頂空進(jìn)樣法測定白酒中的氰化物

王海濤　顏世昕　劉奉申等

摘 要：隨著國家食藥總局加大食品安全的監(jiān)管力度，白酒中氰化物含量的檢測就顯得格外重要，本文根據(jù)GBXXX-210X食品中氰化物測定（征求意見稿）所提供的檢測方法，結(jié)合本公司實(shí)際，充分利用現(xiàn)有資源，建立了一套準(zhǔn)確檢測白酒中的氰化物的方法。本方法相關(guān)系數(shù)為0.9998，回收率為93%-110%。

關(guān)鍵詞：白酒；氰化物；頂空進(jìn)樣器；氣相色譜儀

1 概述

食品安全是國家和公眾近年來普遍關(guān)注的問題，氰化物是嚴(yán)重危害食品安全的劇毒化合物，因此氰化物是酒類產(chǎn)品的一項(xiàng)重要的食品安全檢測指標(biāo)。由于白酒中的氰化物主要來自原料，以木薯和木薯類的原料釀造的酒，因它們含有氰苷類在生產(chǎn)過程中會(huì)水解產(chǎn)生氫氰酸。雖然大部分氫氰酸在原料蒸煮時(shí)可揮發(fā)，但有少量殘留在酒中。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 原理

食品中的氰化物在酸性條件下用氯胺T將其衍生為氯化氰，頂空進(jìn)樣，氣相色譜法檢測，外標(biāo)法定量。

2.2 試劑和材料

除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

（1）氯胺T（C7H7ClNNaO2S.3（H2O））：保存于干燥器中。

（2）濃磷酸（H3PO4）。

（3）氯胺T溶液1%：稱取0.5 g氯胺T（1），用蒸餾水定溶至50 mL（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

（4）磷酸溶液（1+5，V/V）：量取10mL濃磷酸（2），加50蒸餾水，混合均勻。

（5）氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液（分子式：KCN，）：1000mg/L（市售為KCN的0.1mol/lNaOH溶液）。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）氰化物（以CN計(jì)）標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：準(zhǔn)確移取1.00mL的氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液（5）于100 mL的容量瓶，0.1mol/l的標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液定容，此溶液濃度為10mg/L，在0℃～4℃冰箱中保存， 可使用3個(gè)月。

（2）0.01mg/l標(biāo)準(zhǔn)使用液配制：準(zhǔn)確吸取10mg/l的標(biāo)準(zhǔn)中間液（1）0.1ml于100ml容量瓶中，用二次蒸餾水定容。現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.4 儀器與設(shè)備

（1）氣相色譜：美國安捷倫6820配有電子捕獲檢測器（ECD）；

（2）頂空進(jìn)樣器：上海思達(dá)精密儀器有限責(zé)任公司HS-16A；

（3）頂空瓶：美國安捷倫20 mL；

（4）渦流混合器；

（5）分析天平：感量0.0001 g；

（6）超聲波清洗器：天津奧特賽恩斯儀器有限公司AS3120。

2.5 分析步驟

2.5.1 酒樣樣制備

取0.2ml酒樣中加入9.8ml二次蒸餾水水于20ml頂空瓶中，搖勻后加入0.2ml1：5的磷酸溶液，搖勻后再加入0.2ml現(xiàn)配的氯胺T溶液，迅速封好頂空瓶蓋，搖勻放入頂空進(jìn)樣器備檢。

2.5.2 儀器參考條件

2.5.3 氣相色譜參考條件

（1）色譜柱：安捷倫CP-WAX57CB毛細(xì)管柱，50m×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.2μm（膜厚）；

（2）色譜柱溫度：40℃保持5 min，以50℃/min速率升至 200℃保持10min；

（3）載氣：氮?dú)猓兌炔坏陀?9.999%；

（4）進(jìn)樣口溫度：200℃；

（5）檢測器溫度：260℃；

（6）分流比：5：1；

（7）柱流速：2.0 mL/min；

2.5.4 頂空進(jìn)樣器條件選擇

根據(jù)GBXXX-210X食品中氰化物測定（征求意見稿）提供的頂空進(jìn)樣器條件對標(biāo)樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性檢測，發(fā)現(xiàn)靈敏度達(dá)不到檢測要求，我們分析認(rèn)為，安捷倫6820氣相色譜儀使用年限較長，靈敏度可能會(huì)有一定程度的降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)頂空進(jìn)樣器的個(gè)別條件的變化對靈敏度的影響較為明顯，因此我們進(jìn)行了一系列的實(shí)驗(yàn)，對頂空進(jìn)樣器的條件進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化（見表1）。

