肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質研究△

高云佳，姜勇，戴昉，韓志玲，劉海月，鮑忠，張彤梅，屠鵬飛

(北京大學 藥學院 中醫藥現代研究中心，北京 100191)

·基礎研究·

肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質研究△

高云佳，姜勇，戴昉，韓志玲，劉海月，鮑忠，張彤梅，屠鵬飛*

(北京大學 藥學院 中醫藥現代研究中心，北京 100191)

目的：研究肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質。方法：根據肉蓯蓉所含主要成分，采用溶劑和色譜方法將其成分分為總多糖、總苷、總寡糖(含半乳糖醇)、半乳糖醇、去半乳糖醇總寡糖等五個部位，采用復方地芬諾酯制造小鼠便秘模型，經口給予肉蓯蓉各部位提取物，觀察并記錄其排出第一粒紅色糞便的時間、排便粒數，以及糞便形態、糞便含水量，小腸的推進率和含水量。結果：肉蓯蓉總寡糖及去半乳糖醇總寡糖顯著縮短便秘小鼠6 h內的首次排紅便時間，并能顯著增加小鼠排便粒數及排便干重，同時總寡糖顯著增加首次排紅便動物只數及6 h持續增加水分含量，總寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇總寡糖對便秘小鼠的小腸推進率有非常顯著的影響。結論：肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質為總寡糖和半乳糖醇。

荒漠肉蓯蓉；總寡糖；半乳糖醇；潤腸通便

中藥肉蓯蓉為列當科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schenk)R.Wight干燥帶鱗葉的肉質莖。其性溫，味苦、咸，歸腎、大腸經。具有補腎陽、益精血、潤腸通便等功效。多用于腎陽不足、精血虧虛、陽痿不孕、腰膝酸軟、筋骨無力、腸燥便秘[1]。肉蓯蓉屬于潤腸通便類中藥，具有作用緩和、便而不瀉的特點，尤其適合于老年人、產婦和身體虛弱等人群的便秘治療。隨著人口老齡化和現代社會工作壓力的增加，老年性便秘和習慣性便秘發病率明顯增加，作為傳統通便藥物的肉蓯蓉用量也明顯增加。近年來，國內外學者對肉蓯蓉的研究非常活躍，但主要集中在調節免疫、神經保護、抗衰老、抗氧化、肝臟保護等方面[2]，對其潤腸通便的藥效物質及其作用機理研究報道很少。張百舜等[3]對肉蓯蓉的通便作用及其有效成分進行了研究，前期認為其有效成分為無機鹽和膠質類多糖成分，但此后研究又認為其通便的主要有效成分為半乳糖醇，無機鹽僅起輔助作用[4-5]。為了進一步闡明肉蓯蓉潤腸通便的藥效物質及其作用機理，為臨床合理用藥和深層次開發利用提供科學依據，本文采用溶劑提取、結晶和色譜分離等多種方法，將肉蓯蓉提取物按照化學成分的類型進行了分離，并對各分離部位進行了通便作用比較，明確了肉蓯蓉通便作用的藥效物質基礎。

1 材料

1.1 藥品

肉蓯蓉飲片購自內蒙古王爺地蓯蓉生物有限公司，經北京大學藥學院天然藥物學系屠鵬飛教授鑒定為荒漠肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥肉質莖經切制加工而成。

復方地芬諾酯(焦作市博愛藥業有限公司，批號：04051501；成分：鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品25 μg)。

麻仁地黃丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：6015389；濃度：4 g·kg-1；成分：火麻仁、苦杏仁、大黃、木香、陳皮、白芍，輔料為賦形劑蜂蜜)。

1.2 實驗動物

ICR系小鼠87只，體重24～26 g，雌雄各半；購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(京)2002-0003。二級實驗動物飼養條件，大小鼠全價飼料配方，二級滅菌塊料。滅菌酸化水。滅菌塑料小鼠籠，每籠5或6只。室溫22±2 ℃，濕度45～55%。

2 方法

2.1 肉蓯蓉各部位提取物的制備與化學成分分析

肉蓯蓉各部位提取物的制備 取肉蓯蓉飲片10 kg，加8倍量水加熱回流提取三次，每次2 h，合并濾液，減壓濃縮至相對密度達1.15(50 ℃測定)，加95%乙醇至含醇量達60%，低溫沉淀12小時，濾過，沉淀即為粗多糖部位；濾液減壓濃縮至相對密度1.15(50 ℃測定)，再經大孔樹脂純化，依次用水和不同濃度的乙醇洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮至稠膏，即得含半乳糖醇的肉蓯蓉總寡糖；再用40%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得肉蓯蓉總苷；取部分含半乳糖醇的肉蓯蓉總寡糖，加適量的95%乙醇，低溫保存24 h，半乳糖醇快速結晶，濾出結晶，濾液減壓濃縮、干燥，分別得到半乳糖醇和去除半乳糖醇的總寡糖部位。

