徐天蔚　王朝霞

·國(guó)家基金研究進(jìn)展綜述·

長(zhǎng)鏈非編碼RNA與胃癌診斷 預(yù)后及耐藥性研究進(jìn)展*

徐天蔚①王朝霞②

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-codingRNA，lncRNA）是一組長(zhǎng)度超過(guò)200bp的非編碼RNA。其缺少完整蛋白編碼功能，具有調(diào)控基因表達(dá)作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA與胃癌的診斷、預(yù)后及耐藥性密切相關(guān)。本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外最新報(bào)道，對(duì)lncRNA在胃癌的診斷，預(yù)后及耐藥性方面的研究進(jìn)展做一綜述。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA胃癌診斷預(yù)后耐藥性

Correspondence to:Zhaoxia WANG;E-mail:zhaoxiawang88@hotmail.com

1Department of Clinical Medicine,the First School of Clinical Medicine of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China;2Department of Oncology,the SecondAffiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210011,China

This work was supported by grants from the National Natural Science Foundation of China(No.81272601),the Key Clinical Research Funds from the Science and Technology Bureau of Jiangsu Province(No.BL2014096),and the Key Medical Talents Foun dation of Jiangsu Province(No.RC2011080)

中國(guó)胃癌發(fā)病率已占惡性腫瘤發(fā)病率第二位，病死率居惡性腫瘤第三位［1］，其發(fā)生發(fā)展的生理學(xué)過(guò)程受多種因素調(diào)控。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-codingRNA，lncRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200nt，缺乏蛋白編碼能力的非編碼RNA（ncRNA），是現(xiàn)今ncRNA的研究熱點(diǎn)。通過(guò)lncRNA微陣列芯片及RT-PCR等方法檢測(cè)分析胃癌組織，發(fā)現(xiàn)多種lncRNAs表達(dá)異常。如在胃癌組織中，lncRNA FER1L4、uc001lsz等基因顯著下調(diào)而H19、HMlincRNA717等顯著上調(diào)，提示了lncRNAs在胃癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要的生物學(xué)作用，并且可能成為胃癌診斷、預(yù)后及耐藥性等方面的生物學(xué)指標(biāo)，為胃癌的治療方法提供新的思路［2-4］。本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外最新報(bào)道，對(duì)lncRNAs在胃癌的診斷、預(yù)后及耐藥性方面的研究進(jìn)展做一綜述。

1　lncRNA與胃癌的診斷價(jià)值

1.1血漿中l(wèi)ncRNAs與胃癌診斷

Arita等［5］探究了血漿lncRNAs的穩(wěn)定性。通過(guò)前置放大法來(lái)確定lncRNA試驗(yàn)的合理性，并分析了胃癌患者和健康對(duì)照血漿中l(wèi)ncRNAs的水平。發(fā)現(xiàn)僅在少數(shù)嚴(yán)苛條件下血漿lncRNA表現(xiàn)最小限度的不穩(wěn)定性。特別是胃癌患者血漿中H19顯著高于對(duì)照組。術(shù)后樣本中血漿H19水平也明顯降低。Shao等［6］使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了335份不同階段的胃癌患者和健康對(duì)照的血漿樣品，發(fā)現(xiàn)胃癌患者血漿中l(wèi)ncRNA AA174084水平在術(shù)后15天對(duì)比術(shù)前明顯減少。其診斷性ROC曲線下面積為0.848。

1.2胃液中l(wèi)ncRNAs與胃癌診斷

Shao等［6］使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了130份不同階段的胃癌患者和健康對(duì)照的胃液樣品發(fā)現(xiàn)胃癌患者胃液中l(wèi)ncRNA AA174084的水平明顯高于正常胃黏膜或是患有最小限度的胃炎、胃潰瘍、萎縮性胃炎的患者。Pang等［7］發(fā)現(xiàn)胃癌患者胃液中LINC00152水平也明顯高于正常對(duì)照，且該結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.3胃癌組織中l(wèi)ncRNAs與胃癌診斷

