艾葉和蒼術熏蒸對金線蓮組培室的空氣滅菌效果

張望舒，吳夢依，黃瑜秋，周愛存，李明焱

（1.寧波浩豐農業科技有限公司，浙江 寧波 315033；2.浙江農林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培育基地，浙江 杭州 311300；3.浙江省珍稀植物藥工程技術研究中心，浙江武義 321200）

艾葉和蒼術熏蒸對金線蓮組培室的空氣滅菌效果

張望舒1，吳夢依1，黃瑜秋2，周愛存2，李明焱3

（1.寧波浩豐農業科技有限公司，浙江 寧波 315033；2.浙江農林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培育基地，浙江 杭州 311300；3.浙江省珍稀植物藥工程技術研究中心，浙江武義 321200）

分析艾葉、蒼術單獨熏蒸對金線蓮組培室空氣細菌和霉菌滅菌效果，獲取艾葉和蒼術優化的用量，同時比較艾葉和蒼術聯合熏蒸法、甲醛高錳酸鉀熏蒸法、過氧乙酸熏蒸法的滅菌效果。結果顯示，艾葉用量為2.0 g.m-3時的滅菌率為59.4%～69.0%，蒼術用量為1.5 g.m-3時的滅菌率為51.4%～59.3%；艾葉對霉菌的滅殺效果比對細菌好，而蒼術對細菌的滅殺效果則優于對霉菌的效果。艾葉用量2.0 g.m-3和蒼術用量1.5 g.m-3聯合熏蒸法滅菌率達到65.4%；甲醛高錳酸鉀熏蒸法滅菌率為71.5%；過氧乙酸熏蒸法滅菌率為67.0%。連續3年采用艾葉和蒼術聯合熏蒸，金線蓮組培苗的污染率降低。結果表明，艾葉與蒼術聯合熏蒸法可應用于金線蓮組培室空氣滅菌。

艾葉；蒼術；金線蓮組培室；熏蒸；滅菌

文獻著錄格式：張望舒，吳夢依，黃瑜秋，等.艾葉和蒼術熏蒸對金線蓮組培室的空氣滅菌效果 ［J］.浙江農業科學，2015，56（12）：1999-2001.

金線蓮（Anoectochilus roxburghii）又名金絲草，為蘭科開唇蘭屬多年生草本植物，是我國傳統名貴中藥，具有清熱涼血、除濕解毒等功效，用于治療糖尿病、腎炎、膀胱炎等癥，在民間享有“藥王”的美稱［1-3］。金線蓮長期以來依靠采挖收集野生資源，而野生金線蓮繁殖率極低，致使資源蘊藏量迅速下降，部分傳統產區已無藥可采。金線蓮種苗是其栽培的關鍵環節，種苗的優劣直接關系到金線蓮的生長發育、產量和品質［4-5］。由于金線蓮種子不具胚乳，只有在真菌共生下，才能促使其種子萌發生長，所以生產上主要采用莖段進行組織培養。但在組培生產過程中，由細菌、真菌等微生物引起的污染問題一直是當前制約金線蓮種苗繁育的主要障礙［6-7］。

金線蓮組培苗的污染與組培室培養環境的潔凈度直接相關，而組培室往往是密閉的，空間潔凈度差，空氣流通少、濕度大，易導致各種細菌、真菌等微生物滋生。針對組培室的空氣滅菌，傳統的方法是使用甲醛高錳酸鉀熏蒸、紫外燈照射、過氧乙酸熏蒸、75%乙醇噴灑及空氣滅菌器等［8］。甲醛高錳酸鉀熏蒸、紫外線照射對組培材料和人體有害，安全性較差；過氧乙酸熏蒸或75%乙醇噴灑易引起組培室濕度升高；空氣滅菌器，成本投入過大，不適用于工廠化生產。本文針對金線蓮組培育苗污染率高的問題，分析艾葉和蒼術熏蒸對組培室空氣細菌和霉菌的滅菌效果，獲取艾葉和蒼術的優化用量，依此比較艾葉和蒼術聯合熏蒸與甲醛高錳酸鉀熏蒸、過氧乙酸熏蒸的滅菌效果，旨在篩選降低金線蓮組培污染率、降低生產成本、提高效率的組培室滅菌方法。

1　材料與方法

1.1材料

艾葉和蒼術購于杭州華東中藥飲片有限公司；乙醇、甲醛、高錳酸鉀、過氧乙酸為分析純試劑；采用金線蓮組培的繼代培養基進行菌類培養。

1.2方法

1.2.1處理設計

設置3個艾葉用量梯度1.0，2.0，4.0 g.m-3和3個蒼術用量梯度1.0，1.5，2.0 g.m-3，分別測定組培室空氣的含菌數，獲取艾葉和蒼術的優化用量。比較艾葉和蒼術聯合熏蒸法與甲醛高錳酸鉀熏蒸法、過氧乙酸熏蒸法的滅菌效果。

