次數，以小鼠4個爪子均進入到臂內為準，中途1個爪子從該臂中完全退出則為該次進入活動完成；進入開放臂時間（OT）；進入封閉臂次數（CE），進入到任一封閉臂的次數，以小鼠4個爪子均進入到臂內為準；進入封閉臂時間（CT）；開臂時間百分率（OT%）=OT/（OT+CT）×100%；開臂次數百分率（OE%）=OE/（OE+CE）× 100%；總入臂次數，OE+CE；總入臂時間，OT+CT。實驗室保持安靜，大鼠迅速置于敞箱中央（尺寸為100 cm×100 cm×45 cm），釋放后記錄10min內大鼠活動指標。每次完成記錄后，用5%醋酸水溶液擦拭箱底，清除糞便，繼續用干布擦凈，排除氣味對下一只大鼠的干擾。觀察指標包括總路程（mm）、中央區域路程（mm）、中央區域時間（s）。

1.3統計學處理

2　結果

2.1小鼠EPM試驗

結果見表1?？梢?，地西泮組能明顯增加小鼠OT%和OE%（P＜0.05），而不增加總入臂次數和總入臂時間，顯示模型造模成功。與空白對照組相比，高劑量腦功肽口服液能增加OT%和OE%（P＜0.05），顯示具有一定的抗焦慮作用；與空白對照組相比，中劑量腦功肽口服液的OT%和OE%無顯著性差異。

表1　小鼠EPM試驗結果（±s）

表1　小鼠EPM試驗結果（±s）

注：與A組比較，*P＜0.05。

組別A組（n=9）B組（n=14）C1組（n=12）C2組（n=12）OT（%）13.91±6.67 51.23±17.47*38.67±15.23*18.28±11.51 OE（%）34.83±7.39 53.28±14.96*57.43±8.16*42.36±11.66 OE+CE（次）47.00±7.71 48.71±23.71 53.83±8.23 45.42±11.64 OT+CT（s）200.46±30.17 180.20±54.22 185.72±36.82 196.73±39.78

2.2大鼠OFT試驗

結果見表2。可見，B組中央區域時間比A組明顯增加，但中央區域路程無顯著性差異。與A組相比，C1組及C2組總路程、中央區域時間、中央區域路程等指標均無顯著性差異，提示在該模型上未發現明顯改善焦慮的作用。

表2　大鼠OFT試驗結果（±s）

表2　大鼠OFT試驗結果（±s）

注：與A組比較，*P＜0.05。

組別A組（n=9）B組（n=14）C1組（n=12）C2組（n=12）總路程（mm）4 295.90±515.06 4 107.36±746.34 4 716.15±1 501.40 4 302.91±1 019.25中央區域時間（s）2.85±1.81 5.52±2.73*4.73±3.46 2.34±0.62中央區域路程（mm）108.91±56.58 134.44±47.30 140.89±100.80 91.54±74.26

3　討論

本試驗中采用了2種行為學效應模型考察腦功肽口服液的抗焦慮作用，其中EPM試驗是抗焦慮研究中公認結果可靠的模型［7］，動物具有探究性，放入迷宮后會主動探究開臂，但又懼怕開臂中高懸敞開的環境，抗焦慮藥能增加動物在開臂的探究活動，而致焦慮劑則相反。動物OE%與OT%是該模型的重要指標，抗焦慮劑通常會增加動物OE%值與OT%值，而不影響總入臂次數與時間。本試驗結果顯示，地西泮組與腦功肽高劑量組對小鼠OE%值與OT%值均有顯著升高作用，而總入臂次數與時間無顯著性差異，說明兩者均有抗焦慮作用。

在OFT試驗中，大鼠進入敞箱后因其對新異環境的恐懼而主要在敞箱內靠周邊的區域活動，而抗焦慮藥能明顯增加大鼠進入敞箱中央區的次數及在中央區停留的時間［8］。本試驗結果顯示，地西泮能顯著增加大鼠中央區域活動時間，顯示地西泮具有一定的抗焦慮作用，而高劑量與中劑量腦功肽對大鼠的中央區域活動時間與路程均無影響，說明在此模型下高劑量與中劑量腦動肽未能顯示出抗焦慮作用。但大鼠OFT試驗應用于焦慮模型時間不長，其穩定性及可靠性有待進一步驗證。

EPM試驗與臨床觀察結果均顯示，腦功肽口服液有一定的抗焦慮作用，在進一步的研究中，將考察腦功肽口服液對動物腦組織中單胺類和氨基酸類神經遞質的影響［9-11］，以揭示其抗焦慮作用的具體機制。

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［6］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.第3版.北京：人民衛生出版社，2006：817.

［7］BarbalhoCA，Nunes-de-SouzaRL，Canto-de-SouzaA.Similaranxiolytic-likeeffects following intra-amygdala infusionsofbenzodiazepine receptoragonistand antagonist：evidence for the releaseofan endogenousbenzodiazepine inverse agonist in mice exposed to elevated plus-maze test［J］. Brain Res，2009，1 267：65-76.

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Experimental Study of Anxiolytic Effects of Naogongtai Oral Liquid

Lei Jian，Hu Changpeng，Xing Mao，Xiang Junma，Zhang Rong
（Department of Pharmacy，Xinqiao Hospital，Third Military Medical University，Chongqing，China 400037）

Objective To assess the anxiolytic effects of Naogongtai Oral Liquid through animal behavior experimental model.M ethods The elevated plus maze（EPM）test and open field test（OFT）were adopted；in EPM test the observation indicators were open arm entry%（OT%），open arm time%（OE%），total entry and total entry time，in OFT the observation indicators were total path，central area time，central area path.These indicators were observed in blank control group，diazepam group，Naogongtai high dose group and Naogongtai medium dose group.Results In EPM test，OT%and OE%were（51.23±17.47）%and（53.28±14.96）%respectively in diazepam group，and（38.67±15.23）%and（57.43±8.16）%respectively in Naogongtai high dose group，both of them were significantly higher than the blank control group（P＜0.05）.In OFT，the central area time was significantly increased in diazepam group（P＜0.05）.Conclusion The EPM test shows that Naogongtai Oral Liquid has anti-anxiety effect.

Naogongtai Oral Liquid；anxiety；elevated plus maze test；open field test

R285.5；R286

A

1006-4931（2015）18-0019-02

雷健，男，碩士研究生，主管藥師，主要研究方向為藥物分析與質量標準研究，（電話）023-68774770（電子信箱）fengxiao218@163.com；張蓉，碩士研究生，副主任藥師，研究方向為臨床合理用藥與分析，本文通訊作者，（電話）023-68755580。

2014-09-16；

2015-03-15）

*重慶市衛生局中醫藥科技項目，項目編號：ZY20132151。