舒筋活血丸中非法添加物松香酸的檢測方法△

汪楊麗，蘇晶，張毅

(重慶市食品藥品檢驗所 重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121)

·中藥工業·

舒筋活血丸中非法添加物松香酸的檢測方法△

汪楊麗，蘇晶，張毅*

(重慶市食品藥品檢驗所 重慶市藥物過程與質量控制工程技術研究中心，重慶 401121)

目的：建立舒筋活血丸中非法添加物松香酸的檢測方法。方法：采用薄層色譜法、高效液相色譜-二極管陣列檢測器法初步檢查，運用液質聯用法進行驗證。結果：上述3種方法均可檢出含有松香酸的舒筋活血丸樣品。結論：3種方法結合起來，可從初篩、定量與驗證多角度出具檢測數據，且方法簡單、準確、可靠，可用于檢測舒筋活血丸中的非法添加物松香酸。

舒筋活血丸；松香酸；薄層色譜法；高效液相色譜-二極管陣列檢測器法；液質聯用法

舒筋活血丸由當歸、乳香(制)等20味中藥組成，具有舒筋通絡，活血止痛的功能。方中乳香[1]具有活血定痛，消腫生肌的功能，其為進口藥材，來源有限，價格較貴，市場調查發現乳香中常有用松香摻偽的現象[2-3]。松香為松科松屬若干植物中滲出的油樹脂，經蒸餾或提取，除出揮發油后所余的固體樹脂，主要成分為松香酸[4-7]。有報道稱，銀屑敵膠囊中因含非法添加物松香酸，造成部分患者失明、急性肝壞死等。舒筋活血丸的現行標準[8]中無檢測松香酸的方法，不能有效地保障藥品安全，可能損害患者的健康。因此，筆者建立了以下3種方法，檢測舒筋活血丸中是否含有非法添加物松香酸。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695高效色譜系統；Waters 2998檢測器；Waters Acquity-Waters TQD二級質譜；乙腈為色譜純(美國Fisher公司)；無水乙醇為分析純；二次蒸餾水為自制。

1.2 試藥

舒筋活血丸均為2012年國家藥品評價抽驗樣品；乳香對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：120970-200904)；松香酸對照試劑(阿拉丁試劑上海有限公司，批號：G1225034)。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜法

取舒筋活血丸3丸，剪碎，加硅藻土10 g，混勻，研細，加無水乙醇50 mL，超聲處理20 min，濾過，取濾液5 mL，HPLC檢查備用，剩余濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液。取乳香對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。取松香酸對照試劑，加乙醇制成質量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對照試劑溶液。吸取上述供試品溶液5～10 μL和對照試劑溶液、對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-冰乙酸(8∶>2∶>0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，結果見圖1。

注：1、2.檢出松香酸樣品；3.未檢出松香酸樣品；4.乳香對照藥材；5.未檢出松香酸樣品+松香酸對照試劑；S.松香酸對照品試劑。圖1 舒筋活血丸薄層色譜圖

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%甲酸(75∶>25)；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長為241 nm。

2.2.2 溶液的制備 取2.1項下的HPLC檢查備用液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液作為供試品溶液。精密稱取松香酸對照試劑適量，加乙醇制成質量濃度為50 μg·mL-1的溶液，作為對照試劑溶液。

2.2.3 檢測結果 分別取供試品溶液5～10 μL，對照試劑溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見圖2。

2.2.4 儀器檢出限 取2.2.2項下的對照試劑溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，再取1 mL，置5 mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，作為對照試劑溶液。進樣量10 μL，其信噪比為3∶>1時對照試劑的質量濃度為0.09 ug·mL-1，確定該濃度為儀器檢出限。

A.對照試劑；B.檢出松香酸(陽性)樣品；C.未檢出松香酸樣品；1.松香酸。圖2 舒筋活血丸HPLC圖

2.3 高效液相色譜-質譜聯用法驗證

2.3.1 色譜條件和質譜檢測參數 色譜柱為Waters C18(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動相為乙腈-0.1%甲酸(75∶>25)；流速為0.3 mL·min-1。質譜檢測參數：ESI+ 掃描；毛細管電壓為3.50 kv；干燥氣為氮氣；干燥氣溫度為350 ℃；干燥氣流速為10 mL·min-1；掃描范圍為100～1000 m/z。

2.3.2 溶液制備 取2.1項下的HPLC檢查備用液0.2 mL，置10 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.22 μm)濾過，取續濾液，作為供試品溶液。取2.2.2項下的松香酸對照試劑溶液0.5 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.22 μm)濾過，作為對照試劑溶液。