肉蓯蓉各部位提取物的化學成分分析 粗多糖部位：主要含多糖類成分。

總苷部位：該部位主要含有苯乙醇苷類和環烯醚萜苷類。采用高效液相色譜法對其松果菊苷、毛蕊花糖苷、8-表馬錢子酸的含量進行了測定；采用紫外分光光度法，分別以松果菊苷和8-表馬錢子酸為對照，對其總苯乙醇苷和總環烯醚萜苷進行了含量測定。結果表明，本品以干燥品計，含松果菊苷為4.27%，毛蕊花糖苷為0.65%，8-表馬錢子酸為2.37%；含總苯乙醇苷以松果菊苷計為32.38%，含總環烯醚萜苷以8-表馬錢子酸計為46.38%。

總寡糖部位(含半乳糖醇)：采用HPLC-ELSD方法對該部位的半乳糖醇進行了含量測定；采用紫外分光光度法，以葡糖糖為對照，對總寡糖的含量進行了測定。結果表明，本品以干燥品計，含半乳糖醇為27.75%，含總寡糖以葡萄糖計為69.42%。

半乳糖醇：采用HPLC-ELSD峰面積歸一化方法對其進行了測定，含量為99.32%。

去半乳糖醇總寡糖部位：除半乳糖醇不含外，其它成分組成同總寡糖部位。

2.2 各提取物的給藥劑量

總寡糖：3.7 g·kg-1；總苷：0.4 g·kg-1；多糖：0.4 g·kg-1；半乳糖醇：0.8 g·kg-1；去半乳糖醇總寡糖：3.3 g·kg-1。均由北京華醫神農科技有限公司化學室提供，批號：051206。

2.3 排便實驗

按體重隨機將動物分為空白對照組、模型組和各提取物組。給藥前24 h禁食不禁水，次日空白對照組灌胃給予去離子水，模型組及各給藥組灌胃給予10 mg·kg-1的復方地芬諾酯造模，30 min后空白對照組、模型組灌胃給予含1%曙紅的去離子水，各給藥組灌胃給予含1%曙紅的藥液。給藥后單籠飼養，記錄排紅便動物數、排出第一粒紅色糞便的時間、給藥0～1、1～2、2～4、4～6 h后各組動物的排便粒數及糞便形態，將糞便放置于管中稱量糞便濕重，再放入干燥箱內105 ℃烘2 h，稱量干重，并計算糞便水分含量(結果見表1～4)。用下述公式計算糞便水分含量：

含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%

表1 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠排紅便時間的影響

注：N代表排紅便的動物數。X2確切概率法檢驗：與空白對照組比較：+++表示P<0.001；與模型組比較：+表示P<0.05。

One-way ANOVA檢驗：與空白對照組比較：###表示P<0.001；與模型組比較：**表示P<0.01，***表示P<0.001。

表2 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠6 h排便粒數及6 h排便干重的影響

注：與空白對照組比較：###表示P<0.001；與模型組比較：*表示P<0.05，**表示P<0.01。

2.4 小腸推進實驗

實驗前各組動物禁食不禁水24 h，除空白對照組給予蒸餾水外，余組均給予復方地芬諾酯 10 mg·kg-1造模。30 min后，各提取物組、空白對照組、陽性對照組和模型組分別給予含樣品的墨汁(5%的活性炭粉與10%阿拉伯樹膠和墨汁)，再過30 min頸椎脫臼處死各動物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門，下端至回盲部的腸管，輕輕將小腸拉成直線，測量小腸長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推行長度”，并計算墨汁推進率(結果見表5)。用下式計算“墨汁推進率”：

表3 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠每小時排便干重的影響

注：與空白對照組比較：###表示P<0.001，##表示P<0.01，#表示P<0.05；與模型組比較：*表示P<0.05。

表4 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠糞便含水量的影響

注：與空白對照組比較：#表示P<0.05，##表示P<0.01；與模型組比較：**表示P<0.01。

墨汁推進率=墨汁推進長度/小腸總長度×100%

取小腸，稱量濕重。將小腸置于平皿中放于干燥箱內(105 ℃)干燥2 h后取出，稱取干重，并計算小腸水分含量(結果見表6)。用下述公式計算小腸水分含量：

水分含量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%

3 數據統計

4 結果

4.1 排便實驗

由表1～4可見，給予10 mg·kg-1復方地芬諾酯后，6 h內首次排紅便的動物只數顯著減少，首次排紅便時間顯著延長；6 h內的排便粒數、排便干重及糞便水分含量顯著減少；排便干重在造模0～1、1～2、2～4 h均顯著減少，糞便含水量在造模1～2、2～4 h顯著降低，表明小鼠便秘造模成功。