Liu等［8］探測(cè)得到胃癌組織中對(duì)比癌旁無(wú)瘤組織lncRNA ncRuPAR水平顯著下調(diào)。截?cái)嘀禐?.97時(shí)lncRNA ncRuPAR的ROC曲線下面積為0.84。靈敏度為88.41%，特異度為73.91%。胃癌的預(yù)測(cè)正確率為81.16%。這些結(jié)果顯示了lncRNA ncRuPAR可被認(rèn)為是胃癌診斷的標(biāo)志物。Shao等［9］基于lncRNA陣列的結(jié)果，運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)了313例樣本發(fā)現(xiàn)對(duì)比正常胃黏膜上皮細(xì)胞系，lncRNA HMlincRNA717在多種胃癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯下調(diào)，表達(dá)水平與腫瘤的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移及血管、神經(jīng)的入侵有關(guān)。還發(fā)現(xiàn)lncRNA HMlincRNA717的下調(diào)不僅發(fā)生于胃癌組織，在癌前病變中也存在。Lin等［10］對(duì)比胃癌組織及癌旁正常組織，發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中ABHD11-AS1的表達(dá)明顯上調(diào)，其診斷性ROC曲線下面積為0.613。Pang等［7］使用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了71對(duì)胃癌及癌旁正常組織發(fā)現(xiàn)對(duì)比正常組織LINC00152的表達(dá)明顯增長(zhǎng)。在多種胃癌細(xì)胞系中，LINC00152的水平也各自比胃正常上皮細(xì)胞系顯著上調(diào)。建立ROC曲線以區(qū)分胃癌與良性胃部疾病，其曲線下面積為0.645。Sun等［11］運(yùn)用RT-PCR發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中l(wèi)ncRNA AC096655.1-002的表達(dá)對(duì)比癌旁正常組織明顯下調(diào)。運(yùn)用ROC曲線評(píng)價(jià)其診斷價(jià)值，曲線下面積為0.731。這一結(jié)果顯示在胃癌探測(cè)方面，lncRNA AC096655.1-002的使用相比血漿癌胚蛋白的使用有很大的進(jìn)步，有可能成為胃癌潛在的新的診斷生物學(xué)標(biāo)記。Mei等［12］使用qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照相比，胃癌組織中SUMO1P3表達(dá)上調(diào)，ROC曲線下面積為0.666。SUMO1P3是一種假基因表達(dá)的lncRNA （pseudogene-expressed lncRNA）。這是第一次有報(bào)道顯示假基因表達(dá)的lncRNA SUMO1P3可能成為胃癌早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)。

表1概述了lncRNAs在胃癌中相關(guān)的表達(dá)及診斷性ROC曲線下面積的情況。以上研究表明，胃癌患者血漿、組織、胃液中多種lncRNAs表達(dá)水平的變化具有一定的胃癌診斷學(xué)意義。組織中l(wèi)ncRNAs的研究較全面而血液、胃液相關(guān)的研究卻不足。臨床中血液、胃液相對(duì)于組織獲取更加方便，因此在血液、胃液中的胃癌特異性相關(guān)的lncRNAs變化具有篩查早期胃癌的潛力，而組織中l(wèi)ncRNAs不僅對(duì)于胃癌的確診具有意義，且在癌前病變中相關(guān)lncRNAs的變化也可提示該病變的發(fā)展是否傾向于胃癌，有利于實(shí)施針對(duì)胃癌的第一級(jí)預(yù)防。lncRNAs有望成為胃癌預(yù)防與診斷新的突破口。