2.3.3 檢測結果 分別取供試品溶液和對照試劑溶液各1 μL，注入液質聯用色譜儀，記錄色譜圖、離子圖。結果見圖3～4。松香酸的質譜特征：ESI+掃描，松香酸對照試劑，ESI+掃描一級質譜m/z 303.0[M+H]+，以m/z 303.0為母離子的二級質譜m/z 257[M-COOH]+，在檢出松香酸的舒筋活血丸樣品中，與松香酸對照試劑相應色譜峰具有相同的質譜特征。

A.陽性樣品色譜圖；B.松香酸對照試劑色譜圖；C.陽性樣品離子圖；D.松香酸對照試劑離子圖。下同。

圖4 陽性樣品及松香酸對照試劑的LC/MS2分析圖

3 討論

3.1采用本試驗建立的方法，均可檢出非法添加松香酸的舒筋活血丸樣品，結果準確可靠。

3.2在薄層色譜法鑒別[9-10]中，筆者對GF254板噴以10%硫酸-乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。樣品色譜中，在與松香酸對照試劑色譜相應位置附近，相似顏色熒光斑點較多，干擾判斷，所以未設立在紫外光燈(365 nm)下檢視。

3.3在高效液相色譜法[2，11-12]中，作者采用乙腈-四氫呋喃-0.1%甲酸(40∶>35∶>25)、乙腈-0.1%甲酸(75∶>25)2種流動相進行比較試驗，后者組分簡單、經濟，色譜峰形佳，分離效果好，故選其做流動相。

3.4薄層色譜法、高效液相色譜-二極管陣列檢測器法的初步檢查，結合液質聯用法的驗證，能準確、可靠、簡單地判斷舒筋活血丸中是否含有松香酸類物質，可為舒筋活血丸的質量標準完善提供參考，進而為監管該藥品質量提供技術支持。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 國家食品藥品監督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件2010005：乳香[S].

[3] 國家食品藥品監督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件2011013：活血止痛散(膠囊、片)[S].

[4] 張妤琳，曹玲，譚力，等.液質聯用技術用于沉香中非法摻入含松香酸類物質的檢測[J].中成藥，2011，33(5)：844-847.

[5] 劉偉華.松香藥材中松香酸的含量測定方法[J].醫藥論壇雜志，2011，32(24)：46-47，50.

[6] 趙金鳳，周春蘭，周鳳琴，等.乳香揮發性成分GC-MS分析[J].中國中藥雜志，2011，36(8)：1050-1053.

[7] 佟昕，劉汶，梁曉旭，等.乳香中乳香揮發性成分GC-MS分析[J].中國現代中藥，2012，14(7)：11-14.

[8] 國家食品藥品監督管理局.國家藥品標準WS3-B-0153-89-2011：舒筋活血丸[S].

[9] 李莉.麝香接骨膠囊中摻假物松香酸的檢查[J].藥學與臨床研究，2010，18(5)：499-500.

[10] 國家食品藥品監督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件2008017：沉香[S].

[11] 趙江紅.高效液相色譜法鑒定29批血竭中非法添加的3種化學成分[J].中醫研究，2011，24(8)：17-19.

[12] 仇雅靜.高效液相色譜法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸[J].中國藥業，2011，20(4)：39-40.

IdentificationofillegaladditiveabieticacidinShujinHuoxuepills

WANGYangli，SUJing，ZHANGYi*

(ChongqingInstituteForFoodandDrugControl，ChongqingEngineeringResearchCenterforPharmaceuticalProcessandQualityControl，401121，China)

Objective：To establish a method for identification of abietic acid，an illegal additive in ShujinHuoxue pills.Methods：Abietic acid was identified by TLC and HPLC-DAD，and confirmed by LC-MS.Results：The three established methods could identify abietic acid in Shujin Huoxue pills’ samples.Conclusion：Combining three methods abietic acid could be screened，quantified and confirmed in the samples.The established methods are accurate，reliable and simple，suitable for the identification of abietic acid in Shujin Huoxue pills.

ShujinHuoxue pill；abietic acid；TLC；HPLC-DAD；LC-MS

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.013

2014-06-06)

重慶市科技攻關項目—食品藥品毒性物和非法添加劑檢測新技術研究與應用(CSTC2012ggB10001)

*

張毅，副主任中藥師，研究方向：中藥質量控制與研究；Tel：(023)86072771，E-mail：zy157343156@163.com