慢性應激對大鼠胸腺指數和血清CORT、胸腺肽濃度的影響

崔春紅 等

[摘要] 目的 研究慢性應激對大鼠胸腺指數和血清糖皮質激素（CORT）和胸腺肽濃度的影響。方法 大鼠隨機分為對照組和應激組。應激組大鼠給予復合應激，即禁水12 h、禁食12 h、束縛6 h、晝夜顛倒、強迫游泳15 min、潮濕墊料24 h和45°浸水5 min7種應激刺激，每天隨機一次，7 d為一個周期，每種刺激應用一次，共14 d。應激結束后取材，計算胸腺指數，酶聯免疫吸附測定法檢測血清CORT和胸腺肽的含量。 結果 應激組大鼠胸腺指數為（1.08±0.13）mg/g，與對照組[（1.45±0.11）mg/g]比較顯著性減低，有統計學意義（P<0.05）；應激組大鼠血清CORT濃度為（87.91±2.45） pg/mL，與對照組[（77.28±1.56）pg/mL]比較明顯增高，有統計學意義；應激組大鼠血清胸腺肽的含量為（0.93±0.03）×103 pg/mL，與對照組[（1.40±0.06）×103 pg/mL]比較顯著性降低，有統計學意義（P<0.05）。結論 慢性應激會降低大鼠胸腺指數，抑制胸腺肽的分泌功能。

[關鍵詞] 慢性應激；胸腺；ACTH；胸腺肽

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）09（a）-0096-02

Effects of Chronic Stress on Thymus Index and Concentration of Serum CORT and Thymosin in Rats

CUIChun-hong1， SUN Zhao-xia2， LI Wei1， JIANG He1

1. Department of Histology and Embryology， Shandong Wanjie Medical School， Zibo， Shandong Province， 255213 China； 2. Department of Anatomy， Shandong Wanjie Medical School， Zibo， Shandong Province， 255213 China

[Abstract] Objective To To study the influence of acute stress on thymus index and concentration of serum CORT and thymosin in rats. Methods Rats were randomly divided into control group and stress group. Stress group rats were given compound stress， including absolute diet 12 h， water deprivation 12 h， being bounded 6 h， day and night inversion， forced swimming 15 min， damp bedding 24 h， 45° water immersion， which were randomly given once a day with 7 days for a cycle， and each stimulus was applied once for a total of 14 days. Then rats were killed and serum CORT and thymosin were extracted. We calculated the thymus index and determined the concentration of serum CORT and thymopeptide using enzyme-linked immunosorbent assay. Results The thymus index was （1.08±0.13）mg/g in the stress group ， lower than （1.45±0.11）mg/g in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05. The CORT levels was （87.91±2.45） pg/ml in the stress group， higher than （77.28±1.56）pg/ml in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05； the concentration of serum thymosin was （0.93±0.03）×103 pg/ml in the stress group， lower than（1.40±0.06）×103pg/ml in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05. Conclusion Chronic stress can lower the thymus index and inhibit the secretion of the thymosin in rats.

[Key words] Chronic Stress； Thymus； ACTH； Thymosin

應激是個體面臨或察覺到環境變化對機體有威脅或挑戰時所做出的適應和應對過程。長時間或過強的應激可引起神經、內分泌失調，免疫功能障礙[1]，而機體對應激的反應主要表現在交感-腎上腺髓質軸（sympathetic-adrenal medullary，SAM）高度興奮和下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA）反應，引起神經內分泌紊亂[2]。胸腺是機體重要的中樞免疫器官，是T淋巴細胞發育、成熟的場所，對機體外周淋巴器官的發育和免疫應答的發生起著重要的調節作用[3]。應激反應可導致胸腺的退化萎縮[4]，并伴有免疫功能受損。目前，對應激反應中血清胸腺肽濃度的研究較少。本實驗試圖通過慢性應激探討應激對大鼠胸腺指數和血清CORT以及胸腺肽濃度的影響，為進一步探討應激影響機體免疫功能的機制與途徑奠定基礎。測定胸腺指數意在了解應激對大鼠胸腺體積、重量的影響；檢測應激后血清胸腺肽濃度，旨在了解應激對胸腺肽的影響，為進一步探討胸腺肽在應激影響胸腺結構過程中的作用及其機制提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究于2014年6月—2014年8月間以12只Wistar雄性大鼠（山東大學動物實驗中心提供）為研究對象，大鼠體重180±10g，6只一籠合養（籠子尺寸為約為500mm×400mm×300mm）。在實驗室中在環境適應5 d，晝/夜周期為12h/12h（光照時間為08：00～20：00），室內溫度為（23±2）℃，濕度為50%左右。適應期內所有動物自由攝食和飲水。 適應期后對大鼠進行分組，采用隨機數表法選取6只作為正常對照組，不作任何實驗處理；另6只作為應激組。

1.2 方法

應激組大鼠給予復合應激，即禁水12 h、禁食12 h、束縛6 h、晝夜顛倒、強迫游泳15 min、潮濕墊料24 h和45°浸水5 min7種應激刺激，每天隨機一次，7 d為一個周期，每種刺激應用一次，共1 d。應激結束2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，后剖開腹腔，自腹主動脈抽取血液5 mL，室溫靜置30 min后3500r·min-1離心取上層血清，-20℃保存；剖開胸腔取出胸腺，清除表面附著的脂肪等其他組織，用濾紙吸干凈其表面的血液，后用電子天平稱量其重量。

