茶樹菇YBS408菌株的抑菌活性檢測

孔艷娥 楊本壽 蘇麗娜

摘 要：對從野生茶樹菇子實體中分離、純化獲得的茶樹菇YBS408菌株進行了人工馴化，代料栽培取得了成功。紙片擴散法檢測初次純化得到的和人工馴化后的茶樹菇YBS408對12種病原指示菌的抑菌活性。結果初次純化的茶樹菇YBS408菌株對病原細菌抑菌活性明顯，而對病原真菌不明顯。人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株對所有指示菌均無抑菌活性，出現抑菌活性丟失現象。

關鍵詞：茶樹菇YBS408 抑菌活性 人工馴化

中圖分類號：TQ465.92 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）07（b）-0021-02

茶樹菇（Agrocybe cylindracea）屬于真菌門，擔子菌綱，糞銹傘科，田菇屬。又名茶薪菇、楊樹菇、柱狀田頭菇、柳菌、柳環菌、柳松茸、柱狀環銹傘等。營養豐富，味道鮮美，具有很高的實用價值。同時，具有明目、利尿、平肝、健脾、清熱等藥用價值。是一種珍貴的藥、食兩用菌，素有“中華神菇”之美譽。

茶樹菇YBS408菌株是從曲靖市麒麟區護城河旁的柳樹上采摘到的茶樹菇子實體分離、純化獲得。依照文獻報道[1-2]進行了形態分類鑒定，結合分子鑒定為茶樹菇并命名。茶樹菇YBS408菌株經過人工馴化后，代料栽培獲得了成功。本研究主要對初次純化得到的及人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株進行抑菌活性檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

茶樹菇YBS408菌株，現存于曲靖醫學高等專科學校微生物研究所。

1.1.2 茶樹菇YBS408菌株代料栽培配方

棉籽殼78%、麥麩18%、石膏粉1%、糖1%、石灰粉2%，PH自然。茶樹菇YBS408菌株菌絲培養階段置于25℃恒溫箱內，待褐化轉色后，開袋噴水，置于22℃條件下培養。

1.1.3 培養基和培養條件

病原指示細菌培養基：Nutrient Agar培養基（Pepton 5g，Beef extract 30 g，NaCl 5 g，Agar 15 g，加d H2O 至1000mL，pH：7.0-7.2）。病原指示真菌及茶樹菇YBS408菌株培養基：PDA固體培養基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，自來水1000mL，pH自然）；發酵培養基：PDB液體培養基；病原指示細菌培養基：培養溫度為28℃，病原指示細菌、皮膚致病真菌指示菌培養溫度為37℃，植物致病真菌指示菌培養溫度為28℃。

1.1.4 病原指示菌

抑菌活性測試中所用到的35種病原指示菌特性、來源見表1。

1.2 方法

1.2.1 發酵樣品的制備

將純化的及人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株接種到35 mL PDB培養基中，28℃，200r/min搖床培養5d，無菌條件下濾去菌絲體，在得到的發酵液中加入等體積乙酸乙酯，浸提48 h后過濾除去菌體，濃縮至干，加入2 ml甲醇制成發酵樣品。

1.2.2 含菌平板的制備

取各病原指示菌的新鮮斜面培養物分別接入5 ml無菌水稀釋制成菌懸液。無菌條件下分別取供試指示菌懸液各0.2 ml，加入相應的固體培養基制成含菌平板。

1.2.3 抑菌活性檢測

采用濾紙片法（直徑6 mm）測定抑菌活性，將浸泡有茶樹菇YBS408菌株發酵液的無菌濾紙片三片疊加在一起放入含菌平板上。置于培養箱內培養48 h后，十字交叉法測量抑菌圈直徑。

2 結果與分析

2.1 代料栽培茶樹菇YBS408菌株結果

茶樹菇YBS408菌株菌絲培養60d后，菌絲長滿菌袋，出現褐化轉色現象。開袋噴水，在保持空氣濕度85%條件下10d～15d后，子實體原基大量形成，并開始出菇。出菇結果見圖1。

2.2 抑菌活性檢測結果

采用濾紙片法對初次純化得到的茶樹菇YBS408菌株發酵液的甲醇提液進行抑菌試驗（結果見表2）。從表2可見，茶樹菇YBS408菌株的甲醇提液對所測定的3種革蘭氏陽性菌和3種革蘭氏陰性細菌指示菌均具有抑菌活性。其中對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌抑菌活性較強。對所檢測的6種真菌抑菌活性較弱，只對水稻稻瘟菌16t有一定的抑制作用。

同時，對人工馴化后，獲得代料栽培成功后獲得的茶樹菇YBS408菌株的發酵液也進行了抑菌活性檢測。結果顯示，人工馴化后的茶樹菇YBS408菌株對所檢測的12種病原指示菌均無抑菌活性。

3 結語

本次試驗成功的從野外生長的茶樹菇子實體中分離、純化得到茶樹菇YBS408菌株，并經過人工馴化，獲得了代料栽培的成功。

通過抑菌活性檢測試驗，可以看出初次純化獲得的茶樹菇YBS408菌株甲醇發酵液對所檢測的6種細菌均具有不同程度的抑菌效果，但對真菌的抑菌效果不明顯。而對人工馴化后，經過代料栽培取得成功后的茶樹菇YBS408菌株甲醇發酵液進行抑菌活性檢測，結果均無抑菌效果，出現了抑菌活性丟失現象。抑菌活性丟失現象是繼代培養造成的菌株退化引起的，菌株自身存在的自發突變和培養條件的改變都會造成菌株的退化。最根本的原因是菌株自身的自發突變引起的。傳代次數越多，菌株發生變異的幾率越高，控制抑菌活性性狀的基因發生突變的可能性就越高，從而造成抑菌活性的丟失。因此，在以后的食用菌培養栽培過程中，只有控制傳代次數，改變培養條件，改進菌種的保藏條件才可以有效避免抑菌活性的丟失。

參考文獻

[1]Barnett HL，Hunter BB. Illustrated genera of imperfect fungi[M].Illustrated genera of imperfect fungi，1972（3rd ed）.

[2]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上海科學技術出版社，1979.