MRSA醫院感染危險因素及分子流行病學調查

徐榮　張敏（宜春市人民醫院檢驗科　宜春　336000）

MRSA醫院感染危險因素及分子流行病學調查

徐榮*張敏
（宜春市人民醫院檢驗科宜春336000）

目的：研究醫院獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（HA-MRSA）感染的危險因素和耐藥表型，并利用隨機擴增DNA多態性PCR（RAPD-PCR）對菌株同源性進行分析。方法：以無感染者為對照，比較50例HA-MRSA感染者的年齡、基礎疾病、住院時間、抗菌藥物使用、免疫抑制劑使用和侵入性手術操作等感染相關因素。采用K-B法檢測HA-MRSA的耐藥表型。利用RAPD-PCR對50株HA-MRSA的基因同源性進行分析。結果：2種或7 d以上抗菌藥物使用和住院時間延長（>12 d）是HA-MRSA的危險因素。HA-MRSA依據RAPD可分為Ⅰ～Ⅵ型，以Ⅰ型（40%）和Ⅲ型（26%）為主。RAPD分型相同菌株具有同樣的耐藥表型，Ⅴ型耐藥最為嚴重。結論：為有效預防HA-MRSA感染，臨床要注重合理選用抗菌藥物，降低使用強度，并縮短病人住院時間。RAPD-PCR分型可為HA-MRSA的流行病學監控提供線索。

醫院感染MRSA危險因素隨機擴增DNA多態性

金黃色葡萄球菌抵抗力和致病力都很強，是醫院感染最常見、最重要的病原菌之一。隨著抗菌藥物的廣泛應用，環境選擇壓力下耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）感染率呈逐漸上升趨勢，導致了患者病死率升高、住院期延長和醫療費用增加等問題[1]。因此，必須采取措施控制醫院獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（HA-MRSA）的傳播，指導臨床合理使用抗菌藥物。本研究旨在探討HA-MRSA的易感因素，采用隨機擴增DNA多態性PCR（RAPD-PCR）對我院分離的HAMRSA菌株進行分子流行病學分型，并調查其耐藥表型。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1病例和菌株

收集我院2013年3月至2014年6月間出現的金黃色葡萄球菌醫院感染病例和菌株，以50例HA-MRSA感染患者作為研究組，50例與研究組患者同科室、同期入院、無感染患者作為對照組。HA-MRSA感染患者篩選標準為入院時無感染或細菌培養未分離出金黃色葡萄球菌，2 d后才出現MRSA感染。

1.1.2儀器和試劑

DNA Engine PCR儀購自Bio-Rad公司，凝膠電泳儀和成像系統購自Tanon公司。K-B法藥敏紙片購自杭州天和微生物有限公司，RAPD-PCR引物（5’-GAGAGGCCTCGCAGGCATGACCT-3’）、rTaq酶和DL2000 DNA Marker購自Takara公司。

1.2方法

1.2.1易感因素分析

根據預試驗分析，調查研究組和對照組患者以下7種感染相關因素：①老齡（＞65歲）；②住院時間延長（＞12 d）；③基礎疾病；④2種以上抗菌藥物使用；⑤7 d以上抗菌藥物使用；⑥免疫抑制劑使用；⑦2項以上侵入性手術操作。統計兩組之間計數資料有無顯著性差異，并計算比數比（odds ratio, OR）。統計軟件為SPSS 13.0，方法采用多因素二分類Logistic回歸，選入方程內變量的方法為“Enter”。

1.2.2耐藥表型檢測

參照CLSI 2012年標準，采用K-B法對從50例患者中分離到的50株HA-MRSA菌株的耐藥表型進行檢測，抗菌藥物包括慶大霉素（GEN）、環丙沙星（CIP）、復方新諾明（SXT）、紅霉素（ERY）和克林霉素（CLI）。

1.2.3RAPD分型

通過煮沸法[2]制備DNA模板，參照文獻合成RAPDPCR引物[3]。反應體系（25 ml）：MgCl22.5 mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，引物1.2 mmol/L，rTaq酶2.5 U，DNA模板約125 ng。反應過程：94℃預變性5 min；94℃1 min，36℃1 min，72℃2 min，35個循環；72℃10 min。PCR產物進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統成像。

2　結果

2.1易感因素分析

對研究組和對照組各50例患者的感染相關因素符合率進行二分類Logistic回歸分析（表1）。與對照組患者相比，HA-MRSA感染者的3個易感因素（P<0.05）依OR排序依次為：7 d以上抗菌藥物使用（15）、2種以上抗菌藥物使用（9.8）和住院時間延長（7.5）。

表1　兩組感染相關因素符合率與Logistic回歸分析（例）

2.2耐藥表型檢測

對50株HA-MRSA進行耐藥表型檢測(表 2)，可分為A～D型，以A型和B型為主。A型耐藥譜最窄，C型耐藥譜最廣。HA-MRSA對抗生素的耐藥率從低到高依次為SXT（14%）、CIP（50%）、GEN（54%）、CLI（100%）和ERY（100%）。

2.3 RAPD分型

對50株HA-MRSA進行RAPD分型，48株菌（96%）得出清晰、穩定的譜帶，譜帶如有2條或2條以上條帶不同就認為是不同菌株[4]。48株菌可分為Ⅰ～Ⅵ型（圖1），以Ⅰ型（40%）和Ⅲ型（26%）為主。RAPD分型相同菌株具有相同的耐藥表型，Ⅰ型和Ⅱ型的耐藥表型為A型，Ⅲ型和Ⅳ型的耐藥表型為B型，Ⅴ型和Ⅵ型的耐藥表型則分別為C型和D型（表 3）。

