龍眼殼總黃酮的HPLC圖譜分析

韓淑琴，李志銳，吳麗

（1.中山職業技術學院，廣東中山，528404；2.華南農業大學食品學院，廣東廣州510642）

龍眼殼總黃酮的HPLC圖譜分析

韓淑琴1，李志銳1，吳麗2

（1.中山職業技術學院，廣東中山，528404；2.華南農業大學食品學院，廣東廣州510642）

采用HPLC法以蘆丁標準品為對照品，對經超聲-微波協同萃取，并且經過AB-8大孔徑樹脂柱層析純化的龍眼殼總黃酮進行定性分析。色譜柱條件為：C18柱，流動相為甲醇-水（25∶75），波長254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進樣量為2 uL的條件下進行檢測。結論：龍眼殼樣品中總黃酮含量達23.43 mg/g，龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁，在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達到63.95%。

龍眼殼；總黃酮；高效液相色譜

龍眼（longgan）俗稱“桂圓”，是我國南亞熱帶名貴特產，歷史上有南“桂圓”北“人參”之稱［1］。在我國龍眼主要分布于廣西、廣東、福建等省。中山市位于中國華南地區廣東省珠江三角洲中南部，珠江出海口西岸，中山市適宜龍眼生長，有5 000多畝的龍眼種植面積。目前國內外針對龍眼的研究主要集中在龍眼肉和龍眼核的活性成分方面，對龍眼殼的研究較少，且尚且停留在龍眼殼總體成分的研究階段。有文獻表明龍眼的莖、葉、花、果、殼中均含有豐富的黃酮類物質［2-4］，本文采用高效液相法對經大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮進行分析。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

龍眼殼、AB-8大孔樹脂、無水乙醇、甲醇、蘆丁標準品（中國藥品與生物制品檢定所）等，所用化學試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

美國惠普HP-1100高效液相色譜儀；玻璃層析柱；CW-2000型超聲-微波協同萃取儀：中國上海新拓微波溶樣測試技術有限公司；DHG-9245A型電熱鼓風干燥箱：上海一恒科學儀器有限公司；RE-5299型旋轉蒸發儀：上海耀裕儀器。

1.3 方法

1.3.1 龍眼殼總黃酮樣品溶液制備

取市售石峽龍眼的果殼，低溫烘干后粉碎，精確稱取龍眼殼粉末20 g，用70%乙醇溶液，以固液比1∶25的比例浸泡1 h，采用超聲微波協同萃取法，提取總時間為60 s，其中超聲微波每作用20 s暫停10 s，提取得到龍眼殼總黃酮粗提物，回收乙醇處理后，將龍眼殼總黃酮粗提物用30%乙醇溶液定容至10 mL，將上述龍眼殼總黃酮溶液通過AB-8大孔徑樹脂進行柱層析純化，采用濃度為80%的乙醇溶液30 mL進行洗脫，接收洗脫液，洗脫液定容至50 mL，得龍眼殼總黃酮初步純化樣品，冷藏備用。

1.3.2 高效液相色譜柱條件

色譜柱條件為：C18柱，流動相為甲醇-水（25∶75），波長254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進樣量為2 uL的條件下進行檢測。

1.3.3 標準曲線的制備

1.3.3.1 蘆丁標準品溶液制備

稱取50mg蘆丁標準品，用適量30%甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶，搖勻。精密吸取標準品溶液1.0、2.0、4.0、5.0和7.0 mL至10.0mL碘量瓶中，加30%甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得0.05、0.1、0.2、0.25和0.35 mg/mL的溶液。

1.3.3.2 線性關系考察

在上述色譜條件下，將各濃度標準品溶液分別進樣2 uL，測峰面積。以峰面積為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。

1.3.4 蘆丁標準品檢測

精確吸取經微孔濾膜過濾后的蘆丁標準品溶液2 μL進樣，在上述高效液相色譜條件下分析測定蘆丁標準品。

1.3.5 樣品檢測

精確吸取經微孔濾膜過濾后的龍眼殼總黃酮樣品溶液2 μL進樣，在上述高效液相色譜條件下分析測定龍眼殼總黃酮樣品。

2結果與分析

2.1 標準品線性關系

在實驗設定色譜條件下，分別進樣標準溶液，測各濃度標樣所得峰面積。則以峰面積為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，進而計算回歸方程。

蘆丁標準曲線方程為：Y=1 347.3X-27.63，R2= 0.999 1。則由數據可以分析得出標準品具有良好線性關系。

2.2 標準品與樣品HPLC測定分析

根據2.1中的回歸方程計算得龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁濃度和含量結果見表1。

由圖1、2可以確定龍眼殼總黃酮中主要成分為蘆丁，且經AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后樣品中蘆丁含量達63.95%，濃度達9.37 mg/mL，則根據1.3.1中龍眼殼用量20 g及所得初步純化龍眼殼總黃酮樣品液體積50 mL，計算可得龍眼殼樣品中總黃酮含量為23.43 mg/g。

圖1 蘆丁標準品HPLC色譜圖Fig.1Rutin standard HPLC Atlas

圖2 龍眼殼黃酮樣品HPLC色譜圖Fig.2Longgan shell flavones HPLC Atlas

表1 樣品的HPLC檢測結果Table 1The HPLC test resuLts of the sample

3結論

采用HPLC法對經AB-8大孔徑樹脂柱層析純化后的龍眼殼總黃酮提取液中有效成分進行定性定量分析。在色譜柱為C18柱，流動相為甲醇-水（25∶75），波長254 nm，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進樣量為2 uL的條件下進行檢測。結果表明：龍眼殼樣品中總黃酮含量達23.43 mg/g，龍眼殼總黃酮的主要成分為蘆丁，在龍眼殼總黃酮初步純化樣品中蘆丁含量達到63.95%。

［1］劉玉英.我國的龍眼［J］.中國土特產，2000（2）：25

［2］葉自行，許建楷.龍眼高產技術問答［M］.廣州：廣州科技出版社，2001：56

［3］廖娜.龍眼科化學成分的研究.碩士論文［D］.南寧：廣西師范大學，2006

［4］陸海峰，趙進，李琳，等.超聲波提取龍眼葉總黃酮及其鑒別［J］.微量元素與健康研究，2007，24（4）：48-49

Analyse the Longan Shell Total Flavanone by HPLC

HAN Shu-qin1，LI Zhi-rui1，WU Li2
（1.Zhongshan Polytechnic，Zhongshan 528404，Guangdong，China；2.South China AgricuLtural University College of Food Science，Guangzhou 510642，Guangdong，China）

Using HPLC method with rutin standard as the

ubstance to analyse the longan shell total flavanone sample which extracted by ultrasonic-microwave way and purified by AB-8 Large aperture resin column.The data of the chromatographic column were：C18 column，Mobile phase is methanol：water（25∶75），Wavelength 254 nm，flow rate 0.5 mL/min，room temperature，Sample size：2 uL.Result：the total flavanone concentration is 23.43 mg/g in longan shell sample，and Rutin is the main component of the longan shell total flavanone，the concentration reached 63.95%.

longan shell；total flavanone；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.027

2014-01-14

中山市科技計劃項目（項目編號：20123A340）

韓淑琴（1980—），女（漢），講師，碩士，主要研究方向：天然產物有效成分提取與應用。