不同年限園參和石柱參不同部位人參皂苷的含量測(cè)定

鄭秀茜，房城，劉永武，賈博宇

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

·基礎(chǔ)研究·

不同年限園參和石柱參不同部位人參皂苷的含量測(cè)定

鄭秀茜，房城，劉永武，賈博宇*

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：在人參皂苷的生產(chǎn)中，根據(jù)其不同部位、不同產(chǎn)地、不同年限的差異選擇適宜的提取分離樣品。方法：采用HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地園參和石柱參不同部位人參皂苷化合物的含量。結(jié)果：提取人參皂苷Rg1時(shí)建議優(yōu)先選擇桓仁7年生園參；提取人參皂苷Re時(shí)建議選用低年限的人參樣品；提取人參皂苷Rb1時(shí)建議選用須根。結(jié)論：不同年限、不同產(chǎn)地、不同部位的人參皂苷含量差異較大，研究為增加人參皂苷的提取率、降低生產(chǎn)成本提供參考。

園參；石柱參；人參皂苷；不同部位

人參系五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根莖，在我國(guó)主產(chǎn)于東北三省，被稱(chēng)為“東北三寶”之一。人參具有大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智的功效[1]。園參為人工栽培于園地的人參。石柱參為人參野生變家種的優(yōu)良品種[2]，栽培區(qū)在遼東山地，龍崗山西南延伸部[3]。

人參主要含有人參皂苷類(lèi)化合物，該類(lèi)化合物具有較強(qiáng)的藥理活性，具有抗癌、抗衰老等重要的藥用價(jià)值[4-6]。本文通過(guò)對(duì)不同栽培年限、不同產(chǎn)地園參和石柱參樣品的不同部位中人參皂苷Rg1、Re、Rb1含量進(jìn)行比較研究，客觀全面地評(píng)價(jià)人參藥材質(zhì)量，為人參中有效成分的提取提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀(HITACHI UV Detector-L7420，pump-L7100，日本日立公司)，Chromoto-Solution Light色譜工作站(SHIMADZU)，sartorius BS 124S精密電子天平，KQ5200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料

對(duì)照品人參皂苷Rg1(批號(hào)：110703-200322)、人參皂苷Re(批號(hào)：110754-200320)及人參皂苷Rb1(批號(hào)：110704-200318)購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。園參藥材分別采集于遼寧省寬甸、桓仁，石柱參藥材采集于遼寧省寬甸縣石柱鄉(xiāng)，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)路金才教授鑒定為五加科人參屬植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根及根莖。

乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為實(shí)驗(yàn)室自制，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil-Keystone C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；進(jìn)樣體積：20 μL；體積流量：1.0 mL·min-1；柱溫：(30±0.15)℃；流動(dòng)相系統(tǒng)洗脫程序見(jiàn)表1，A為乙腈；B為0.05%磷酸水溶液。

表1 流動(dòng)相洗脫程序

2.2 對(duì)照品溶液制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取對(duì)照品人參皂苷Rg1、Re、Rb1分別為5.4、5.6、5.1 mg，加甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得對(duì)照品母液。從母液中各分別移取0.05、0.1、0.5、1、1.5 mL定容于2 mL量瓶中，制成各級(jí)對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取各人參樣品生藥粗粉0.1 g，加入70%甲醇溶液放置過(guò)夜，超聲30 min，微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 在上述分析條件下將人參皂苷對(duì)照品溶液的6個(gè)梯度溶液分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定不同人參單體皂苷的峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X(μg)，峰面積為縱坐標(biāo)Y(μV)，進(jìn)行線性回歸，得人參皂苷Rg1、Re、Rb1的回歸方程分別為：Y=6×105X-2 779.6，r=0.999 7；Y=9×105X-31 204.8，r=0.999 7；Y=3×105X-4 678.9，r=0.999 6。人參皂苷Rg1在0.27～10.8 μg、Re在0.28～11.2 μg、Rb1在0.255～10.2 μg線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取同一人參供試品(桓仁6年生園參主根)溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定Rg1的峰面積，并計(jì)算出峰面積的RSD=0.75%。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一人參供試品(桓仁6年生園參主根)溶液，按上述色譜條件，分別于第0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，測(cè)定人參皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面積，并計(jì)算出峰面積的RSD分別為1.53%、1.46%、1.18%，結(jié)果表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一人參樣品(桓仁6年生園參主根)生藥粗粉，按供試品溶液制備方法平行制備6份樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，測(cè)定人參皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面積，并計(jì)算出峰面積的RSD值分別為1.96%、1.99%、1.65%，表明實(shí)驗(yàn)方法可靠。