表2　50株HA-MRSA的耐藥表型

圖1　HA-MRSA菌株RAPD分型

表3　RAPD分型與耐藥表型的關系

3　討論

HA-MRSA的感染可能的相關因素過去被認為可能包括年齡、基礎疾病、住院時間延長、不規范使用抗菌藥物、免疫抑制劑的使用和侵入性手術操作等[5]。對本院患者的調查分析顯示，HA-MRSA的易感因素有住院時間延長（＞12 d）、7 d以上抗菌藥物使用和2種以上抗菌藥物使用，其中7 d以上抗菌藥物使用（OR＝15）是最危險因素。數據進一步說明臨床診療中必須依據藥敏試驗謹慎使用抗菌藥物，并盡量縮短患者抗菌藥物使用時間和住院時間。

耐藥表型檢測結果顯示，本院HA-MRSA菌株耐藥表型以A型（46%）和B型（36%）為主，有14%的菌株（C型）對分型用5種藥物都耐藥。可能由于本院藥品采購目錄無SXT，HA-MRSA對SXT的耐藥率較低（＜30%），但使用當中葡萄球菌對其易產生耐藥性，建議臨床在經驗治療HA-MRSA時仍應首選萬古霉素。

葡萄球菌菌株分型方法主要有表型分型和基因分型二類，常用基因分型方法包括脈沖場凝膠電泳分型、RAPD分型、擴增片段長度多態性、多位點測序分型和spa基因分型等，其中RAPD分型因操作簡便和成本低廉而被廣泛應用于局域流行菌株的監測[3,6-10]。本院50株HA-MRSA采用RAPD分型方法可分為Ⅰ～Ⅵ型，RAPD分型相同菌株具有同樣的耐藥表型，說明在流行病學調查方面，其分辨率要高于耐藥表型分型，可為HA-MRSA的流行病學監控提供線索。

[1] Drebes J, Künz M, Pereira CA, et al. MRSA infections: from classical treatment to suicide drugs [J]. Curr Med Chem, 2014, 21(15): 1809-1819.

[2] 黃暉, 安如俊, 周建黨, 等. 移植患者呼吸道金黃色葡萄球菌感染的分子流行病學[J]. 中華醫院感染學雜志, 2008, 18(2): 189-191.

[3] 卞彩云, 路永紅, 周培媚, 等. 178例兒童膿皰瘡皮損中金黃色葡萄球菌藥敏及隨機擴增多態性DNA分析[J]. 中華皮膚科雜志, 2012, 45 (11): 767-770.

[4] 曹晶晶, 王玫, 孔憲璽, 等. 分型方法結合DL MRSA Library數據庫研究MRSA醫院感染[J]. 中華臨床感染病雜志, 2011, 4(2): 96-100.

[5] 黎映靜, 廖九中, 曾茹, 等. 醫院MRSA感染危險因素分析[J]. 臨床和實驗醫學雜志, 2012, 11(13): 1029-1030.

[6] 李鵬, 劉軍輝, 王淑梅. 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的基因多態性分型研究[J]. 西安交通大學學報（醫學版）, 2010, 31(6): 777-781.

[7] Mehraj J, Akmatov MK, Str?mpl J, et al. Methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus nasal carriage in a random sample of non-hospitalized adult population in northern Germany[J]. PLoS One, 2014, 9(9): e107937. doi: 10.1371/journal.pone.0107937.

[8] 呂國平, 李麗婕, 蘆飛, 等. 食源性金黃色葡萄球菌脈沖場凝膠電泳分型分析[J]. 微生物學雜志, 2013, 33(4): 55-59.

[9] 賀文強, 陳宏斌, 趙春紅, 等. 2010—2011年中國10個主要城市金黃色葡萄球菌分子流行病學研究[J]. 中華微生物學與免疫學雜志, 2013, 33(4): 247-251.

[10] Oppliger A, Moreillon P, Charrière N, et al. Antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus strains acquired by pig farmers from pigs[J]. Appl Environ Microbiol, 2012, 78(22): 8010-8014.

Susceptible factors and molecular epidemiological investigation of MRSA nosocomial infection

XU Rong*, ZHANG Min
(Clinical Laboratory, The People’s Hospital of Yichun City, Yichun 336000, China)

Objective: To study the susceptible factors, drug-resistant phenotype and gene homology of hospitalacquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus (HA-MRSA). Methods: Infection-related factors in 50 patients infected with HA-MRSA were investigated and analyzed, and the results were compared with those of the patients without infection. Drugresistant phenotypes of HA-MRSA were determined by K-B method. Gene homology of HA-MRSA was analyzed using RAPDPCR. Results: Use of antibacterial drugs more than 2 kinds or for over 7 days and prolonged hospitalization were the susceptible factors of HA-MRSA. HA-MRSA could be divided into typeⅠ～Ⅵ based on RAPD-PCR. TypeⅠand Ⅲaccounted for 40% and 26%. The isolated strains with same gene homology showed the same drug-resistant phenotype, in which the strains with typeⅤwere the most seriously resistant to the tested antibacterials. Conclusion: Great attention should be paid to the reasonable use of antimicrobial agents, reducing the intensity of their medication, and shortening the time for hospital stay in order to effectively prevent HA-MRSA infection. RAPD-PCR can provide effective technical support for epidemiological surveillance of HA-MRSA.

hospital infection; MRSA; susceptible factor; RAPD

R515.9; R378.11

B

1006-1533(2015)15-0033-03

徐榮（1985-），男，主管技師，從事臨床微生物學研究。E-mail: rong.xunc@aliyun.com

2015-03-23）