各提取物組給藥后，6 h內總寡糖組能顯著增加便秘動物首次排紅便的動物只數，顯著提高便秘動物糞便中的含水量；總寡糖組及去半乳糖醇總寡糖組能顯著縮短便秘動物首次排紅便的時間，并顯著增加6 h內的排便粒數、排便干重及1～2 h的排便干重。

4.3 小腸推進實驗

由表5可見，多糖和總苷組與便秘模型對照組相比，墨汁推進率均沒有顯著性差異(P>0.05)。肉蓯蓉總寡糖組、半乳糖醇組和去半乳糖醇總寡糖與便秘模型對照組相比，墨汁推進率有非常顯著的差異(P<0.001，P<0.001，P<0.01)。肉蓯蓉總寡糖組、去半乳糖醇總寡糖組和半乳糖醇組與麻仁地黃丸組相比，墨汁推進率均沒有顯著性差異(P>0.05)。

由表6可見，模型對照組與正常對照組相比，小腸水分含量沒有顯著性差異(P>0.05)，說明10 mg·kg-1復方地芬諾酯給藥后半小時對小腸的水分含量影響不大。多糖、總寡糖組和半乳糖醇組與便秘模型對照組相比，小腸水分含量沒有顯著性差異(P>0.05)；去半乳糖醇總寡糖組和總苷組與便秘模型對照組相比，小腸水分含量有顯著的差異(P<0.01，P<0.05)。

表5 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠小腸推進運動的影響

注：與模型組比較：**表示P<0.01；***表示P<0.001。

表6 肉蓯蓉提取物對便秘小鼠小腸水分含量的影響

注：與模型組比較：*表示P<0.05，**表示P<0.01。

5 結論

通過上述實驗數據可知，單次口服肉蓯蓉總寡糖及去半乳糖醇總寡糖對10 mg·kg-1復方地芬諾酯造成的便秘模型小鼠的6 h內首次排紅便時間、排便粒數及排便干重均有顯著影響，同時總寡糖顯著增加首次排紅便動物只數及糞便水分含量；肉蓯蓉總寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇總寡糖對便秘小鼠的小腸墨汁推進率有非常顯著提高作用。說明肉蓯蓉總寡糖、去半乳糖總寡糖和半乳糖醇能增強腸蠕動，有效改善腸肌運動功能。結果表明肉蓯蓉總寡糖(包括寡糖和半乳糖醇)為肉蓯蓉通便的有效部位，總多糖和總苷均無明顯的通便作用。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：126.

[2] 屠鵬飛，姜勇，郭玉海，等.肉蓯蓉研究及其產業發展[J].中國藥學雜志，2011，46(12)：882-887.

[3] 張百舜，魯學書，張潤珍，等.肉蓯蓉的通便作用[J].中藥材，1992，15(7)：33-35.

[4] 張百舜，趙學文，陳雙厚，等.肉蓯蓉分離部位通便作用的實驗研究[J].中國中醫藥信息雜志，2003，10(11)：31-32.

[5] 張百舜 陳雙厚 趙學文.肉蓯蓉提取物半乳糖醇通便作用的量效研究[J].中國中醫藥信息雜志，2003，10(12)：28-29.

StudyonLaxativeConstituentsinCistanchedeserticolaY.C.Ma

GAOYunjia，JIANGYong，DAIFang，HANZhiling，LIUHaiyue，BAOZhong，ZHANGTongmei，TUPengfei*

(SchoolofPharmaceuticalSciences，ModernResearchCenterforTCM，PekingUniversityHealthScienceCenter，Beijing100191，China)

Objective：To study the laxative constituents ofCistanchedeserticolaY.C.Ma.Methods：By using the different solvents and chromatographic methods，the water extract ofC.deserticolawas separated into five fractions，including total glycosides，total oligosaccharides(containing galactitol)，galactitol，oligosaccharides(removing galactitol)，and polysaccharides.The compound diphenoxylate-induced constipation model was used to observe the defecation time of the first red feces，the granule number of feces，the appearance and the water content of feces，the movement of small intestine and the water content after oral administration of the different fractions ofC.deserticola.Results：The total oligosaccharides(containing galactitol)and the oligosaccharides(removing galactitol)significantly shortened the defecation time of the first red feces，and increased the granule number and the weight of feces within six hours.The total oligosaccharides(containing galactitol)significantly increased the animal numbers which could first defecate the red feces and the water content of the feces within six hours.The total oligosaccharides(containing galactitol)，the galactitol，and the oligosaccharides(removing galactitol)could significantly increase the movement of small intestine.Conclusion：The total oligosaccharides and galactitol were proven to be the laxative constituents ofC.deserticola.

Cistanchedeserticola；oligosaccharides；galactitol；laxative activity

2015-03-20)

國家重大新藥創制專項(2012ZX09103201-034)

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屠鵬飛，教授，研究方向：天然藥物活性成分與新藥研究、中藥質量分析；Tel：(010)82802750，E-mail：pengfeitu@bjmu.edu.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003