北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌抑菌活性的測(cè)定

曹桂范 杜 喆 杜惠蓮 陶 凱

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110034）

北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌抑菌活性的測(cè)定

曹桂范 杜 喆 杜惠蓮 陶 凱

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110034）

目的 探討北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌的抑菌活性，以期為防治腸道桿菌的感染提供試驗(yàn)依據(jù)。方法 測(cè)定北五味子乙醇提取物對(duì)供試菌的抑菌圈直徑和最低抑菌濃度。結(jié)果 北五味子乙醇提取物對(duì)供試菌的抑菌圈分別為，大腸埃希菌：19.17 mm；乙型副傷寒沙門(mén)菌：18.06 mm；宋內(nèi)志賀菌：22.84 mm；變形桿菌：18.78 mm。北五味子乙醇提取物對(duì)供試菌的最低抑菌濃度分別為，大腸埃希菌：25 mg/mL，乙型副傷寒沙門(mén)菌、宋內(nèi)志賀菌、變形桿菌：均為12.5 mg/mL。結(jié)論 北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌均有一定的抑菌作用。其中對(duì)宋內(nèi)志賀菌的抑菌作用顯著，對(duì)大腸埃希菌的抑菌作用相對(duì)較弱。

北五味子；乙醇提取物；腸道桿菌；抑菌活性

1　材料與方法

1.1 材料、儀器

1.1.1 材料：北五味子果實(shí)由大梨樹(shù)特色種植區(qū)生產(chǎn)，經(jīng)鑒定為北五味子，陰干后密封置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 菌種：大腸埃希菌（Escherichia coli）、乙型副傷寒沙門(mén)菌（Salmonella paratyphi B）、宋內(nèi)志賀菌（Shigella sonnei ）、變形桿菌（Proteus vulgaris）。以上菌種，由沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供。

1.1.3 培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，121 ℃滅菌30 min。

1.1.4 主要儀器：BS-224S電子天平，德國(guó)賽多利斯公司；HH-11·500

電熱恒溫培養(yǎng)箱，廈門(mén)醫(yī)療電子儀器廠；YXQ602型電熱式高壓滅菌器，山東新華醫(yī)療器械廠； SW-CJ-IF型無(wú)菌超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.1.5 主要試劑：乙醇（分析純）、氯化鈉（分析純），均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；牛肉浸膏、蛋白胨和瓊脂粉，均為廣東環(huán)凱微生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 北五味子乙醇提取物的制備：將自然干燥的北五味子果實(shí)粉碎后過(guò)60目篩，稱(chēng)取粉末10 g，用70%乙醇和蒸餾水進(jìn)行80 ℃水浴，料液比為1∶15（mL/g），浸提4 h［4-5］。將浸出液濃縮定容到10 mL，得1 mL相當(dāng)于1 g北五味子乙醇提取物的試樣，提取物經(jīng)濾膜除菌，4 ℃貯存?zhèn)溆谩Ｒ圆患颖蔽逦蹲拥奶崛┯谙嗤瑮l件下提取和處理，即陰性對(duì)照。

1.2.2 菌懸液的制備：將各種試驗(yàn)菌活化，在無(wú)菌條件下，分別挑取每種菌的菌苔，用無(wú)菌生理鹽水稀釋?zhuān)瞥蓾舛葹?08CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 抑菌活性測(cè)定：采用平板打孔藥敏法［6］，將已滅菌的培養(yǎng)基冷卻至50 ℃，接入108 CFU/mL的供試菌菌懸液，接種量1%。搖勻后倒入平板中，培養(yǎng)基厚度為5～6 mm。置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，30 min后取出，干燥瓊脂表面，備用。用無(wú)菌打孔器在培養(yǎng)基上均勻打出四個(gè)直徑為6 mm的圓孔，將倍比稀釋的北五味子乙醇提取液用移液槍注入各孔，每孔為0.1 mL。在37 ℃下培養(yǎng)24 h后，測(cè)定抑菌圈直徑，比較抑菌效果，重復(fù)3次。同時(shí)作陰性對(duì)照及空白對(duì)照。