表1　胃癌診斷相關(guān)lncRNATable 1　Diagnosis-associated lncRNAs for gastric cancer

2　lncRNA與胃癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后

2.1lncRNA H19與胃癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后

H19基因位于人染色體11p15.5，編碼一個(gè)2.3 kb 的lncRNA，命名為H19。Yang等［13］通過(guò)PCR發(fā)現(xiàn)胃癌組織及細(xì)胞系中H19顯著上調(diào)。使用流式細(xì)胞技術(shù)和RNA免疫沉淀反應(yīng)發(fā)現(xiàn)異常的H19表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞的增殖。干擾H19的表達(dá)可導(dǎo)致AGS細(xì)胞系中的細(xì)胞凋亡增加。進(jìn)一步證實(shí)H19會(huì)引起部分P53的失活。Zhuang等［14］發(fā)現(xiàn)miR-675隨著H19積極表達(dá)，是H19誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞增殖的重要的中介。利用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)及Western blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腫瘤抑制因子RUNX1是miR-675直接作用的靶基因。拯救實(shí)驗(yàn)顯示RUNX1中介H19/miR-675誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變。此外，在胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中也顯示出RUNX1和H19/miR-675表達(dá)的負(fù)相關(guān)。Li等［15］建立了MKN45細(xì)胞系中H19/miR-675敲除模型和SGC7901細(xì)胞系異常表達(dá)模型，結(jié)果顯示H19的過(guò)表達(dá)促進(jìn)了胃癌的惡性轉(zhuǎn)化和侵襲轉(zhuǎn)移。H19的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)鑒定了作為H19的結(jié)合蛋白的ISM1，它的表達(dá)與H19正相關(guān)。CALN1被鑒別為miR-675的靶基因，其表達(dá)與miR-675負(fù)相關(guān)。Li等的結(jié)果顯示胃癌中H19作用既通過(guò)ISM1的直接上調(diào)，也通過(guò)miR-675間接抑制CALN1的表達(dá)。Zhang等［16］發(fā)現(xiàn)對(duì)比癌旁正常組織H19在腫瘤組織中過(guò)表達(dá)。晚期腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分級(jí)與H19表達(dá)的增長(zhǎng)正相關(guān)。體外MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)確認(rèn)H19的表達(dá)影響胃癌細(xì)胞的增殖。Zhang等還發(fā)現(xiàn)外生的c-Myc明顯介導(dǎo)H19的表達(dá)，且在本研究使用的80份樣品中H19的表達(dá)與c-Myc的水平正相關(guān)。其研究揭示了c-Myc介導(dǎo)H19的表達(dá)通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖來(lái)參與胃癌的發(fā)展和進(jìn)程。使用Kaplan-Meier法和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)。高H19表達(dá)與較差的總生存時(shí)間有關(guān)。可以被認(rèn)為是一個(gè)獨(dú)立的胃癌患者總生存時(shí)間的預(yù)測(cè)標(biāo)志。H19可成為潛在胃癌患者預(yù)后的靶點(diǎn)。

2.2lncRNA HOTAIR與胃癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后

HOTAIR定位于12q13.13，是具有反式轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的lncRNA。Hajjari等［17］發(fā)現(xiàn)胃腺癌樣本中對(duì)比正常胃部上皮組織HOTAIR的異常上調(diào)且HOTAIR的異常表達(dá)與胃癌TNM分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Xu等［18］使用RT-PCR來(lái)定量檢測(cè)胃癌患者腫瘤樣本發(fā)現(xiàn)對(duì)比癌旁正常組織，癌組織中HOTAIR的表達(dá)水平上調(diào)，HOTAIR的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有很大關(guān)聯(lián)。隨后調(diào)查了HOTAIR的水平與臨床病理學(xué)因素和預(yù)后的關(guān)系，高表達(dá)的HOTAIR可作為胃癌患者總生存時(shí)間較差的預(yù)測(cè)標(biāo)志。體外，胃癌細(xì)胞中HOTAIR的抑制可減少侵襲與MMP1和MMP3的表達(dá)，而且可以逆轉(zhuǎn)EMT的進(jìn)程。Endo等［19］利用qRT-PCR發(fā)現(xiàn)在散播性胃癌中，對(duì)比低HOTAIR表達(dá)組，高HOTAIR表達(dá)組顯示出更多的神經(jīng)侵襲、頻繁的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和更低的總生存率。利用克隆形成試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞集落的形成能力隨著HOTAIR的上調(diào)而增強(qiáng)。HOTAIR過(guò)表達(dá)或抑制的胃癌細(xì)胞被注射免疫缺陷小鼠的尾靜脈或腹腔發(fā)現(xiàn)小鼠尾靜脈注射后HOTAIR過(guò)表達(dá)的MKN74細(xì)胞系與對(duì)照相比形成了更多的肝臟轉(zhuǎn)移。此外，抑制了HOTAIR表達(dá)的KATOⅢ細(xì)胞系中腹腔擴(kuò)散也被抑制。

