非小細胞肺癌患者術后循環腫瘤細胞的檢測及其意義

趙士偉，楚慧麗，李艷云，陳 雯，畢經旺

肺癌是我國病死率最高的癌癥之一，其發病率呈逐年上升趨勢。非小細胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）患者約占肺癌的85%，且多數患者在疾病進程中出現轉移和復發，嚴重影響患者預后。其中，循環腫瘤細胞（circulating tumor cells，CTCs）的存在與轉移復發有很大相關性，提示在常規的影像學和顯微鏡下診斷的臨床轉移之前可能已有腫瘤微轉移的發生。筆者于2013年10月—2014年4月利用免疫磁珠陰性富集法對35例NSCLC患者術后外周血中CTCs進行檢測，并探討CTCs與臨床分期的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇在筆者所在醫院首次手術治療并經病理確診的肺癌患者35例。男19例，女16例；年齡43～80歲，中位年齡58歲。其中腺癌31例，鱗癌4例。均經根治手術治療，術后原發腫瘤、淋巴結、轉移（Tumor，Node，Metastatis，TNM）分期為Ⅰ期13例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。

1.2 方法 所有研究對象在手術后第1天采用真空采血管采集肘正中靜脈血3.2ml（不含抗凝劑）于ACD抗凝管中。采血后應在48 h內完成所有實驗。采用免疫磁珠富集技術分離CTCs，用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTCs，在熒光顯微鏡下觀察并統計CTCs。判讀標準為DAPI＋（單核），細胞核內FISH信號點＞2個，且無血源性白細胞表面抗原著色，即 CD45－。外周血中 CTCs計數≥2 個／3.2ml定義為CTCs陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0統計學軟件分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各組間的CTCs陽性率比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

35例NSCLC患者術后外周血中CTCs陽性率為28.6%（10／35）。Ⅰ期陽性率為 7.7%（1／13），Ⅱ期為 33.3%（2／6），Ⅲ期為43.8%（7／16）。陽性率Ⅲ期與Ⅰ期相比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）。具體檢測結果見表 1。

表 1 35例NSCLC患者術后外周血中CTCs檢測結果

3 討論

循環腫瘤細胞（CTCs）是指由原發灶或轉移灶脫落入血的腫瘤細胞，由Ashworth于1869年首次提出[1]。絕大部分的CTCs可以由機體自身免疫系統清除，但是極少數的CTCs可以是逃離清除，最后定植在組織器官內從而形成轉移病灶。對于肺癌微轉移患者，僅從影像學無法找到病灶。CTCs對于微轉移的診斷，可以提高肺癌治愈率，改善患者預后。Okumura 等[2]研究表明，在可手術切除的肺癌患者中，96.7%的患者在肺靜脈血中可檢測出CTCs，29.4%的患者可在外周血中檢測出CTCs。

由于CTCs在外周血中數量較少，所以從采集血中分離富集CTCs是進行檢測的關鍵。目前用于循環腫瘤細胞的檢測方法主要有免疫磁珠陽性富集分離法、流式細胞檢測法以及多聚合酶鏈式反應核酸擴增法等[3]。

本研究采用免疫磁珠陰性富集法進行富集，通過去除血漿，裂解紅細胞，利用表面包被磁珠的抗白細胞共同抗原的抗體去除白細胞，從而富集得到稀有細胞，最后在熒光顯微鏡下進行鑒定判讀。本組35例應用上述方法檢測NSCLC患者外周血中CTCs陽性率為28.6%。對于肺癌患者，隨著腫瘤的進展或遠處轉移，CTCs數量明顯增加[4]。存在高水平的CTCs數量提示有遠處轉移的風險更高，因此對于原發性肺癌CTCs水平可作為評判遠處轉移的預后指標[5]。血液中檢出的CTCs數量與腫瘤分期具有明顯的相關性。本文結果也表明，CTCs陽性率與腫瘤TNM分期相關，隨著分期進展，CTCs陽性率也相應增高。因此，外周靜脈血中CTCs的水平應作為臨床分期的一個必要條件，若發現術后患者存在高水平的CTCs，則應采取積極的治療措施。通過檢測CTCs來判斷是否存在復發和轉移，進而重新確定臨床分期、評估預后、并用來指導個體化治療[5，6]。這對于完善NSCLC術后的綜合治療，探討NSCLC術后復發的機制，降低術后腫瘤復發及轉移率，提高生存率具有重要的意義。

[1] Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics，2013[M].CA Cancer J Clin，2013，63（1）：11－30.

[2] Okumura Y，Tanaka F，Yoneda K，et al.Evaluation and prognostic significance of circulating tumor cells in pulmonary venous blood of primary lung cancer patients[J].Ann Thorac Surg，2009，87（6）：1669－1675.

[3] 陳 鵬，李 雷.非小細胞肺癌循環腫瘤細胞檢測進展[J].中國腫瘤臨床，2013，40 （14）：862－865.

[4] Krebs M G，SIoane R，Priest L，et al.Evaluation and prognostic significance of circulating tumor ceIIs in patients with non－smaII－ceII Iung cancer[J].J Clin Oncol，2011，29（12）：1556－1563.

[5] Tanaka F，Yoneda K，Kondo N，et al.Circulating tumor cell as a diagnostic marker in primary lung cancer[J].Clin Cancer Res，2009，15（22）：6980－6986.

[6] Yoon SO，Kim YT，Jung KC，et al.TIF－1 mRNA positive circulating tumor cells in the ，ripheral blood predict poor prognosis in surgically resected non－small cell lung cancer patients[J].Lung Cancer，2011，71（2）：209－216.