1.2.2熏蒸滅菌方法

艾葉熏蒸方法。艾葉經干燥后直接點燃熏蒸。

蒼術熏蒸方法。用95%乙醇浸泡24 h，用時以乙醇為助然劑點燃熏蒸。

甲醛高錳酸鉀熏蒸方法。甲醛2.0 m L.m-3+高錳酸鉀1.0 g.m-3熏蒸。注意將甲醛溶液倒入盛裝高錳酸鉀的容器后，人員立即撤離。

過氧乙酸熏蒸方法。20%過氧乙酸3.0 m L. m-3液置于耐熱容器中，電爐加熱熏蒸。

1.2.3菌類檢測與統計

采用自然沉降法測定菌類數量。打開培養皿蓋暴露15 min，分別在熏蒸前、后 （熏蒸后3 d）各采樣1次，在室溫下培養2 d，然后按霉菌、細菌進行菌落數分類統計。分別在組培室的四周（距墻50 cm左右）和中間兩處共6個點進行采樣。根據奧氏公式計算組培室空氣的含菌數（m-3），再計算得出滅菌率，分析各方法的滅菌效果。

空氣菌落總數/m-3=50 000 N/A×T。

式中：A為培養皿面積 （cm2），T為培養皿暴露時間 （min），N為培養皿平均菌落數。

2　結果與分析

2.1艾葉熏蒸的滅菌效果

在不同艾葉用量梯度下，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異 （表1）。

表1　艾葉不同用量熏蒸處理的滅菌效果

由表1可知，艾葉用量為4.0 g.m-3時，滅菌率最高，為60.8%～68.4%；用量為1.0 g.m-3時，滅菌率最低，為43.2%～63.9%。結果顯示，艾葉對霉菌的滅殺效果優于細菌。隨著艾葉用量的增加，兩者間的差異降低。艾葉用量為1.0 g.m-3時，對霉菌的滅殺率與對細菌的滅殺率間的差異最大，為20.7百分點。因此艾葉用量2.0 g.m-3進行熏蒸是工廠化生產較優且經濟的選擇。

2.2蒼術熏蒸的滅菌效果

在不同蒼術用量梯度下，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異 （表2）。

表2　蒼術不同用量熏蒸處理的滅菌效果

由表2可知，蒼術用量在1.0，1.5和2.0 g. m-3時，金線蓮組培室空氣滅菌效果存在差異。蒼術對細菌的滅殺效果優于霉菌。隨著蒼術用量的增加，兩者間差異降低。蒼術用量為1.0 g.m-3時，對細菌的滅殺率與對霉菌的滅殺率間的差異最大。用量為1.5 g.m-3時，滅菌率最高。因此采用蒼術用量1.5 g.m-3進行熏蒸是較優的選擇。

2.3不同熏蒸方法滅菌效果比較

由表3可知，1.0 g.m-3高錳酸鉀和2.0 mL. m-3甲醛熏蒸法總滅菌率為71.5%，滅菌后含菌量＜90 m-3，2.0 g.m-3艾葉+1.5 g.m-3蒼術聯合熏蒸的總滅菌率為65.4%，滅菌后含菌量＜90 m-3，滅菌效果均達到組培對空氣質量的要求；3.0 m L. m-3過氧乙酸熏蒸總滅菌率為67.0%，滅菌后含菌量為103 m-3。前者滅菌效果最好，后兩者滅菌效果差異不大，但甲醛高錳酸鉀與過氧乙酸對人體傷害極大，要慎用；而蒼術與艾葉聯合熏蒸法，對人體幾乎無害，且2種藥材來源廣泛，價格便宜，是一種理想的空氣滅菌替代品。

表3　不同熏蒸處理的滅菌效果

2.4艾葉和蒼術聯合熏蒸法在金線蓮組培苗工廠化生產中的應用效果

在金線蓮組培苗工廠化生產中，連續3年應用艾葉與蒼術聯合熏蒸法對組培室進行滅菌，取得較明顯的效果。

由表4可知，與2010年相比，2012年金線蓮組培苗細菌污染下降率為1.5百分點，霉菌污染下降率為1.6百分點。艾葉與蒼術聯合熏蒸法對金線蓮組培生產空氣滅菌效果較佳，適用于金線蓮組培苗工廠化生產。