Liu等［20］發(fā)現(xiàn)HOTAIR的上調(diào)與腫瘤大小晚期病理學(xué)分級(jí)和廣泛轉(zhuǎn)移有關(guān)，也與胃癌患者更短的生存期相關(guān)。通過(guò)體內(nèi)外的過(guò)表達(dá)和RNA干擾方法發(fā)現(xiàn)HOTAIR的過(guò)表達(dá)提升了細(xì)胞增殖惡化和胃癌細(xì)胞的侵襲。而體內(nèi)外試驗(yàn)中HOTAIR的減少抑制了細(xì)胞侵襲和細(xì)胞活性并誘導(dǎo)生長(zhǎng)阻滯。通過(guò)免疫組織化學(xué)和二變量分析，本課題組認(rèn)定并復(fù)核了HOTAIR/HER2的積極交互作用。HOTAIR可能作為ceRNA，有效降低miR-331-3p的水平，從而調(diào)節(jié)HER2的脫落抑制作用并形成附加的轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)解。最終，HOTAIR/HER2的表達(dá)與晚期胃癌正相關(guān)。HOTAIR的過(guò)表達(dá)代表了胃癌不良預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志，并可能使腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)惡性表型。HOTAIR通過(guò)ceRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與HER2形成正交互作用從而對(duì)胃癌細(xì)胞產(chǎn)生影響。這一過(guò)程有助于更好地理解胃癌發(fā)病機(jī)理以及從IncRNA的層面來(lái)促進(jìn)胃癌的診斷和治療的發(fā)展。

2.3lncRNA MEG3與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后

Maternally expressed gene 3（MEG3）是一個(gè)位于14q32的印記基因，它編碼與不同人類(lèi)腫瘤有關(guān)的一種lncRNA，MEG3在包括胃癌的一系列性腫瘤中被報(bào)道為腫瘤抑制因子。Sun等［21］使用qRT-PCR發(fā)現(xiàn)對(duì)比癌旁正常組織，胃癌組織中MEG3的水平明顯下降。其表達(dá)水平與TNM分級(jí)侵襲深度和腫瘤大小有關(guān)。此外，低MEG3表達(dá)水平的患者預(yù)后相對(duì)較差。而通過(guò)siRNA將MEG3表達(dá)抑制可提升細(xì)胞增殖，MEG3的異常表達(dá)則抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞的凋亡并調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞系中p53的表達(dá)。通過(guò)5-aza-CdR處理，可觀察到MEG3的表達(dá)可被DNA的甲基化調(diào)節(jié)。Sun等的發(fā)現(xiàn)顯示了MEG3的下調(diào)可被認(rèn)為是胃癌預(yù)后不良的生物學(xué)標(biāo)記并且體外調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡。一些研究顯示MEG3的調(diào)節(jié)歸于啟動(dòng)子的甲基化。MiR-148a能夠通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因如DNA methyltransferase 1（DNMT-1）的表達(dá)抑制胃部腫瘤的發(fā)生。Yan等［22］在SGC-7901和BGC-823胃癌細(xì)胞系中進(jìn)一步確定了MEG3和miR-148a的正相關(guān)。通過(guò)methylation-specific PCR鑒定了MEG3甲基化中不同的甲基化區(qū)域，發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞中MEG3的表達(dá)隨著siRNA對(duì)DNMT-1的抑制而增長(zhǎng)。此外，MEG3 siRNA進(jìn)入胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染則削弱了miR-148a過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的細(xì)胞增殖的抑制。結(jié)果顯示胃癌中miR-148a的抑制可通過(guò)調(diào)節(jié)DNMT-1引起MEG3的下調(diào)從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。因此MEG3可能是胃癌發(fā)生發(fā)展中一個(gè)重要的調(diào)節(jié)位點(diǎn)。

