分子靶向藥物索拉菲尼對胃癌細胞株SNU-1增殖的影響

陳曉萌* 樊鵬利 秦玉花 趙紅衛

（河南省人民醫院，河南 鄭州 450000）

分子靶向藥物索拉菲尼對胃癌細胞株SNU-1增殖的影響

陳曉萌* 樊鵬利 秦玉花 趙紅衛

（河南省人民醫院，河南 鄭州 450000）

目的 研究分子靶向藥物索拉菲尼對胃癌SNU-1細胞株的抑制作用。方法 分別以不同濃度索拉菲尼作用于胃癌SNU-1細胞株，采用MTT法分別檢測不用濃度藥物組對胃癌細胞SNU-1的抑制作用。結果 在相同的藥物濃度下，隨著作用時間（24 h、48 h、72 h）的延長，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細胞的生長抑制作用逐漸增強（P＜0.05），在相同的干預時間，隨著藥物濃度的增加，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細胞的生長抑制作用也逐漸增強（P＜0.05）。結論 索拉菲尼可抑制體外胃癌SNU-1細胞株的增殖，為在臨床治療胃癌提供基礎依據。

靶向藥物；索拉菲尼；胃癌；抑制作用

胃癌是我國最常見惡性腫瘤之一，其病死率僅次于肺癌排第二位，我國的胃癌病例人數約占世界的1/3［1-2］。目前，胃癌的治療手段主要有3種，外科手術、放化療及生物學治療。但對于大多數臨床Ⅱ、Ⅲ期胃癌患者的5年生存率低于40%，而Ⅳ期胃癌患者的平均生存時間僅為10個月［3］。隨著醫學技術的不斷提高，與細胞信號轉導相關的細胞生長、細胞凋亡、細胞壞死、血管形成和侵襲轉移等特征不斷被人們所揭示，專家學者們通過細胞信號傳導發現了新的細胞靶向治療藥物。目前，臨床上經常應用靶向治療藥物主要有EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）、抗血管生成藥、細胞周期抑制劑和促凋亡劑等。本實驗觀察索拉菲尼對體外人胃癌細胞株SNU-1的抑制作用，以期為臨床分子靶向藥物治療胃癌提供實驗依據。

1　材料與方法

1.1 試驗材料：人胃癌SNU-1細胞株購于上海拜力生物科技有限公司。RPMI1640培養基（北京索來寶生物科技有限公司），HyClone胎牛血清（北京賽默飛世爾生物化學制品有限公司），MTT美國（Sigma公司），磷酸鹽緩沖液PBS（參照《細胞培養》配制），碘化丙啶PI染色液（美國Sigma公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 細胞培養：將胃癌細胞系SNU-1復蘇后，加入含10%新生小牛血清的RPMI 1640培養液（含青霉素100 U/mL，鏈霉素100 U/mL），于5% CO2培養箱中37 ℃靜置培養，傳代時采用0.25%胰酶消化，每5 d傳代1次，長至對數生長期。

1.2.2 試驗分組：實驗分為3組，索拉菲尼藥物組，藥物濃度分別為1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L；空白對照組，不加細胞，只加等量的培養基；陰性對照組，加細胞，再加相應等量的培養基，不加干預藥物。各組設5個復孔。

1.2.3 MTT法測定人胃癌SNU-1細胞的增殖情況：取對數生長期的人胃癌SNU-1細胞制成單細胞懸液，調整密度為2×105個/毫升將細胞懸液接種于96孔板內，按照1.2.2的分組進行加藥，每種濃度都設置5個復孔；同時陰性對照孔（只含細胞和培養液），空白對照孔（只含培養液），于37 ℃、5%CO2及飽和濕度條件下常規培養24 h、48 h、72 h后，每孔加入新鮮配制的2 mg/mL的MTS 15 μL，繼續培養2 h，終止培養。在酶聯免疫吸附儀上檢測492 nm波長處的各孔的吸光度（A）值（每組獨立重復3次），實驗取平均值，按下列公式計算腫瘤細胞生長抑制率：細胞生長抑制率（%）=（1-實驗組A值/對照組A值）×100%。

1.3 統計方法：所有實驗數據均采用SPSS13.0軟件進行統計分析，計量資料數據以±s）表示，多組比較時，方差齊者，采用單因素的方差分析，P＜0.05表示有顯著性差異。

2　結　果

根據實驗和統計結果顯示，在相同的藥物濃度下，隨著作用時間（24 h、48 h、72 h）的延長，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細胞的生長抑制作用逐漸增強（P＜0.05），在相同的干預時間，隨著藥物濃度（1.5 μmol/Lsorafenib，3.0 μmol/Lsorafenib，6.0 μmol/Lsorafenib，12 μmol/Lsorafenib）的增加，索拉菲尼對人胃癌SNU-1細胞的生長抑制作用也逐漸增強（P＜0.05）。見表1。

