肉養布魯氏菌病凈化試驗效果報告

李峰 劉吉山 苗立中 劉樂光 王玉茂 許繼勇 趙立寧

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種人畜共患病，該菌分為6個種19個生物型，在世界上呈廣泛性分布，能夠導致人和牛、羊等多種家畜發病。肉羊是馬爾他布魯氏菌、流產布魯氏菌等多種類生物型宿主，主要表現為母羊流產、不孕、子宮炎和公羊睪丸炎、關節炎等臨床病變。飼養人員通過接觸感染后，常表現為全身乏力、長期發熱、精神抑郁甚至頭痛、關節強直等癥狀。因此，該病不僅造成養殖效益下降，而且潛在威脅人類健康，被世界衛生組織列為法定動物報告疫病，我國衛生部將其列為乙類傳染病，我國農業部多年來一直高度共識布魯氏菌病的預防和凈化工作，凸顯其重要的公共衛生意義。

近年來，隨著國家《全國牛羊肉生產發展規劃（2013-2020年）》的出臺，各地也相繼制定了肉牛肉羊發展規劃，為肉羊產業發展提供了良好的機遇。而隨著肉羊產業規模化發展和引種等活羊大范圍的流動，該病在各地血清學檢測一直有陽性病例。由于布魯氏菌為胞內寄生菌，一旦侵入機體，特別是形成多發性病灶后，很難將其從體內根除，耐過病畜很容易成為隱性傳播源。因此，該病的凈化常采用全面檢測和淘汰陽性家畜的辦法。為此，我們在某肉羊場進行了檢測凈化技術應用，收到了良好效果，特此報告如下。

1 材料與方法

1.1 檢測程序

按照檢測淘汰的程序進行（表1）。初次檢測進行全群采樣檢測；若存在陽性結果，淘汰陽性羊，并進行全場消毒；間隔1～2個月，進行2次全群采樣檢測，根據結果淘汰陽性羊；依此間隔1～2個月進行一次采樣檢測處理，直到沒有任何陽性結果出現。之后每隔半年對種母羊按照10%～20%的比例和全部種公羊進行抽檢，應沒有陽性結果出現；若出現陽性結果，應淘汰陽性羊，并恢復對全群采樣檢測循環。

1.2 樣品采集與處理

采用人工保定，使用5mL一次性注射器頸靜脈采血，2～3mL/只，分別做好樣品標記和采樣記錄。血樣采集后，要將針管進行適當回抽，以形成斜面，利于血清析出。采集樣品送入實驗室后，將血清分裝入PG管待檢。必要時，采取離心方式分離血清。

1.3 檢測試劑與方法

布魯氏菌虎紅平板凝集抗原（批號201405），陽性血清（批號20140228），布魯氏菌試管凝集試驗抗原（批號20131113），均購自中國獸醫藥品監察所。全部樣品先采用虎紅平板凝集試驗進行初檢，再對陽性樣品和疑似陽性樣品用試管凝集試驗進行復驗。檢測方法結果判定按照國家標準GBIT18646-2002動物布魯氏菌診斷技術進行。

1.4 淘汰和凈化措施

對檢測陽性羊要堅決進行淘汰處理，不能用于生產和育肥。淘汰方法為定點屠宰，肉品進行蒸煮后外賣或食用，毛皮、內臟等進行深埋作無害化處理。有陽性結果檢出時，要徹底清理圈舍中積糞，集中進行密閉堆肥發酵，對場地用5%的生石灰進行鋪撒；對水槽等用具選用綠都百毒殺（稀戊二醛溶液）或綠都金碘（聚維酮碘溶液）進行消毒后，用清水沖洗干凈；對密閉的空間，選用煙水寶（二氯異氰脲酸鈉粉45%）進行煙熏消毒。

2 結果

2.1 首次檢測結果

全群共357只，其中種公羊6只，種母羊128只，其他為青年羊或羔羊。首次全群檢測虎紅平板凝集試驗5只陽性，2只疑似陽性；對陽性結果和疑似陽性結果樣品用試管凝集試驗復驗，5只陽性結果凝集效價均在1：50以上，全部為陽性；2只疑似陽性試管凝集試驗效價在1：25以下，初步判斷為陰性。羊群布魯氏菌陽性率約為1.4%。