1.3 觀察指標

1.3.1 胸腺指數 胸腺指數=胸腺重量/體重，胸腺重以mg為單位，體重以g為單位。

1.3.2 血清CORT和胸腺肽的濃度 酶聯免疫吸附測定法檢測血清CORT和胸腺肽的含量。

1.4 統計方法

采用SPSS 19.0統計軟件對數據進行統計學處理，計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05，差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠胸腺指數

應激后大鼠胸腺指數與對照組比較有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 慢性應激對大鼠胸腺指數的影響（x±s，mg/g）

注：與對照組比較*P<0.05。

2.2 血清CORT和血清胸腺肽的濃度

應激后大鼠血清CORT的濃度明顯增高，與對照組比較有統計學意義（P<0.05）；胸腺肽的濃度比較對照組顯著性減低，有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 慢性應激對大鼠血清CORT和胸腺肽的濃度的影響（x±s，pg/mL）

注：與對照組比較*P<0.05。

3 討論

胸腺是機體主要的免疫器官，為T淋巴細胞的成熟和選擇提供微環境，在免疫功能的執行與維持中發揮重要的作用。人類的胸腺在出生時已發育完全，以后隨著年齡的增長而逐漸變大，致青春期達到高峰，青春期過后胸腺逐漸退化萎縮，受性激素的影響[5-6]，故而實驗中選擇青春期雄性大鼠。

各種應激均可導致胸腺退化，這種退化是在機體應激時，通過下丘腦-垂體-腎上腺軸的作用而發生的[7]。這與本實驗的研究結果相似，大鼠經復合應激2周后血清CORT的濃度[（87.91±2.45） pg/mL]明顯升高，與對照組[（77.28±1.56）pg/mL]比較有統計學意義。

胸腺退化萎縮意味著在細胞免疫功能中起主導作用的T淋巴細胞的數目減少，從而導致細胞免疫功能下降甚至抑制。胸腺指數是反映機體胸腺免疫功能的重要指標之一，其數值高低的變化可以反映機體免疫功能的狀態[8-9]。本實驗中，我們觀察到大鼠應激2周后，胸腺指數[（1.08±0.13）mg/g]出現顯著性減低，與對照組[（1.45±0.11）mg/g]比較有統計學意義，這說明應激確實引起了胸腺的退化萎縮，與相關研究的結果是相似的[10]。

研究表明，胸腺激素在胸腺細胞的發育和成熟過程中發揮重要的作用[11-12]，胸腺肽可以增加T細胞的產生、刺激T細胞分化與成熟、減少T細胞凋亡以及產生T細胞介導抗體等[13]。本實驗中，應激大鼠血清胸腺肽濃度[（0.93±0.03）×103 pg/mL]較對照組[（1.40±0.06）×103pg/mL]明顯下降，與研究結果相吻合。應激致使胸腺萎縮退化的過程中，胸腺肽可能也起到重要的作用。但血清胸腺肽濃度降低的機制以及其與胸腺組織結構的破壞間是否有關系尚不明確，需進一步研究。

[參考文獻]

[1] Sukumaran MK，R Manjunath.Antigen specific Immune responses in mice subjected to infrared stress[J].Journal of Stress Physiology & Biochemistry，2012，8（1）：215-231

[2] McEwen BS.Protective and damaging effects of stress mediators[J].N Engl J Med，1998，338（3）：171-179

[3] Koch U，Radtke F.Mechanisms of T cell development and transformation.Annu Rev Cell Dev Biol，2011（27）：539-562

[4] 曾進，呂明莊，凌香力.刮痧療法對慢性疲勞大鼠免疫功能的影響.中醫藥臨床雜志，2013，25（2）：162-164

[5] Martin A，et al.Ultrastructural changes in the adult rat thymus after estradilo benzoate treatment.Tissue and cell，1994，26（2）：169

[6] 崔春紅，殷彥君，錢知勉，等.苯甲酸雌二醇致雌性大鼠胸腺退化作用的研究.四川解剖學雜志， 2008，16（2）：17-19

[7] 侯靜，楊軍平.心理應激與下丘腦-垂體-腎上腺-免疫軸功能關系的研究進展.實用臨床醫學，2006，7（11）：202-204

[8] 王朝蘭，劉向國，方正清，等.補肺湯對COPD肺氣虛證模型大鼠胸腺指數和脾臟指數的影響[J].甘肅中醫學院學報，2011（3）：1-4

[9] 劉穎，敬岳，郭麗麗，等.固本止咳中藥對COPD模型小鼠脾、胸腺指數級Th1/Th2失衡的影響[J].中華中醫藥雜志，2015，30（2）：504-506

[10] 高書亮，吳振宇，楊軍平，等.加味逍遙丸對小鼠站臺水環境應激狀態調節作用的實驗研究[J].江西中醫學院學報，2006，18（3）：63-64

[11] 張婷，王淑秋，孫云暉，等.α1胸腺肽對胸腺細胞發育和成熟的影響.中國病理生理雜志， 2004，20（6）：1097-1099

[12] 郭增平.胸腺激素與細胞免疫.衡水學院學報， 2009，11（1）：35-38

[13] Kim BH， Lee YJ， Kim W， et al.Efficacy of thymosin α-1 plus peginterferon α-2a combination therapy compared with peginterferon α-2a monotherapy in HBeAg-positive chronic hepatitis B： a prospective， multicenter， randomized， open-label study[J].Scand J Gastroenterol. 2012，47（8-9）：1048-1055.

（收稿日期：2015-06-03）