電子攝像技術在豚鼠全身主動過敏試驗中的應用

顧筠瑩，印慧聰，盛佳妮，俞銘華，蔣婉娟，李　英，朱根麟

（上海和黃藥業有限公司，上海200331）

電子攝像技術在豚鼠全身主動過敏試驗中的應用

顧筠瑩，印慧聰，盛佳妮，俞銘華，蔣婉娟，李英，朱根麟

（上海和黃藥業有限公司，上海200331）

目的研究在豚鼠全身主動過敏試驗引入電子攝像（動態）技術及其適用性。方法以豚鼠全身主動過敏試驗激發后過敏反應階段，作為電子攝像內容，進行電子攝像（動態）記錄、比較分析。 結果初步建立電子攝像技術，記錄豚鼠全身主動過敏試驗激發后的過敏反應，可以對豚鼠激發后過敏反應的各種癥狀進行動態觀察、分析，還對人工記錄和電子攝像記錄進行比較，分析了兩種記錄特點。 結論在豚鼠全身主動過敏試驗引入電子攝像（動態）技術可以對原試驗記錄（人工觀察）進行補充、完善。將兩者相結合，能夠得到更真實、客觀、完整、有效的試驗原始記錄。

豚鼠；過敏試驗；電子攝像技術

豚鼠全身主動過敏試驗，是指我國現行版藥典收載的檢測注射類藥物制劑過敏反應的經典試驗方法［1］。其對過敏性反應的評定方法，主要是采用肉眼觀察和記錄受試動物在靜脈注射供試品溶液后30 min內所表現出的全身過敏反應癥狀，按照全身致敏性的評價（判定）標準對其進行過敏陽性或陰性的評價（判定）。作者在長期使用該方法評價中藥注射劑過敏試驗后發現，該方法評價（判定）的主觀因素較強，存在一定個體觀察和評價（判定）上的差異，從而不可避免地對試驗結果（結論）判定準確性和可靠性也產生一定的影響。為此，作者引入電子攝像技術對豚鼠全身主動過敏試驗中激發后的過敏反應階段進行全程記錄，發現其對實驗過程記錄的全面性、客觀性、試驗結果評價、試驗結論判定的可靠性以及可追溯性均有不可替代的優越性。本文就該方法進行簡要介紹。

1　材料與方法

1.1電子攝像設備

云監控DCS-930L無線網絡攝像機，友訊電子設備（上海）有限公司生產，UPC Code7-9006934272-1。

1.2電腦設備

電腦配置最低系統要求（臺式機）: Intel或AMD雙核CPU 1.3 GHz或更高；128 MB/512 MB內存；200 MB以上硬盤空間；使用線纜或ADSL Internet服務或具有以太網端口的DSL調制解調器。在安裝前，確認具備以太網線，電腦安裝有Windows XP或Vista與IE 6以上版本的瀏覽器并開啟了Active X 控制功能。

1.3電腦視頻觀察（記錄）方法

用攝像設備對準豚鼠觀察籠盒，打開電腦，登陸D-Link操作系統，點擊“開始”按鍵，電腦屏幕實時出現在靜脈注射供試品溶液30 min內豚鼠活動（行為體征、表現癥狀）的畫面。

1.4動物

普通級豚鼠，體質量250～350 g，由上海市松江區車墩實驗動物良種場提供［SCXK（滬）2012-0008］，在本公司動物實驗室飼養并進行實驗［SYXK（滬）2012-0009］。

1.5藥物

（1）生脈注射液，為上海和黃藥業有限公司產品，若干批號。（2）卵蛋白: Albumin，from chicken egg white CAS:9006-59-1，Pcode:1000453006，Produce of USA，使用濃度為0.7 mg/mL。（3）生理鹽水: 為上海長征富民金山制藥有限公司產品，若干批號。

1.6過敏試驗方法

取豚鼠6只，體質量250～350 g，♀♂不拘，隔日每次腹腔注射供試品溶液0.5 mL/只，共3次；然后分為兩組，每組3只，分別在首次注射后14 d 及21 d，再由靜脈注射供試品溶液1.0 mL/只進行激發，觀察靜脈注射后30 min內，豚鼠有無過敏反應癥狀，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應。在結果判斷，靜脈注射供試品溶液30 min內，不得出現過敏反應。如在同一只動物上出現豎毛、發抖、干嘔、連續噴嚏3 聲、連續咳嗽3聲、紫癜和呼吸困難等現象中的2 種或2 種以上，或出現大便、小便失禁、步態不穩或倒地、抽搐、休克、死亡現象之一者，判定供試品不符合規定［1］。陰性組（生理鹽水）3只相同方法處理。

2　結果

2.1電子攝像裝置的建立

在豚鼠靜脈注射供試品溶液后，放入觀察盒內，盒上方安裝電子攝像裝置，觀察、記錄30 min內動物（過敏反應）癥狀或體征（圖1）。

2.2生脈注射液過敏反應電子記錄（動態）截圖

從圖2可以清楚看到其中1只豚鼠正出現搔鼻行為癥狀。在動態視頻里，明顯可見豚鼠出現搔鼻、或咳嗽等這些弱陽性過敏反應癥狀。

2.3卵蛋白過敏反應電子記錄（動態）截圖

從圖3可以看到卵蛋白（陽性）組的3只豚鼠均出現了強陽性反應過敏癥狀（死亡）。在視頻里，可以看到豚鼠分別出現了大、小便失禁或步態不穩或倒地、或抽搐、直到死亡一系列強陽性反應過敏癥狀的整個動態過程。