2.4其他lncRNA與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后

Zhang等［23］發(fā)現(xiàn)lncRNA ANRIL在人類(lèi)胃癌組織中普遍上調(diào)，lncRNA ANRIL的表達(dá)水平與TNM分期和腫瘤大小正相關(guān)。該課題組也發(fā)現(xiàn)作為生長(zhǎng)調(diào)控因子，lncRNA ANRIL與microRNA有交互作用促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。多因素分析顯示lncRNA ANRIL可作為獨(dú)立的總生存的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Zhao等［24］研究顯示胃癌細(xì)胞系和胃癌組織中l(wèi)ncRNA HULC過(guò)表達(dá)，過(guò)表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、晚期TNM分級(jí)有關(guān)。在SGC7901細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)的lncRNA HULC能促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲，抑制了細(xì)胞凋亡。而敲低lncRNA HULC則顯示相反效應(yīng)。該課題組還發(fā)現(xiàn)lncRNA HULC過(guò)表達(dá)可介導(dǎo)SGC7901細(xì)胞系中自我吞噬模式，自我吞噬模式會(huì)抑制過(guò)表達(dá)HULC細(xì)胞的凋亡的增長(zhǎng)，也發(fā)現(xiàn)了HULC沉默可逆轉(zhuǎn)EMT表型。Wang等［25］發(fā)現(xiàn)MALAT1在多種胃癌細(xì)胞系中異常上調(diào)，拯救性實(shí)驗(yàn)顯示MALAT1部分通過(guò)調(diào)節(jié)SF2/ASF來(lái)促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。Park等［26］采用RNA-seq實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)lncRNA BM742401在胃癌中下調(diào)，異常表達(dá)則抑制轉(zhuǎn)移相關(guān)的表型并減少細(xì)胞外MMP9的濃度，同時(shí)發(fā)現(xiàn)下調(diào)與胃癌患者較差生存期有關(guān)。Yang等［27］發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中CCAT1表達(dá)水平明顯上調(diào)，使用熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)等技術(shù)發(fā)現(xiàn)c-Myc直接結(jié)合于CCAT1啟動(dòng)子區(qū)域E-box元素，使用體外細(xì)胞增殖惡化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的CCAT1提升細(xì)胞增殖和惡化。表明了CCAT1與c-Myc之間的關(guān)聯(lián)，說(shuō)明了CCAT1在胃癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

Liu等［28］通過(guò)qRT-PCR發(fā)現(xiàn)在91.80%的胃癌組織中FER1L4的表達(dá)水平明顯降低，F(xiàn)ER1L4的低表達(dá)水平與腫瘤大小、病理分級(jí)、綜合分類(lèi)、侵襲深度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管或神經(jīng)侵襲和血漿CA72-4有關(guān)。血漿檢測(cè)顯示健康人與術(shù)前胃癌患者FER1L4水平無(wú)區(qū)別，但是術(shù)后兩周后63.9% （53/83）的患者會(huì)有急劇的減少。Xu等［29］發(fā)現(xiàn)胃癌組織中的lncRNA AC130710水平比癌旁正常組織更高。在MGC-803中l(wèi)ncRNA AC130710表達(dá)水平高于正常的胃黏膜細(xì)胞GES-1。其表達(dá)與腫瘤大小，TNM分期和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移有關(guān)。Sun等［30］使用qRT-PCR發(fā)現(xiàn)胃癌組織中GAS5的表達(dá)水平顯著下調(diào)，并且與腫瘤大小和晚期病理學(xué)分級(jí)有關(guān)。通過(guò)hochest染色發(fā)現(xiàn)體內(nèi)外的GAS5異常表達(dá)具有減少細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能，而異常表達(dá)的GAS5的下調(diào)則提升了細(xì)胞的增殖。還發(fā)現(xiàn)GAS5可以部分通過(guò)調(diào)節(jié)E2F1和P21的表達(dá)影響胃癌細(xì)胞的增殖。多變量Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)低GAS5表達(dá)的患者的無(wú)病生存期與總生存期均小于高表達(dá)患者，減少的GAS5是一個(gè)獨(dú)立的胃癌預(yù)后標(biāo)志物。