2.4.5 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量(含人參皂苷Rg10.32%、Re 0.14%、Rb10.35%)的人參藥材(桓仁6年生園參主根)9份，每份0.1 g。每3份為1組，向每組中分別加入低、中、高濃度的混合對(duì)照品溶液，然后按供試品制備項(xiàng)下制備以上樣品。回收率結(jié)果見(jiàn)表2，結(jié)果表明方法可靠。

表2 人參皂苷Rg1、Re、Rb1加樣回收率試驗(yàn)

3 結(jié)果

根據(jù)上述條件，測(cè)定了人參藥材中人參皂苷Rg1、Re、Rb1質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，直觀統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)圖1～4。

表3 不同人參藥材中人參皂苷Rg1、Re、Rb1測(cè)定 (%)

圖1 不同人參蘆頭中含量變化

圖2 不同人參主根中含量變化

圖3 不同人參側(cè)根中人參皂苷含量變化

圖4 不同人參須根中人參皂苷含量變化

4 討論

采用高效液相色譜法對(duì)不同產(chǎn)地、不同年限、不同部位園參和石柱參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量進(jìn)行了測(cè)定，計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行了分析。

人參皂苷Rg1的含量總體上是蘆頭>主根或側(cè)根>須根，并且從測(cè)定結(jié)果中可以看到不同產(chǎn)地人參樣品Rg1的含量差別較大：桓仁園參>寬甸園參和寬甸石柱參。桓仁園參中各部位人參皂苷Rg1的含量呈逐年上升趨勢(shì)，尤其是7年桓仁園參人參皂苷Rg1的含量較高，但寬甸產(chǎn)地的園參及石柱參隨年限增長(zhǎng)其含量變化并不明顯。在只考慮人參皂苷Rg1的提取分離時(shí)，建議優(yōu)先選擇桓仁7年生園參。

人參皂苷Re的含量總體上是須根>蘆頭>主根或側(cè)根，并且不同產(chǎn)地的人參皂苷Re含量差異不明顯。兩個(gè)產(chǎn)地不同年限的各部位人參皂苷Re含量變化不大，所以只是單獨(dú)提取人參皂苷Re可以不考慮年限，即選用低年限的人參樣品進(jìn)行分離提取。

人參皂苷Rb1的含量總體上是須根>蘆頭>側(cè)根>主根，尤其是須根中該皂苷含量與其他部位差異較大。不同產(chǎn)地樣品中人參皂苷Rb1含量差異并不明顯，但寬甸石柱參側(cè)根中人參皂苷Rb1含量呈下降趨勢(shì)。

從總體含量上看，人參須根中人參皂苷含量較高。在人參皂苷的生產(chǎn)中，可以根據(jù)其不同部位、不同產(chǎn)地、不同年限的差異，選擇適宜的提取分離樣品。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：8.

[2] 王榮祥，趙建東，許亮.石柱參的歷史考證[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7(3)：269.

[3] 王賀新.中國(guó)石柱參生長(zhǎng)特征研究[J].遼寧林業(yè)科技，2001(5)：51.

[4] 金建生，趙朝暉，陳曉春.人參皂苷Rg1抗衰老作用可能與改變p16、cyclinD、CDK4 的表達(dá)有關(guān)[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9(1)：29-34.

[5] 趙朝暉，陳曉春，朱元貴.人參皂苷Rg1延緩細(xì)胞衰老過(guò)程中端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性的變化[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2005，21(1)：61-66.

[6] 曹智，張燕娣，許永華，等.人參有效成分及其藥理作用研究新進(jìn)展[J].人參研究，2012(2)：39-43.

DeterminationofGinsenosidesContentinDifferentPartsofCultivatedPanaxginseng

ZHENGXiuxi，F(xiàn)ANGCheng，LIUYongwu，JIABoyu*

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Harbin150040，China)

Objective：To determined the ginsenosides content in different parts of cultivatedPanaxginsengof varied origin，growing years，for the purpose of ginsenoside production.Methods：The content of ginsenosides was determined by HPLC.Results：Rg1was enriched in seven years old cultivated ginseng.The content of Re was related with growing years of ginseng.Rb1was enriched in fibrous.Conclusion：Ginsenosides content varies with ginseng origin，age and parts.This research aims to help promote the ginsenoside extraction efficiency.

Cultivated ginseng；Shizhu Ginseng；ginsenoside；different parts

2015-01-21)

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賈博宇，博士，副研究員，研究方向：中藥抗衰老；E-mail：454734840@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.008