奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定

郭日東　吳曉亮　宋麗華　韓吉雨　魏小軍　李平安　關平原　蘭儒冰

1.內蒙古伊利實業集團股份有限公司奶牛科學研究院，呼和浩特010080；2.內蒙古農業大學，呼和浩特010018

奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定

郭日東1吳曉亮1宋麗華1韓吉雨1魏小軍1李平安2關平原2蘭儒冰1

1.內蒙古伊利實業集團股份有限公司奶牛科學研究院，呼和浩特010080；2.內蒙古農業大學，呼和浩特010018

在1年的時間里，對北方的1個規模化牧場乳房炎病牛連續采集45個樣品，進行分離鑒定，分離到葡萄球菌、大腸桿菌、克雷伯菌和無乳鏈球菌4種乳房炎病原菌，在發病時間分布上有明顯的特點，6-10月期間，大腸桿菌為乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期間，無乳鏈球菌為乳房炎的主要病原菌。

奶牛乳房炎；病原菌；分離鑒定；發病特點

奶牛乳房炎是奶牛乳腺受到物理、化學或微生物等因素刺激所引發的一種炎癥反應，其中病原微生物是引起奶牛乳房炎的主要原因。乳房炎可以使患牛奶產量和質量降低，嚴重的患牛被淘汰或者直接導致其死亡，給奶牛業造成巨大經濟損失。該病是世界范圍內多發的奶牛疾病，其發生范圍廣，發病率高。全球約有奶牛2.2億頭，其中約有1/3患有不同類型的乳房炎。據報道，我國隱性奶牛乳房炎平均發病率為74.5%，臨床奶牛乳房炎的平均發病率為33.41%[1]。

1　材料與方法

1.1病原菌的采樣

選取臨床型乳房炎的奶牛采集乳樣，先用溫水清洗采樣乳頭，再用0.1%新潔爾滅溶液和75%乙醇分別進行消毒，在每次清洗或消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干；棄去采樣乳區的頭3把奶，然后采集乳樣約10mL于滅菌瓶中，加蓋封緊，并作好標記，置于附有冰袋的保溫箱內帶回實驗室進行分離培養及相關檢測。

1.2病原菌分離方法

1）將無菌采集的乳樣充分搖勻，分別劃線接種于普通營養瓊脂培養基、鮮血瓊脂培養基和麥康凱瓊脂培養基，作好標記，置37℃溫箱中培養24h后觀察菌落特征，挑取典型菌落進行涂片，革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察，根據菌體形態、溶血情況及染色特性初步判定細菌類別，并將其進一步純化培養[2]。

2）球菌的鑒定。鏡檢形態符合葡萄球菌特性，在普通營養瓊脂和血液瓊脂平板形成圓形、金黃色、灰白色或檸檬色菌落，且接觸酶試驗、凝固酶試驗和甘露醇發酵試驗陽性的細菌，即鑒定為金黃色葡萄球菌。鏡檢形態符合鏈球菌特性，且接觸酶試驗陰性細菌，即鑒定為鏈球菌屬細菌。若細菌CAMP試驗陽性，不水解七葉苷和馬尿酸鈉，即鑒定為無乳鏈球菌[3]。

3）桿菌的鑒定。革蘭氏陰性桿菌氧化酶試驗陰性，在麥康凱瓊脂平板形成紅色菌落，在伊紅美藍瓊脂平板形成紫黑色帶金屬光澤菌落，在三糖鐵瓊脂平板培養產酸或產氣，不分解尿素，V-P試驗陰性的細菌即鑒定為大腸桿菌[3]。

2　結果與分析

1）分離到葡萄球菌5株，占11.11%，大腸桿菌13株，占28.89%，克雷伯菌3株，占6.67%，無乳鏈球菌24株，占53.33%，與鄧海平等[3]、王鳳等[4]、李娟娟等[5]、范成英等[6]報告的乳房炎病原菌種類基本一致。

2）分離鑒定的4種病原菌引起乳房炎發病，在時間分布上有明顯特點，在6-10月期間，大腸桿菌為乳房炎的主要病原菌，12月至次年4月期間，無乳鏈球菌為乳房炎的主要病原菌。分離病原菌明細如表1。

表1　樣品分離鑒定結果

3　討論

1）大腸桿菌、克雷伯菌是環境性乳房炎的主要致病因素。北方6-10月期間溫暖濕潤，牧場奶牛生活環境中存活大量的大腸桿菌和克雷伯菌，是奶牛乳房炎的主要致病菌，也是主要預防和治療的病原菌種類。

2）葡萄球菌、無乳鏈球菌是傳染性乳房炎的主要致病因素。北方12月至次年4月期間干燥寒冷，牧場奶牛生活環境中大腸桿菌和克雷伯菌大量減少，致病機會減少，乳房寄生菌是主要致病菌，也是主要預防和治療的病原菌種類。

3）藥敏試驗報告指出[4-7]，這4種細菌對氧氟沙星、環丙沙星、恩諾沙星、頭孢類和磺胺甲惡唑/甲氧芐啶敏感，是有效治療乳房炎的首選藥物。

4）在夏秋季節，加強牛體衛生的綜合管理，加強奶牛生活環境的綜合治理和有效消毒，是預防環境性乳房炎的有效方法。在冬春季節，加強傳染性乳房炎病牛的隔離治療，加強奶襯的清洗消毒，認真執行擠奶操作程序和乳頭藥浴，是預防傳染性乳房炎的最佳方法。

5）本次試驗沒有分離到金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌導致的乳房炎，傳染性很強，易產生耐藥性，易復發，一定要徹底隔離治療。若條件有限，建議淘汰、放棄治療，堅持這項措施，可以預防金黃色葡萄球菌型乳房炎。

6）在預防奶牛乳房炎的措施中，保護好乳頭孔很重要，若乳頭孔損壞，不能完全閉合，病原菌很容易侵入乳房導致乳房炎發生；定期進行乳頭評分，定期更換奶襯，及時修復擠奶機的負壓和脈動頻率，不要過度擠奶，可以有效保護乳頭孔。

7）應用優質奶牛干奶藥可以有效預防乳房炎的發生。

8）加強奶牛飼養管理，完善乳房炎管理措施，培育抗病力強的奶牛品種，均衡奶牛營養，提高奶牛疾病抵抗力，可以有效減少乳房炎的發生。

[1]郭銳，苑宇.湖北兩個奶牛場奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥物敏感性分析[A].第五屆全國牛病防制及產業發展大會論文集[C].2013，150-152.

[2]東秀珠，蔡妙英.常見細菌系統鑒定手冊[M].北京：北京科學出版社，2001：132-134.

[3]魏小娟，蒲萬霞，周緒正，等.蘭州地區奶牛乳房炎病原茵的分離鑒定及藥敏試驗[J].動物醫學進展，2007，28（8）：113-114.

[4]鄧海平，俞詩源.內蒙古地區奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗研究[J].安徽農業科學，2009，37（2）：595-596，598.

[5]王鳳，宋立，湯德元，等.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定、血清型及耐藥性研究[J].動物醫學進展，2013，34（6）：62-67.

[6]李娟娟，魏恒，王韋華.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].中國草食動物科學，2013，33（3）：53-54.

[7]范成英，潘鑫龍.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].安徽農學通報，2013，19（18）：119-120.

[8]李娟娟，魏恒，王韋華.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].中國草食動物科學，2013，33（3）：53-54.

2015-05-28

科技部十二五項目“現代奶業發展科技工程”牧區及農牧交錯帶奶牛健康養殖技術集成及產業化示范（2012BAD12B09）郭日東，男，1963年生，高級獸醫師。