高效液相色譜法測(cè)定龍鳳寶膠囊淫羊藿苷的含量

王 力 林永鳳

（吉林市方正藥業(yè)有限公司，吉林 吉林132012）

高效液相色譜法測(cè)定龍鳳寶膠囊淫羊藿苷的含量

王 力 林永鳳

（吉林市方正藥業(yè)有限公司，吉林 吉林132012）

目的 建立前龍鳳寶膠囊的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法。色譜柱：Waters RP18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（23∶77） ， 流速 ：1.0 mL/min ，檢測(cè)波長(zhǎng) ：270 nm ，柱溫 ：40 ℃。結(jié)果 淫羊藿苷在10～500 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999）；平均加樣回收率為99.64%，RSD=0.3%（n=6）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；龍鳳寶膠囊；淫羊藿苷；含量測(cè)定

龍鳳寶膠囊收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十八冊(cè)，為國(guó)家中藥保護(hù)品種，由淫羊藿、山楂、黨參、玉竹、肉蓯蓉、黃芪、牡丹皮、冰片等9味中藥組成。具有補(bǔ)腎壯陽，健脾益氣，凝神益智的功效。臨床用于更年期綜合征及神經(jīng)衰弱者［1］。處方中淫羊藿為主藥，淫羊藿苷為其主要檢測(cè)目標(biāo)成分，原標(biāo)準(zhǔn)中無淫羊藿的含量測(cè)定方法。為了更好地控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定龍鳳寶膠囊中淫羊藿苷的含量，樣品處理方法簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

圖1 前列舒丸HPLC圖

1 儀器與試藥

LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站；淫羊藿苷對(duì)照品（批號(hào)：110737-200415），由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，供含量測(cè)定用；龍鳳寶膠囊為市售樣品（廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司，批號(hào)：12002、12005、12006）。乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。色譜柱：Waters RP18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（23∶77）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)應(yīng)不低于4000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h以上的淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成1.0 mg/mL的對(duì)照品貯備液；再精密量取對(duì)照品貯備液適量，加甲醇制成100 μg/mL的對(duì)照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備：取本品20粒內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［2］。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備：取除淫羊藿以外的處方中其余藥材，按法制成膠囊，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間（淫羊藿苷35.554 min）的色譜峰，陰性試驗(yàn)無干擾，證明本法可行。

2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品貯備液（濃度1.0 mg/mL）各適量，分別置50 mL量瓶中，加甲醇定容，配成濃度分別為10、50、100、200、500 μg/mL的溶液5份，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾。精密吸取續(xù)濾液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，其濃度（C）為橫坐標(biāo)，得淫羊藿苷的回歸方程為：A=21.89+32.51C，r=0.9999（n=5），結(jié)果表明，淫羊藿苷在10～500 μg/mL范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液（100 μg/mL）10 μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，求得淫羊藿苷溶液峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.2%，表明精密度較好。取同一供試品溶液，在0、6、12、18、24 h分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明淫羊藿苷對(duì)照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.9%（n=5）。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)：取供試品（批號(hào)12002），共5份，分別按“2.2.2供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，求得淫羊藿苷含量的RSD為1.4%，表明重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)12002，淫羊藿苷含量0.23毫克/粒，平均粒重0.5022g）適量，共6份，分別精密加入低、中、高3種不同濃度的哈巴俄苷對(duì)照品適量，照“2.2.2供試品溶液的制備”方法操作，得回收率試驗(yàn)溶液，依法測(cè)定，見表1。

2.8 樣品含量測(cè)定：分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定三批樣品中淫羊藿苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算其含量（n=3），見表2。

表1 淫羊藿苷加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=5）

3 討 論

3.1 根據(jù)三批樣品所測(cè)結(jié)果，結(jié)果表明最高含量為0.24毫克/粒，最低含量為0.23毫克/粒，綜合考慮，建議該制劑中淫羊藿的含量以淫羊藿苷計(jì)應(yīng)不低于0.20毫克/粒。

3.2 對(duì)供試品、對(duì)照品在200～400 nm進(jìn)行紫外掃描，二者在270 nm有較強(qiáng)吸收，而陰性無干擾，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。

3.3 本方法結(jié)果準(zhǔn)確，方法簡(jiǎn)便，重復(fù)性及回收率均理想，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥成方制劑第十八冊(cè)）［S］.2010:87.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［M］. 2010版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:79-80.

Determination of Icariin in Longfengbao Capsule by HPLC

WANG Li， LIN Yong-feng
（Jilin Fangzheng Pharmaceutical Company Limited， Jilin 132012， China）

Objective To set up a method for quality control of Longfengbao Capsule. Method HPLC method was developed to quantitative determination. Column:Waters RP18 column（250 mm×4.6 mm， 5 μm）.The mobilic phase: acetonitrile-Water（23∶77）. Flow rate: 1.0 mL/min. The wavelength for detection: 270 nm， The column temperature: 40 ℃. Results The calibration curve of Icariin had a good linear relationship in the range of 10～500 μg/mL（r =0.9999）； the average of recovery was 99.64%， the RSD was 0.3%（n=6）. Conclusion The method is simple， accurate and reproductive. It can be used for quality control of this preparation.

HPLC； Longfengbao Capsule； Icariin； Content Determination

R284.1

B

1671-8194（2015）13-0011-02