淫羊藿多糖含量的測定方法

于紅梅　肖傳剛　褚秀玲等

摘要： 采用苯酚-硫酸法對淫羊藿多糖含量進行測定。結果表明，淫羊藿粗多糖的平均得率為5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量為2 46%。

關鍵詞： 淫羊藿；多糖；測定方法

中圖分類號： R284 2 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）08-0314-02

淫羊藿是小檗科淫羊藿屬多年生草本植物，是我國傳統中藥之一，具有很高的藥用價值，《本草綱目》記載：“莖、葉入藥，辛溫無毒，有堅筋骨、益精氣、補腰膝、強心力等作用 [1]。”淫羊藿的主要有效成分為淫羊藿苷和淫羊藿多糖。有研究發現，多糖能控制細胞分裂和分化，調節細胞的生長與衰老，尤其在抗腫瘤、抗病毒、降血脂、增強免疫功能等方面的作用更明顯 [2-3]。淫羊藿多糖是一種具有發展前景的免疫調節劑，本研究即通過苯酚-硫酸法測定淫羊藿多糖的含量 [4]，為淫羊藿的應用提供有利的理論依據，并為多糖更深入的研究提供部分理論基礎。

1 材料與方法

1 1 儀器和試劑

HH-8恒溫水浴鍋、RE52CS旋轉蒸發儀、B-220恒溫水浴鍋、UV-1800分光光度計、粉碎機、離心機、計時器、電子分析天平等。

淫羊藿干品（購自山東省聊城利民大藥店）、濃硫酸、95%乙醇、苯酚、葡萄糖，均為國產分析純試劑。

1 2 方法

1 2 1 淫羊藿多糖標準曲線的建立

將1 9 g 烘干的分析純葡萄糖溶于1 L重蒸水中，制成1 9 mg/mL標準溶液 [5]；然后取標準溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL分別用重蒸水稀釋到100 mL，制成濃度為19、38、57、76、95、114、133、152 μg/mL的溶液；取各濃度溶液0 6 mL置于干燥的潔凈試管中，加入 50 mg/mL 苯酚溶液1 2 mL，混合均勻，迅速加入5 0 mL濃硫酸，混合均勻，60 ℃水浴加熱30 min，于波長490 nm處測定吸光度 [6]；重蒸水作為空白管對照。以糖濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標制得標準曲線。

1 2 2 粗多糖的提取與純化

將購買來的淫羊藿干品粉碎過40目篩，制成淫羊藿干粉。稱取3份淫羊藿干粉5 00 g，置于250 mL容量瓶中，加入125 mL蒸餾水，浸泡30 min，在90 ℃下提取3次，每次提取2 h，離心，合并濾液，用旋轉蒸發儀將提取液濃縮至30 mL左右，加入95%乙醇，使得含醇量達到70%，靜置過夜，抽濾，室溫恒溫干燥，得到淺棕黃色的淫羊藿粗多糖固體，備用。

1 2 3 粗多糖的得率 將干燥得到的淫羊藿粗多糖稱質量，減去濾紙的質量，計算可得淫羊藿粗多糖的得率。

1 2 4 樣品溶液的制備 稱取0 19 g淫羊藿粗多糖，溶解于100 mL容量瓶中定容，作為樣品液。

1 2 5 精密度試驗 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標準曲線方法操作，測吸光度，重復測定5次 [7-8]。

1 2 6 穩定性試驗 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標準曲線方法操作，每隔30 min測1次吸光度 [7-8]。

1 2 7 重復性試驗 精確吸取同一種樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標準曲線方法操作，測吸光度，重復測定5次 [7-8]。

1 2 8 加樣回收試驗 [7-8] 精確吸取同一種樣品溶液 4 mL，加水至100 mL，精確吸取上述樣品液2 mL，分別加入濃度不同的葡萄糖標準溶液2 mL；再精確吸取上述樣品液 0 6 mL，按照標準曲線方法操作，測吸光度。

1 2 9 樣品的含量測定 精確吸取樣品溶液4 mL，加水至100 mL；再精確吸取上述樣品液0 6 mL，按照標準曲線方法操作，測吸光度。采用苯酚-硫酸法對淫羊藿多糖含量進行測定。

2 結果與分析

2 1 淫羊藿多糖測定方法的建立

通過對不同濃度葡萄糖標準溶液吸光度D的測定，結果顯示不同濃度葡萄糖標準溶液與相應的吸光度D線性關系良好（圖1）。線性方程為y=0 005 7x+0 006 5，r2=0 999，表明葡萄糖濃度在19～152 μg/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2 2 粗多糖的得率

將干燥得到的淫羊藿粗多糖稱質量，減去濾紙的質量，計算可得淫羊藿粗多糖的得率（表1），淫羊藿粗多糖得率的平均值為5 81%。

2 4 穩定性試驗

穩定性試驗結果如表3，樣品1、樣品2、樣品3在150 min內的穩定性RSD分別為0 49%、0 38%、0 44%，即試驗在150 min之內穩定性良好。

3 結論

采用苯酚-硫酸法對淫羊藿多糖含量進行測定，測得淫羊藿粗多糖的平均得率為5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量為2 46%。淫羊藿中的主要成分是淫羊藿苷和淫羊藿多糖，因此，對于淫羊藿多糖含量進行測定是評價其質量的標準之一，為淫羊藿的應用提供更有利的理論依據，同時也為多糖的研究提供部分理論基礎。本試驗采用水提醇沉法提取淫羊藿多糖，該方法簡單、易操作，并對提取的多糖進行醇沉純化，使得結果更準確。通過精密度試驗和加樣回收試驗結果可知，苯酚-硫酸法方法可靠、重復性高、顯色性穩定性較好等，適合作為淫羊藿多糖含量的測定方法。

參考文獻：

[1] 陳 旋，張 翼，張劍波 植物多糖的研究進展[J] 中國新藥雜志，2007，16（13）：1000-1005

[2]郭寶林，羅崇念，肖培根 淫羊藿多糖研究進展[J] 中國中藥雜志，1998，23（7）：52-53

[3]茍春林，張 艷，李 健 寧夏構杞多糖的提取分離與組成[J] 江蘇農業科學，2013，41（6）：246-247

[4]徐曉飛，陳 健 多糖含量測定的研究進展[J] 食品科學，2009，30（21）：443-448

[5]劉寶巖 淫羊藿多糖提取方法的優化[J] 廣西輕工業，2009，25（12）：7-8，23

[6]柳鳳祥，張萬福 淫羊藿多糖的超聲波提取與含量測定研究[J] 山東農業大學學報：自然科學版，2008，39（4）：533-535

[7]胡 濤，黎云祥 四川淫羊藿多糖的含量測定[J] 西華師范大學學報：自然科學版，2006，27（4）：400-402

[8]王 超，張曜武 改良-差示酚硫法的建立及對淫羊藿多糖的含量測定[J] 西北藥學雜志，2011，26（4）：257-259endprint