根據檢測結果，按照既定的淘汰和凈化措施對陽性羊和羊舍進行淘汰、兀害化處理和全面消毒。并制定了帶羊消毒方案，1～2次/d對羊舍進行消毒。

2.2 二次檢測結果

繼首次全群檢測1個月時間，對淘汰陽性羊后的352只羊進行了二次檢測。結果顯示，虎紅平板凝集試驗2只陽性，通過試管凝集試驗復驗仍為陽性。陽性率約為0.56%。

淘汰無害化處理和凈化措施按照既定的方案實施。

2.3 三次檢測結果

繼二次全群檢測2個月時間，對全群350只羊進行了虎紅平板凝集試驗檢測，結果均為陰性。

2.4 四次檢測結果

繼三次全群檢測6個月時間，對羊群全部種公羊和部分母羊共計66只進行了采樣檢測，虎紅平板凝集試驗結果顯示均為陰性。

3 小結與討論

1）布魯氏菌病的血清學檢測方法主要包括凝集反應、沉淀反應、補體結合反應、變態反應、ELISA試驗等。平板凝集試驗由于簡便易行，對試驗儀器耗材等條件要求較低等優勢利于基層推廣應用，并且能夠滿足大面積檢疫篩選的需求。對陽性和疑似陽性結果采用試管凝集試驗進行復檢，能夠提高檢驗的準確性，降低假陽性結果的誤判。

2）通過檢測結果可以看出該場存在羊布魯氏菌的感染問題。通過調查發現，與該場從外面引種有直接關系。該場引種檢測時，為布魯氏菌病陰性羊，購進后直接混群飼養，沒有隔離飼養和再次檢測，致使潛伏感染的羊成為該病的傳染源。凝集素抗體的產生需要一個過程，潛伏期可能檢測不到抗體，致使無法準確判斷是否感染。正確的做法應該是，引種前后至少檢測兩次，即首次檢測布魯氏菌陰性，在隔離飼養1～2個月再行采樣檢測，全部為陰性結果時才能混群飼養。

3）本試驗通過連續4次檢測，并淘汰無害化處理病羊，配合全場強制性消毒等措施，陽性感染由最初的1.4%降至0，沒再有新的感染病例出現，收到了較好的效果。有效證明了當前對于布魯氏菌病無定義流行病區及以上區域，檢測淘汰仍然是控制該病有效的辦法。

4）對于布魯氏菌感染羊的兀害化處理，本試驗采取了定點監督屠宰，肉品加工食用，毛皮、內臟等無害化處理的嘗試。一是擔心場主減少虧損的實際需求，將病羊外賣，增加疫病傳播和擴散的問題發生。二是考慮布魯氏菌對濕熱的抵抗力不強，60℃30min或70℃5min，甚至煮沸可以瞬間將其殺死，其肉品在熟制后完全可以食用。由于無害化處理辦法配套措施和要求還有待完善和規范，如補貼費用不足等；建議由政府部門新設或指定定點屠宰和加工，但同時要做好安全運輸、屠宰過程控制和廢棄物的無害化處理等全程控制工作。

5）在凈化過程中，消毒工作同樣重要。重點包括糞便清理、密閉發酵處理；場地消毒，如果為床上飼養，還要做好飼養床的全面高壓清洗和消毒工作；羊舍飲用水槽等物品及飼養人員衣物的清洗消毒等，關鍵是不留死角，以免病原菌殘存，引起疫病復發。

6）長期看來，布魯氏菌新型疫苗的研發和應用應該成為該病防控的有力武器。特別是標記疫苗等新型疫苗和相關檢測診斷試劑盒的研發，將有效破解疫苗免疫反應和自然感染兀法區別、疫苗毒性大和容易存在殘毒等問題，為該病檢測凈化及防控提供多樣化的選擇。要切實加強養殖人員和相關行業從業者的公共衛生教育，提高防控布魯氏菌病的風險意識，降低人員感染的機率，為構建和諧社會，推動肉羊產業可持續健康發展做出積極的貢獻。