江南星蕨與深綠卷柏多糖和脂溶性物質的提取及其抗菌活性研究

吳海斌等

摘要[目的]研究江南星蕨與深綠卷柏多糖和脂溶性物質的提取及其抗菌活性。[方法]采用水提醇沉法和索氏抽提法分別對江南星蕨和深綠卷柏多糖和脂溶性物質進行提取，并用圓形紙片法和MIC測定法對其抗菌活性進行了檢測。[結果]江南星蕨與深綠卷柏多糖含量有差別，其多糖提取物表現出不同程度的抗菌活性，其對酵母菌的抗菌活性最強，抑菌圈分別達18和22 mm；而兩者所提取的脂溶性物質對5種受試菌均無抗菌效果。[結論]江南星蕨和深綠卷柏多糖可作為功能性多糖加以開發。

關鍵詞江南星蕨；深綠卷柏；多糖；脂溶性物質；提取；抗菌活性

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2015）21-085-02

江南星蕨（Microsorum fortunei（T.Moore）Ching）系水龍骨科蕨類植物，全草入藥，具有清熱解毒、祛風除濕、涼血止血、消腫止痛功效，可治療黃疸、痢疾、尿路感染、白帶、風濕關節痛、吐血、便血、跌打損傷、毒蛇咬傷等癥[1]。江南星蕨乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物具有很強的抗氧化能力[2]。深綠卷柏（Selaginella doederleinii Hieron.）為蕨類植物門卷柏科植物，其性味甘、微苦、澀，性涼，有清熱解毒、祛風除濕、活血化淤之功效，常用于治療咽喉腫痛、肺熱咳嗽、乳腺炎、濕熱黃疸、風濕痹痛、外傷出血[3]。深綠卷柏具有抗腫瘤藥理活性[4]。但這2種蕨類植物在抗菌方面的研究卻未見報道，為此，筆者對江南星蕨和深綠卷柏中多糖和脂類的提取及其抗菌活性進行了研究，以期為進一步開發利用藥用蕨類資源提供基礎資料。

1材料與方法

1.1材料

試材為江南星蕨與深綠卷柏的全株，采自福建省寧德市蕉城區后山。受試菌包括2種真菌和3種細菌，真菌有產黃青霉Penicillium chrysogenum Thom和啤酒酵母Saccharomyces carlsbergensis Hansen，細菌有革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis Cohn、滕黃八疊球菌Sarcina lutea Schroeter和革蘭氏陰性菌大腸桿菌Escherichia coli Castellani et Chalmers。菌種來自寧德師范學院生物系微生物實驗室。

1.2方法

1.2.1材料的處理。

采集蕨類植物的全株，進行種類鑒定后，將2種蕨類洗凈于陰涼處自然晾干，用剪刀將其剪成較小的植物碎片，再用植物粉碎機粉碎成40目，保存備用。

1.2.2多糖的提取和含量測定。

取江南星蕨和深綠卷柏2種蕨類粉末各100 g，加入1 000 ml水，于100 ℃水浴下加熱1 h，再經70～80 ℃水浴加熱1～2 h過濾，棄去殘渣取上清液，在70 ℃水浴下將上清液濃縮至20～30 ml，加3倍體積無水乙醇，離心取沉淀，用3%三氯乙酸溶解沉淀，離心去沉淀，在40～50 ℃水浴條件下將上清液蒸干至恒重，得到多糖并稱其質量。多糖含量的測定采用硫酸苯酚法，按照參考文獻[5]的方法進行。

1.2.3脂溶性物質的提取和含量測定。

脂溶性物質的提取采用石油醚（分析純，沸程為60～90 ℃）進行索氏抽提，稱取2種蕨類粉末各25 g，按照參考文獻[6]的方法進行提取18 h，得到的脂溶性物質通過真空旋轉蒸餾儀去除溶劑，稱重。

1.2.4抗菌活性的檢測與MIC的測定。

將多糖提取物配成質量溶度為0.25 g/ml的水溶液，脂溶性物質則配成0.25 g/ml的石油醚溶液，同時分別以蒸餾水和石油醚為空白對照，用于抑菌試驗，抑菌試驗采用圓形紙片法，按照參考文獻[7]的方法來進行。

MIC的測定也采用圓形紙片法，將多糖溶液稀釋成30.0、15.0、7.5、5.0、2.5 mg/ml的梯度濃度用于抑菌，以未見抑菌圈的最高濃度為最小抑菌濃度（MIC）。

2結果與分析

2.1江南星蕨與深綠卷柏提取物的提取率及其含量

江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類的多糖提取結果（表1）表明，不同種的蕨類植物，其多糖提取率存在明顯差別，江南星蕨與深綠卷柏的多糖提取率分別為13.79%和18.70%，深綠卷柏的多糖提取率略高于江南星蕨；

根據所得標準曲線回歸方程Y=0.007 8X+0.247 6（R2=0.991 3），測定得到江南星蕨與深綠卷柏的多糖含量分別為12.729%和10.232%，江南星蕨的多糖含量略高于深綠卷柏。

脂溶性物質的提取中發現江南星蕨的提取率為8.4%，而深綠卷柏的脂類提取率為4.4%，由此可見，江南星蕨的脂溶性物質提取率明顯高于深綠卷柏。

比較這2種物質的提取率發現多糖的提取率高于脂類提取率，可見江南星蕨與深綠卷柏這2種蕨類多糖的含量高于脂類，其中深綠卷柏這2種物質的含量差距更大，可見蕨類植物物質的含量與其環境是相關的，光線越少其多糖含量會增加，而脂類物質相對減少。

2.2江南星蕨與深綠卷柏提取物的抗菌活性

從江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類植物多糖的抑菌圈大小（表2）可以看出，當多糖的質量溶度為0.25 mg/ml時，江南星蕨與深綠卷柏的抑菌效果較好，抑菌圈的直徑均在6～22 mm。深綠卷柏多糖的抗菌活性強于江南星蕨，而江南星蕨則呈現出對5種受試菌均有抗菌活性，說明江南星蕨具有廣譜抗菌性。另外，江南星蕨與深綠卷柏2種蕨類對啤酒酵母的抑制效果最好，其抑菌圈分別為18和22 mm，從菌類的敏感性來看，啤酒酵母對江南星蕨與深綠卷柏多糖較為敏感。江南星蕨多糖提取物對革蘭氏陰性菌的抗菌活性強于抗革蘭氏陽性菌。江南星蕨與深綠卷柏的脂溶性提取物對5種受試菌均沒有抑制活性，另外空白對照也沒有抑菌活性。