大黃酸的穩定性研究

王文永，田玉先，王雅紅，佟勝河，朱新艷，王琨，韓剛

（1.河北省唐山市豐潤區人民醫院，河北唐山064000；2.河北聯合大學藥學院，河北唐山063000）

大黃酸的穩定性研究

王文永1，田玉先1，王雅紅1，佟勝河1，朱新艷1，王琨2，韓剛2

（1.河北省唐山市豐潤區人民醫院，河北唐山064000；2.河北聯合大學藥學院，河北唐山063000）

目的研究溶液pH、溫度、光照強度等因素對大黃酸穩定性的影響。方法將一定質量濃度的大黃酸置不同pH緩沖溶液中、不同光照強度和不同溫度條件下，定時取樣，采用高效液相色譜法測定大黃酸質量濃度的變化，采用動力學方法建立大黃酸降解速率方程。結果隨著溶液pH、溫度的升高，光照強度的增加，大黃酸降解速率加快。結論大黃酸的穩定性與pH、溫度、光照強度關系密切。大黃酸應在低溫、避光的條件下貯存，低pH條件下使用。

大黃酸；穩定性；酸堿度；溫度；光照強度；高效液相色譜法

大黃酸為中藥大黃的有效成分，屬蒽醌類化合物［1］。大黃酸除具有抗菌、止血、抗癌、利尿等多種藥理活性外，還可清除體內自由基［2-3］。大黃酸化學名稱為1，8-二羥基-3-羧基蒽醌，在蒽醌環上含有2個羥基和1個羧基，極性較強，具有氧化還原性質，易發生氧化還原反應［4］，故大黃酸不穩定，易分解［5］。本研究中探討了溶液的pH、光照強度、溫度對大黃酸穩定性的影響，為大黃酸的合理應用提供參考。

1　儀器與試藥

1100型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BT125D型電子天平（Sartorius公司）；pHS-3C型酸度計（上海鵬順科學儀器有限公司）；HWS型智能型恒溫恒濕培養箱（寧波市科技園區新江南儀器有限公司）；低溫光照儀（藥物制劑國家工程研究中心）；SYC-15型超級恒溫水?。暇┥Ａ﹄娮釉O備廠）。大黃酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110757-200206）；甲醇（Fisher Chemicals公司）為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1緩沖溶液制備

以醋酸-醋酸鈉、磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸、甘氨酸-氫氧化鈉為緩沖體系，配成總濃度為0.2mol/L及pH分別為4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的緩沖溶液（大黃酸在水中溶解度很低，但溶于一定濃度的乙醇溶液，故緩沖溶液中含30%乙醇），緩沖溶液用酸度計校正。

2.2色譜條件［6］

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（77∶22∶1）；檢測波長：428 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；進樣量：20μL。

2.3標準曲線制備

稱取干燥后的大黃酸對照品2.5mg，精密稱定，置50mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為50μg/mL的大黃酸對照品貯備液，置暗處備用。將大黃酸對照品貯備液分別稀釋成1.5，3.0，4.5，6.0，9.0，15.0，30.0μg/mL的大黃酸對照品溶液，按高效液相色譜（HPLC）法測定峰面積。以大黃酸峰面積（S）對質量濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程S=45.193C+0.655 4，r=0.999 5（n=7）。結果表明，大黃酸質量濃度在1.5～30.0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2.4穩定性影響因素試驗

溶液pH：分別精密量取大黃酸貯備液2 mL，置5個25 mL棕色容量瓶中，分別用pH為4.00，6.00，8.00，9.00，10.00的緩沖溶液定容，迅速搖勻，置恒溫（25℃）光照培養箱中，調解光照強度為700 lx，定時取樣，依法操作。分別測定不同時間點大黃酸質量濃度（C）。以lg C對時間t作圖，結果為一直線，表明大黃酸在不同pH緩沖溶液中降解為一級動力學過程［7］。分別求出大黃酸25℃不同pH條件下的降解動力學方程及線性相關系數r、降解速率常數Ke、半衰期（t1/2），結果見表1?？梢姡S著溶液pH升高，大黃酸穩定性迅速下降。

表1　溶液pH對大黃酸穩定性的影響（25℃，700 lx）

光照強度：分別精密量取大黃酸貯備液2mL，置5個25mL棕色容量瓶，用pH=8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液定容，迅速搖勻，置低溫光照儀中，20℃恒溫，調節光照強度分別為500，1 000，2 000，4 000，8 000 lx，定時取樣，依法操作。計算大黃酸質量濃度（C），以lg C對時間t作圖，結果為一直線，表明大黃酸在不同光照條件下降解為一級動力學過程。求出大黃酸在20℃及pH=8時不同光照強度下的降解動力學方程及線性相關系數r、降解速率常數Ke、半衰期（t1/2），結果見表2。可見，隨著光照強度的增加，大黃酸穩定性迅速下降。

