鐵皮石斛HDR基因克隆及真菌誘導(dǎo)子對其表達(dá)和生物堿含量的影響

林艷君 賴鐘雄

摘 要 以鐵皮石斛原球莖為材料，采用同源克隆的方法，成功得到了鐵皮石斛Do-HDR基因的全長，并通過qPCR對其相對表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果表明：Do-HDR基因全長1 784 bp（GenBank登錄號KJ946381），5′UTR為40 bp，3′UTR為361 bp，開放閱讀框為1 382 bp，編碼460個氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，該基因編碼的蛋白為穩(wěn)定的親水蛋白，不具有跨膜結(jié)構(gòu)，不含信號肽，定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。采用滅活的尖孢鐮刀菌菌液作為誘導(dǎo)子，分別以0、100、200、500、1 000 mg/L的濃度培養(yǎng)3 d后測定總生物堿含量，結(jié)果表明，總生物堿含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢；當(dāng)誘導(dǎo)子濃度為200 mg/L時，總生物堿含量達(dá)到最大值。在此基礎(chǔ)上通過qPCR分析Do-HDR基因的相對表達(dá)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Do-HDR基因相對表達(dá)量在誘導(dǎo)子濃度為200 mg/L時也到達(dá)最大值。因此，推測Do-HDR基因與生物堿的合成與積累有關(guān)。

關(guān)鍵詞 鐵皮石斛；Do-HDR基因；基因克??；qPCR；生物堿

中圖分類號 S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是蘭科石斛屬多年生附生草本植物，是一味珍貴的藥材，《神農(nóng)本草經(jīng)》中將其列為上品，味甘平，具有補(bǔ)五臟虛勞、羸瘦、強(qiáng)陰的功效，久服厚腸胃，輕身延年，有益胃生津、滋陰清熱的功效[1]。大量研究結(jié)果表明，鐵皮石斛對腫瘤、眼科疾病、腸胃疾病、糖尿病等有一定的作用[2-4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，鐵皮石斛主要藥用成分有多糖、菲類、聯(lián)芐母核類、氨基酸、生物堿類等[5-6]。其中生物堿是最早被分離鑒定的物質(zhì)，而石斛堿型生物堿是鐵皮石斛生物堿中最主要的組分，具有保護(hù)神經(jīng)元、止痛退燒、保護(hù)胃腸道等作用，且對阿耳茨海默氏病具有一定的作用[7-9]?！?br>