表1 不同濃度索拉菲尼在不同作用時間對胃癌SNU-1細胞的影響±s）

表1 不同濃度索拉菲尼在不同作用時間對胃癌SNU-1細胞的影響±s）

注：a.索拉菲尼不同作用時間各組間比較，P＜0.05；b.不同藥物濃度各組間比較，P＜0.05

藥物濃度（μmol/mL）　　抑制率（%）24 ha　48 ha　72 ha空白對照　1.24±0.36　2.04±0.84　2.57±1.58陰性對照　1.99±0.87　2.11±1.43　2.94±1.09 1.5　17.65±5.89b　23.39±6.84b　29.45±8.61b3 26.25±7.14b　30.91±6.87b　39.84±10.22b6 29.63±10.34b　39.59±8.74b　46.75±16.83b12　38.61±9.78b　49.65±15.71b　61.21±15.96b

3　討　論

索拉菲尼是一種新型的靶向制劑藥物，該藥在上市前臨床研究及上市后臨床應用均顯示出了較好的靶向抗腫瘤作用，療效確切。具體作用機制為抑制Raf激酶和受體酪氨酸激酶的合成，抑制腫瘤細胞的活化和增殖，抑制腫瘤組織微血管形成［4-5］。通過動物實驗研究顯示，索拉非尼對多種癌細胞的增殖均具有良好的抑制作用，包括小鼠腎細胞癌、結腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌和卵巢癌模型等。

索拉菲尼通過對兩種受體的酪氨酸激酶活性起到抑制作用，進而阻斷了腫瘤新生微血管的形成，并能夠阻斷腫瘤細胞對營養成分的攝取，從而間接的抑制了腫瘤細胞的增殖和生長。有研究表明［6］，索拉菲尼對MAPK信號傳導系統具有較好的抑制作用，尤其是對帶有致癌的K-ras和（或）b-raf突變體的腫瘤細胞。Liu等［7］亦證明索拉菲尼通過下調抗凋亡蛋白Mcl-1的表達水平以及降低ELF4的磷酸化水平，進而可有效的阻斷肝癌細胞株PLC/PRF/5中Raf/MEK/ERK信號傳導通路，促進腫瘤細胞凋亡和壞死。國內亦有研究表明［8］，索拉菲尼可通過抑制肝癌細胞自噬而起到良好的抗腫瘤作用。

多條信號通路的過度活化導致了正常細胞的病變，進而進展為惡性腫瘤。由于這些信號通路之間彼此形成的網絡較為復雜，因此，多靶點多環節調控與胃癌的病理發生與發展密切相關。目前臨床中大部分靶向治療藥物多針對一個靶點進行治療和發揮效應，而信號傳導機構又是一個復雜的、多重的網絡體系，因此，臨床及研究中應注重多靶點分子靶向藥物對于腫瘤的治療，這也勢必是腫瘤分子靶向治療的重要發展方向。

本研究結果發現：1.5～12 μmol/L濃度的索拉菲尼對胃癌SNU-1細胞具有顯著的增殖抑制作用，并呈現明顯的劑量和時間雙效應。同時表明索拉菲尼對SNU-1胃癌細胞具有良好的抑制增殖和促進壞死、凋亡的作用。

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［3］ Roukos DH.Targeting gastric cancer with trastuzumab: new clinical practice and innovative developments to overcome resistance［J］. Ann Surg Oncol，2010，17（1）:14-17.

［4］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad Spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［5］ Strumberg D.Preclinical and clinical development of the oral multikinase inhibitor sorafenib in cancer treatment［J］.Drugs Today（Barc），2005，41（12）:773-784.

［6］ Wilhelm SM，Carter C，Tang L，et al.BAY 43-9006 exhibits broad spectrum oral antitumor activity and targets the RAS/RAF/MEK/ ERK pathway and receptor tyrosine kinases involved in tumor progression and angiogenesis［J］.Cancer Res，2004，64（19）:7099-7109.

［7］ Liu L，Cao Y，Chen C，et al.Sorfenib blocks the RAF/MEK/ERK pathway，inhibits tumor angiogenesis and induce tumor cell apoptosis in hepatocellular carcinoma model PLC/PRF/5［J］.Cancer Res，2006，66（24）:l1851-11858.

［8］ 孫廣偉，邱偉華，施敏敏，等.索拉菲尼對肝癌細胞HepG2自噬的抑制作用［J］.外科理論與實踐，2010，15（1）:51-55.

R735.2

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1671-8194（2015）15-0057-02