以上結(jié)果顯示，在胃癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中，不同的lncRNAs表現(xiàn)各異，發(fā)揮作用的機(jī)制也各不相同。同一種lncRNAs也可能有多重機(jī)制共同參與胃癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后過(guò)程。lncRNAs在胃癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中發(fā)揮著重要的作用，但對(duì)于lncRNAs的發(fā)揮作用的復(fù)雜機(jī)制還所知甚少，亟待進(jìn)一步的研究。

3　lncRNA與胃癌的耐藥性

3.1胃癌多耐藥性相關(guān)lncRNAs的發(fā)現(xiàn)

Wang等［31］利用高通量lncRNA芯片比較胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/ADR、SGC7901/VCR與親本細(xì)胞SGC7901lncRNA表達(dá)譜差異發(fā)現(xiàn)，DMTF1v4在兩耐藥細(xì)胞中上調(diào)倍數(shù)最為明顯。通過(guò)差異倍數(shù)、鄰近編碼基因信息分析，phylop物種進(jìn)化保守性評(píng)分，表達(dá)驗(yàn)證等多步篩選策略提示DMTF1v4可能是胃癌耐藥關(guān)鍵lncRNA分子。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)40例原發(fā)胃腺癌組織中DMTF1v4與癌旁正常組織相比的相對(duì)表達(dá)水平，并分為DMTF1v4高表達(dá)組及低表達(dá)組。分別檢測(cè)兩組胃腺癌組織體外組織培養(yǎng)藥物（阿霉素）抑制率，發(fā)現(xiàn)DMTF1v4表達(dá)水平與藥物抑制率呈負(fù)相關(guān)。并且DMTF1v4高表達(dá)組及低表達(dá)組中，DMTF1v4的表達(dá)水平與藥物抑制率呈線性負(fù)相關(guān)。Wang等［32］還發(fā)現(xiàn)在SGC7901/ADR和SGC7901/ VCR這兩種多藥耐藥的胃癌細(xì)胞系中，MRUL （MDR-related and up-regulated lncRNA）基因表達(dá)顯著上調(diào)，在胃癌組織中MRUL的相對(duì)表達(dá)水平與體外用化療藥物治療的胃癌樣本的生長(zhǎng)抑制率呈負(fù)相關(guān)。

3.2lncRNAs在胃癌多耐藥性中的作用機(jī)制

Wang等使用小干擾RNA瞬轉(zhuǎn)的方法下調(diào)DMTF1v4在胃癌耐藥細(xì)胞系中的表達(dá)，通過(guò)MTT檢測(cè)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、藥物半數(shù)致死劑量檢測(cè)等發(fā)現(xiàn)DMTF1v4的下調(diào)增加了胃癌耐藥細(xì)胞系SGC7901/ ADR以及SGC7901/VCR對(duì)P-糖蛋白相關(guān)化療藥物敏感度。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示，下調(diào)DMTF1v4表達(dá)水平導(dǎo)致SGC7901/ADR細(xì)胞與對(duì)照組相比72h后凋亡比例顯著增加。利用阿霉素蓄積潴留實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DMTF1v4表達(dá)水平下調(diào)使胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/ ADR中化療藥物阿霉素蓄積比例增加、外排比例減少。Wang等還構(gòu)建了裸鼠皮下異位胃癌耐藥細(xì)胞移植瘤模型。實(shí)驗(yàn)表明，與對(duì)照組相比，DMTF1v4下調(diào)組腫瘤增殖明顯受抑制。通過(guò)蛋白印記試驗(yàn)等技術(shù)發(fā)現(xiàn)DMTF1v4表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致SGC7901/ADR細(xì)胞P-糖蛋白表達(dá)水平隨之顯著下調(diào)。利用同源重組原理構(gòu)建DMTF1v4分子不同片段，將其插入熒光素酶報(bào)告基因載體pGL4.24中并轉(zhuǎn)染入293細(xì)胞，結(jié)果顯示DMTF1v4對(duì)P-糖蛋白的表達(dá)有增強(qiáng)子樣作用。以上結(jié)果表明，DMTF1v4可能是影響胃癌耐藥性狀的關(guān)鍵lncRNA分子。DMTF1v4通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞膜P-糖蛋白的表達(dá)導(dǎo)致胃癌耐藥細(xì)胞系中P-糖蛋白相關(guān)化療藥物外排增多、攝入減少進(jìn)而對(duì)P-糖蛋白相關(guān)化療藥物產(chǎn)生耐藥。