上表列出實(shí)驗(yàn)過程中比較有代表性的5組數(shù)據(jù)，從靈敏度分析，進(jìn)樣時(shí)間對出峰高度和面積影響較大，經(jīng)過數(shù)據(jù)對比和穩(wěn)定性、線性關(guān)系測試，最終確定4#實(shí)驗(yàn)條件為最佳條件，由此可確定頂空進(jìn)樣器的最優(yōu)條件為：

（1）頂空進(jìn)樣器針頭載氣流速：16ml/min（3.8圈）；

（2）頂空平衡溫度：50℃；

（3）取樣針溫度：55℃；

（4）傳輸線溫度：100℃；

（5）分析周期：30min；

（6）頂空加熱時(shí)間（平衡時(shí)間）：10min；

（7）加壓時(shí)間：0.1min；

（8）充樣時(shí)間：0.2min；

（9）充樣平衡時(shí)間：0.05min；

（10）進(jìn)針（進(jìn)樣）時(shí)間：0.1min；

（11）清掃時(shí)間：2min。

2.6 外標(biāo)樣檢測及定性、定量方法的建立

外標(biāo)樣的制作：準(zhǔn)確移取0.01mg/l標(biāo)準(zhǔn)使用液10ml于20ml的頂空瓶中，加入0.2ml1：5的H3PO4溶液，混勻后加入1%的氯氨T0.2ml立即封蓋，搖勻后備檢。以此為外標(biāo)樣。

待氣相色譜儀穩(wěn)定后（測試發(fā)現(xiàn)使用ECD的氣相色譜儀需要按照2.5.3設(shè)置的條件至少運(yùn)行三個(gè)空白才能進(jìn)入穩(wěn)定狀態(tài)），將此樣品放入頂空進(jìn)樣器，設(shè)置好頂空程序后開始測試，得到圖1所示的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。

根據(jù)圖1得出的譜圖、出峰時(shí)間、峰面積等信息建立定性、定量方法。

綜合2.5.3氣相色譜條件、2.5.4頂空進(jìn)樣條件和2.6外標(biāo)定性、定量方法，至此已經(jīng)建立起一整套完整、穩(wěn)定、優(yōu)化的氰化物檢測方法。

2.7 酒樣檢測

按照2.5.1的步驟對酒樣進(jìn)行預(yù)處理，放入頂空進(jìn)樣器中進(jìn)行檢測，氣相色譜軟件將根據(jù)2.6建立的定性、定量方法得出被測酒樣中氰化物的含量。如圖2。

2.8 精密度

在重復(fù)試驗(yàn)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

2.9 注意事項(xiàng)

（1）市售標(biāo)樣都是KCN的0.1mol/lNaOH溶液的溶液，在稀釋過程中中間液需用0.1mol/lNaOH作為溶劑稀釋，便于長時(shí)間保存，作為外標(biāo)的樣品可用二次蒸餾水稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配；

（2）ECD檢測器靈敏度比較高，開機(jī)后穩(wěn)定需要比較長的時(shí)間；

（3）因檢測氰化物使用外標(biāo)法，酒樣檢測時(shí)可在酒樣前后各加一個(gè)標(biāo)樣，確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性。

2.10 樣品空白測定方法

在將樣品溶液裝于頂空瓶中加入0.2mL磷酸溶液，渦流混合后，通入氮?dú)庠?0℃水域中吹掃15 min，其余步驟同樣品處理，測定結(jié)果即為樣品空白值。

用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式（1）計(jì)算試樣中氰化物（以CN計(jì)）含量：

（1）

式中：

X——試樣中氰化物（以CN計(jì)）的含量，單位為毫克每千克或毫克每升，mg/kg或mg/L；

C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣液中氰化物的濃度，單位為毫克每升，mg/L；

C0——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣液中的空白濃度，單位為毫克每升，mg/L；

V——樣品定容體積，單位為毫升，mL；

A——樣品質(zhì)量或體積，單位為克或毫升，g或mL。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)次。

參考文獻(xiàn)：

[1]GBXXX-210X食品中氰化物測定（征求意見稿）[S].

[2]李源棟，樊林等.酒中氰化物測定方法的研究進(jìn)展[J].釀酒，2009，11（06）.endprint