表2　光照強度對大黃酸穩定性的影響（20℃，pH=8）

溶液溫度：精密量取大黃酸貯備液2mL，置5個25mL棕色容量瓶中，用pH=8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液定容，迅速搖勻，SYC-15超級恒溫水浴中，700 lx恒定的光照強度，溫度分別為5，10，20，30，40℃，定時取樣，依法操作。分別計算大黃酸的質量濃度（C），以lg C對時間t作圖，結果為一直線，表明大黃酸在不同溫度條件下降解為一級動力學過程。求出25℃不同pH條件下大黃酸的降解動力學方程及線性相關系數r、降解速率常數Ke、半衰期（t1/2），結果見表3?？梢?，酸隨著溶液溫度的升高，大黃穩定性下降。

表3　溫度對大黃酸穩定性的影響（pH=8，700 lx）

3　討論

大黃酸屬蒽醌類化合物，易發生氧化還原等降解反應，且降解反應復雜［8］。本試驗結果表明，增加光照強度、升高溫度和增加溶液pH均能加快大黃酸的降解速率，且降解反應為一級動力學過程。

隨溶液pH的升高，大黃酸降解速率明顯加快，大黃酸降解反應為一級動力學過程。當溶液pH＞8時，大黃酸降解反應速率迅速增加。隨溫度升高，許多中藥的有效成分會發生降解［9］，大黃酸也一樣，降解速率隨溫度升高而加快。當光照強度增至2 000 lx時，大黃酸降解速率迅速增加。故大黃酸試劑應盡量避免強光照射，應置陰涼通風的環境中，盡量避免在堿性較強的環境下使用。

［1］Chen WH，Chen J，Shi YP.Anthraquinones and stilbenes from the roots and rhizomesofRhubarb［J］.Asian NatProd Res，2011，13（11）：1036-1041.

［2］郭美資，徐海榮.大黃酸藥理作用的研究進展［J］.國外醫學：中醫藥分冊，2002，3（24）：139-142.

［3］Malterud KE，Farbrot TL，Huse AE.Antioxidantand radical scavenging effectsofanthraquinonesand anthrones［J］.Pharm Pharmacol，2008，39（10）：845-847.

［4］宗金銳，巢志茂，劉振麗，等.大黃中蒽醌衍生物的構效關系［J］.中國中藥雜志，2008，33（20）：2 424-2 427.

［5］李先端，黃璐琦.炮制對中藥大黃5種蒽醌成分含量的影響［J］.中國中藥雜志，2005，30（12）：904-943.

［6］韓剛，王彥雪，康欣，等.18β-甘草酸對大黃中大黃酸在大鼠體內藥動學的影響［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（3）：373-375.

［7］韓剛，崔靜靜，畢瑞，等.姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素穩定性研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（22）：2 611-2 614.

［8］劉志兵，王海鷗.中藥大黃中蒽醌衍生物成分分析及其穩定性［J］.無錫輕工大學學報，2003，22（5）：53-56.

［9］毛聲俊，侯世祥，唐昌炯，等.丹參素在加溫加速條件下的含量變化規律研究［J］.中國中藥雜志，2003，28（3）：220-222.

Study on Stability of Rhein

Wang Wenyong1，Tian Yuxian1，Wang Yahong1，Tong Shenghe1，Zhu Xinyan1，Wang Kun2，Han Gang2
（1.Fengrun District People′s Hospital，Tangshan，Hebei，China 064000；2.Pharmaceutical College of Hebei United University，Tangshan，Hebei，China 063000）

Objective To investigate the influence of pH value，temperature and light intensity on the stability of rhein.M ethods The certain concentration of rhein was put into different pH values of buffer solutions and placed under different light intensities and different temperature conditions.The timing sampling was conducted.The change of rhein concentrations was detected by adopting the HPLC method.The rhein degradation rate equation was established by adopting the dynamic method.Results With the increase of pH value，temperature and light intensity，the rhein degradation rate was accelerated.Conclusion The stability of rhein is closely related with pH value，temperature and light intensity.Therefore rhein should be stored in low temperature and lucifugal conditions and should be used in the condition of low pH values.

rhein；stability；pH value；temperature；light intensity；HPLC

R286.0；R282.71

A

1006-4931（2015）16-0028-03

王文永（1962-），男，大學本科，副主任中藥師，研究方向為中藥活性成分，（電子信箱）1020059619@qq.com；韓剛，大學本科，教授，研究方向為中藥活性成分及藥物毒理學，本文通訊作者，（電話）0315-3726303（電子信箱）tsyxhg@163.com。

2014-10-28）