Wang等［32］發(fā)現(xiàn)在SGC7901/ADR和SGC7901/ VCR中敲除MRUL可使得細(xì)胞凋亡增加和細(xì)胞對(duì)化療藥物攝取增多。MRUL是位于三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCB1（ATP-binding cassette，sub-family B，member 1）下游400 kb的lncRNA。MRUL表達(dá)水平的下調(diào)可降低ACBC1 mRNA的水平。熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)顯示MRUL可能通過(guò)非獨(dú)立的方向位點(diǎn)的方式正面影響ACBC1的表達(dá)，從而影響到胃癌細(xì)胞的多耐藥性。這一研究表明了MRUL在ABCB1表達(dá)的調(diào)節(jié)中有積極作用并且可能成為逆轉(zhuǎn)胃癌多耐藥細(xì)胞系多耐藥表型的新靶點(diǎn)。

以上結(jié)果從轉(zhuǎn)錄水平闡述了lncRNAs對(duì)胃癌的多耐藥性的調(diào)控機(jī)制，說(shuō)明lncRNAs在胃癌多耐藥性表型中也扮演著重要角色，能夠?yàn)槟孓D(zhuǎn)胃癌多耐藥性提供新思路。

4　結(jié)語(yǔ)

lncRNAs與胃癌發(fā)生發(fā)展、診斷、預(yù)后及耐藥性關(guān)系密切。一些lncRNAs研究顯示了其在胃癌研究中的重要地位，可作為胃癌早期診斷的新生物標(biāo)記及防治新靶點(diǎn)。目前有關(guān)胃癌的lncRNAs的研究仍較為片面，不夠深入，處于初級(jí)階段，依然面臨著諸多的問(wèn)題和挑戰(zhàn)。在血漿、胃液中能否發(fā)現(xiàn)特異度更高的可供胃癌篩查使用的lncRNAs？在組織中能否發(fā)現(xiàn)靈敏度更高的可供胃癌確診使用的lncRNAs？哪些lncRNAs的變化有助于臨床醫(yī)生對(duì)胃癌患者病程進(jìn)行更加精確的判斷？針對(duì)特定lncRNAs的分子靶向治療能否有效逆轉(zhuǎn)胃癌多耐藥性表型？這些都是亟待研究的問(wèn)題。lncRNAs與胃癌的相關(guān)研究應(yīng)緊密結(jié)合臨床，注重科研成果從基礎(chǔ)到臨床的轉(zhuǎn)化。相信隨著lncRNAs與胃癌相關(guān)研究的進(jìn)一步深入，能夠使得胃癌的診斷治療取得新的進(jìn)步。

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（2014-08-27收稿）

（2014-10-25修回）

（編輯：賈樹(shù)明）

徐天蔚專業(yè)方向?yàn)槲改c道腫瘤分子生物學(xué)。E-mail：260668028@qq.com

Research progress in lncRNAs and the diagnosis,prognosis,and drug resistance of gastric cancer

Tianwei XU1,Zhaoxia WANG2

Long non-coding RNAs(lncRNAs)are noncoding RNAs with lengths exceeding 200 bp.These lncRNAs cannot code complete proteins but control gene expression.Recent studies have shown that lncRNAs are closely related to the diagnosis,prognosis, and drug resistance of gastric cancer.This article summarizes the recent progress of studies in China and abroad on lncRNAs relative to the diagnosis,prognosis,and drug resistance of gastric cancer.

long non-coding RNA,gastric cancer,diagnosis,prognosis,drug resistance

10.3969/j.issn.1000-8179.20141326

①南京醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系（南京市210029）；②南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科

*本文課題受?chē)?guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：81272601）和江蘇省科技廳臨床醫(yī)學(xué)科技專項(xiàng)基金項(xiàng)目（編號(hào)：BL2014096）和江蘇省醫(yī)學(xué)重點(diǎn)人才基金項(xiàng)目（編號(hào)：RC2011080）資助

王朝霞zhaoxiawang88@hotmail.com