1.2.4 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定：倍比稀釋的北五味子提取物，分別與滅菌后降至50 ℃的培養(yǎng)基充分混勻后倒平板［7-8］。提取物最終濃度分別為50～0.39 mg/mL 8個(gè)梯度。待培養(yǎng)基冷卻后，用移液槍吸取濃度為108CFU/mL的供試菌液 50 μL于平板上均勻涂布，每個(gè)樣液濃度3個(gè)重復(fù)，并做陰性對(duì)照及空白對(duì)照。上述培養(yǎng)基在37 ℃溫度下培養(yǎng)24 h，觀察菌落的生長(zhǎng)情況，無(wú)菌落生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的最低提取物濃度，即為最低抑菌濃度（MIC）。

2　結(jié)果與分析

2.1 北五味子丙酮提取物抑菌活性試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 北五味子丙酮提取物對(duì)供試菌的抑菌圈直徑（mm）

2.2 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定：從表2可知北五味子乙醇提取物對(duì)大腸埃希菌的最低抑菌濃度（MIC）為25 mg/mL，對(duì)乙型副傷寒沙門(mén)菌、宋內(nèi)志賀菌、變形桿菌的最低抑菌濃度（MIC）均為12.5 mg/mL。

3　討　論

在臨床上，腸道桿菌主要引起腸道感染，特別是致病性大腸埃希菌、志賀菌、傷寒沙門(mén)菌引起的感染往往發(fā)病急，傳染性強(qiáng)。針對(duì)腸道桿菌感染的治療，主要是使用抗生素，可是抗生素治療往往會(huì)改變腸道的微生態(tài)環(huán)境，導(dǎo)致作為人體腸道正常菌群的大腸埃希菌被大量殺死，從而發(fā)生菌群失調(diào)癥。北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌的殺菌作用雖然不及抗生素，但其對(duì)大腸埃希菌的最低抑菌濃度相對(duì)較高，不會(huì)破壞腸道的菌群平衡，從而避免菌群失調(diào)癥的發(fā)生。應(yīng)用北五味子提取物對(duì)腸道桿菌的感染（特別是志賀菌的感染）進(jìn)行治療，是一種對(duì)抗生素治療起輔助作用的有效治療手段。

表2 北五味子乙醇提取物的最低抑菌濃度（MIC）

在日常生活中，預(yù)防腸道桿菌的感染也十分重要。北五味子提取物中的有效抑菌成分經(jīng)過(guò)進(jìn)一步分離純化后，可以應(yīng)用于食品防腐領(lǐng)域，發(fā)揮其對(duì)腸道桿菌的抑菌作用，從而預(yù)防腸道桿菌感染的臨床疾病。

北五味子提取物的分離純化的工藝流程還需進(jìn)一步完善，北五味子中具體的抑菌成分及其最佳的抑菌濃度還有待進(jìn)一步研究。期待北五味子在防治腸道桿菌感染的方面發(fā)揮其重要臨床價(jià)值。

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R282.710.5

B

1671-8194（2015）15-0059-02北五味子是產(chǎn)自東北三省的名貴中藥材，具有益氣、斂肺、生津、止渴、斂汗、壯陽(yáng)、補(bǔ)腎等功能［1-2］。在高溫、潮濕的條件下，中藥材的保存一直受到霉?fàn)€變質(zhì)等難題的困擾，而北五味子在這樣的條件下，存放數(shù)年卻不出現(xiàn)霉變形象，由此推斷北五味子還具有一定的抑菌作用［3］。然而，關(guān)于北五味子提取物的抑菌、殺菌活性的報(bào)道還相對(duì)較少，本試驗(yàn)研究了北五味子乙醇提取物對(duì)腸道桿菌的抑菌活性，旨在進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用北五味子，增加其臨床應(yīng)用價(jià)值。