圖 1　電子攝像探頭在圖的左上方位置

圖 2　生脈注射液激發后的過敏反應動態截圖

圖 3　陽性組（卵蛋白）激發后的過敏反應動態截圖

圖 4 陰性組（生理鹽水）激發后的過敏反應動態截圖

2.4生理鹽水過敏反應電子記錄（動態）截圖

從圖4可以看到生理鹽水（陰性）組的3只豚鼠在激發后的正常行為、癥狀。在動態視頻里，陰性組豚鼠的正常行為體征、表現癥狀更為明顯。

3　討論

依據現行版藥典收載過敏反應檢查法的要求，豚鼠全身主動過敏反應系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內，間隔一定時間后靜脈注射供試品溶液進行激發，觀察動物出現過敏反應的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應［1］。供試品不合格表明注射劑含有過敏反應物質，臨床用藥時可能使患者致敏或產生過敏反應，引起嚴重不良反應［2］。在藥物臨床安全性評價中，對藥物致敏性的關切和研究報道已受到社會日益廣泛的重視，尤其是中藥注射液的安全性問題。基于我國藥典頒布豚鼠全身主動過敏反應檢查法中可能出現影響試驗結果的因素，對此法在執行過程中，已有眾多學者提出了各自關切的內容。主要關注過敏反應與劑量相關性；藥典收載的豚鼠過敏試驗方法是否能嚴格控制藥品的安全性［3］；再次激發對過敏反應發生率的影響［4］；豚鼠全身主動過敏試驗皮下注射激發結果；一定劑量范圍內，豚鼠全身過敏反應的發生率；試驗的劑量設計和給藥途徑等［5-8］。目前尚未見到有關用電子攝像技術對豚鼠過敏試驗進行動態記錄的相關報道。作者在工作中發現，藥典收載過敏反應檢查法，在觀察激發后30 min內動物有無過敏反應癥狀［1］中，存在較強的主觀性或差異性。而在動物試驗中減少、避免主觀因素或個體差異對試驗結果、試驗結論準確性、精確性的影響，具有重要意義。為此本研究對藥典頒布豚鼠全身主動過敏反應檢查法引入電子攝像技術及該技術的適用性進行了初步探討。

本研究結果表明，用電子攝像對豚鼠過敏試驗反應癥狀的（動態）觀察，可以將每組豚鼠激發后的過敏反應癥狀，如實記錄（動態視頻、動態音頻）。本文列舉圖例是動態視頻里的截圖，沒有實際觀察視頻中的動感，但可以反映動態視頻里典型一幕。

對激發后過敏反應癥狀的觀察，人工記錄容易受到人為因素干擾影響，即存在人為觀察的主觀性及不同人之間觀察的差異性，且試驗后容易遺忘；試驗結束（豚鼠處死）后，僅憑人工觀察記錄，供試驗結論的判定及日后追溯。還有人工觀察注意力是否能保持集中30 min，有易受情緒、或心情等多方面因素影響而出現遺漏或記錄不全等情況。

電子攝像記錄中沒有受到人工觀察后會遺忘的因素影響，可以長期保存且可以再現激發后反應癥狀的真實動態畫面，可以明顯補充人工記錄的不足或在追溯記錄時對紙質（人工觀察）原始記錄予以確認、修正甚至糾正等。用電子攝像記錄，不是要取代原試驗記錄（人工觀察），而是對其補充、完善。將兩者記錄相結合，能夠得到更真實、客觀、完整、有效的試驗原始記錄。

如果有條件，在目前電子攝像記錄的基礎上，進一步完善，可能效果會更理想。比如在激發后，電子攝像記錄不是用一只電子攝像探頭對準一組（3只）豚鼠，而是用一只電子攝像探頭對準一只豚鼠，進行攝像（專一）記錄。這樣做可以在視野等方面都會有很大的提高。

作為對注射劑的藥理檢驗項目，尤其是在中藥注射劑的過敏反應試驗，建立用電子攝像對豚鼠過敏試驗進行動態觀察方法，對記錄結果分析、結論準確有重要意義。

［1］中華人民共和國藥典，二部［S］. 2010年版，附錄ⅩⅢ G 過敏反應檢查法.

［2］中華人民共和國藥典，二部［S］. 2010年版，附錄ⅩⅧ B 中藥注射劑安全性檢查法應用指導原則.

［3］張德波，蒲旭峰，楊奎. 豚鼠過敏試驗方法探討［J］. 中國藥品標準，2009，10（2）:112-116.

［4］管志英，張德波. 豚鼠過敏試驗影響因素探討［J］. 成都醫學院學報，2013，8（6）:647-650.

［5］張建強，施虹，顧性初. “豚鼠全身主動過敏試驗”以皮下注射途徑激發結果［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2013，27（3）:534.

［6］鄭智勇，李莉，趙晉，等. 不同致敏和激發劑量對豚鼠主動全身過敏試驗結果的影響［J］. 中國藥理學與毒理學雜志，2013，27（3）:540.

［7］單曉蕾，張素才，孫云霞.豚鼠給予疫苗的速發型全身主動過敏反應［J］. 中國藥理學與毒理學雜志，2013，27（3）:518-519.

［8］翁謝川，樊星，王青秀，等. 藥物安全性評價中豚鼠全身過敏試驗方法的研究［J］. 中國比較醫學雜志，2012，22（5）: 51-55.

Q95-33

B

1674-5817（2015）03-0227-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.03.010

2014-09-01

顧筠瑩（1982-），女，本科，從事實驗動物和藥理實驗研究，E-mail: gujunying718@163.com

朱根麟（1956-），男，高級工程師，從事實驗動物和藥理實驗研究，E-mail: glzhu@shpl.com.cn