表4　艾葉與蒼術聯合熏蒸后的金線蓮組培污染率

3　小結與討論

艾葉、蒼術是常用中藥材，其資源豐富，價格低廉，用于熏蒸滅菌時，操作簡單易行且持續時間長久，已在醫院的手術室、母嬰產房、輸液室以及發熱門診等滅菌中得以應用［9-11］，但在組培室空氣滅菌中應用較少報道［12-13］。艾葉、蒼術熏蒸能有效地滅殺或抑制細菌和真菌，本試驗結果表明艾葉用量為2.0 g.m-3時的滅菌率為59.4%～69.0%，蒼術用量為1.5 g.m-3時的滅菌率為51.4%～59.3%；艾葉對霉菌的滅殺效果比對細菌的好，而蒼術對細菌的滅殺效果則優于對霉菌的效果。艾葉用量2.0 g.m-3和蒼術用量1.5 g.m-3聯合熏蒸法滅菌率達到65.4%；甲醛高錳酸鉀熏蒸法滅菌率為71.5%；過氧乙酸熏蒸法滅菌率為67.0%。連續3年采用艾葉和蒼術聯合熏蒸，金線蓮組培苗的污染率均降低。

目前金線蓮組培室空氣滅菌，常采用甲醛高錳酸鉀、過氧乙酸熏蒸。甲醛能引起慢性中毒，出現黏膜充血、皮膚刺激、過敏性皮炎等癥，高錳酸鉀與過氧乙酸都具有較強的腐蝕性，對皮膚和呼吸道有很大的刺激性，損傷呼吸道黏膜。蒼術與艾葉聯合熏蒸具有較強的殺菌作用，且效果持續時間長，對人體幾乎無傷害，克服了傳統滅菌方法的缺點，具有安全、高效、無毒害副作用的特點，是金線蓮組培生產中一種理想的空氣滅菌替代品。

［1］ 羅曉青，吳明開，查蘭松，等.珍稀藥用植物金線蓮研究現狀與發展趨勢 ［J］.貴州農業科學，2011，39（3）：71-74.

［2］ 邵清松，黃瑜秋，胡潤淮，等.金線蓮形態學性狀與產量形成關系的多重分析 ［J］.中國中藥雜志，2014，39 （11）：2456-2459.

［3］ Shao Q S，Deng Y M，Liu H B，etal.Essentialoils extraction from Anoectochilus roxburghii using supercritical carbon d ioxide and their antioxidant activity［J］.Industrial Crops and Products，2014，60：104-112.

［4］ 么厲，程惠珍，楊智，等.中藥材規范化種植 （養殖）技術指南 ［M］.北京：中國農業出版社，2006.

［5］ 毛碧增，婁沂春，蔡素琴，等.金線蓮的快速繁殖 ［J］.浙江大學學報：農業與生命科學版，1999，25（5）：527-528.

［6］ Zhang A L，Wang H Z，Shao Q S，et al.Large scale in vitro propagation of Anoectochilus roxburghii for commercial application：Pharmaceutically important and ornamental p lant ［J］.Industrial Crops and Products，2015，70：158-162.

［7］ 李艷冬，葉紅霞，陳麗萍，等.金線蓮組培快繁技術體系的研究 ［J］.江西農業學報，2013，25（4）：52-54.

［8］ 鄒瑜，林貴美，韋華芳，等.四種方法對組培室空氣消毒效果的研究 ［J］.北方園藝，2009（8）：117-119.

［9］ 梅全喜，高玉橋.中藥艾葉空氣消毒研究近況 ［J］.中醫藥學刊，2005（9）：1581-1582.

［10］ 曾薇，袁勁松.中藥蒼術空氣消毒研究進展 ［J］.深圳中西醫結合雜志，2004（1）：44-46.

［11］ 黃美華，呂衛群，胡桂根，等.艾葉與蒼術熏蒸空氣消毒效果觀察 ［J］.護理學雜志，2008，23（10）：54-55.

［12］ 鄒瑜，林貴美，韋華芳.艾葉、蒼術在香蕉組培苗工廠化生產車間的空氣消毒研究 ［J］.廣西農業科學，2008，39 （6）：767-770.

［13］ 鄒曾碩，劉國鳳，唐偉，等.蒼術和艾葉用于馬鈴薯組培室熏蒸的研究［J］.中國馬鈴薯，2010，24（1）：43-46.

（責任編輯：張瑞麟）

S 567

B

0528-9017（2015）12-1999-03

10.16178/j.issn.0528-9017.20151226

2015-06-24

寧波市農業科技攻關項目 （2014C10013）；浙江省公益性技術應用研究計劃項目 （2014C32017）

張望舒 （1979-），女，浙江臨海人，高級工程師，博士，主要從事植物栽培與育種研究工作。E-mail：zjuzws@ hotmail.com。