參麥注射液對急性心肌梗死大鼠的心肌保護(hù)作用研究*

朱利潔，陳景瑞，龔　博，樊官偉

·實(shí)驗(yàn)研究·

參麥注射液對急性心肌梗死大鼠的心肌保護(hù)作用研究*

朱利潔，陳景瑞，龔博，樊官偉

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津300193）

［目的］研究參麥注射液對心肌梗死大鼠的心肌保護(hù)作用。［方法］采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支制備大鼠心肌梗死模型。利用超聲心動(dòng)和血流多普勒分析進(jìn)行心功能的評價(jià)；生化分析測定血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的水平；并結(jié)合蘇木精-伊紅（HE）染色病理學(xué)分析，綜合評價(jià)參麥注射液心肌梗死的保護(hù)作用。［結(jié)果］參麥注射液能顯著改善心肌梗死后左室心功能和心臟供血功能，降低血清CK、CK-MB、LDH和MDA水平，增加SOD活力，同時(shí)，降低心肌組織病變程度，包括減少炎性浸潤，減少心肌纖維化。［結(jié)論］綜合評價(jià)參麥注射液對心肌梗死大鼠的心肌有保護(hù)作用。

參麥注射液；心肌梗死；心肌保護(hù)

急性心肌梗死（AMI）是一種嚴(yán)重危害人們健康的急性危重病，具有發(fā)病率高、病情進(jìn)展快、病死率高、預(yù)后差等特點(diǎn)，是危害人類身體健康最主要的疾病之一。參麥注射液（SMI）具有益氣固脫、養(yǎng)陰生津、生脈之功效，在心血管系統(tǒng)疾病方面有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支構(gòu)建大鼠心肌梗死模型，觀察大鼠超聲心動(dòng)、多普勒血流、血清酶學(xué)和組織形態(tài)學(xué)的變化，探討參麥注射液對心肌梗死模型大鼠的心肌保護(hù)作用。

1　材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級雄性SD大鼠，體質(zhì)量（210± 10）g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2009-0004。

1.2藥物SMI：正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1107201；纈沙坦（Val）：北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X1539。

1.3試劑肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CKMB）、乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）試劑盒均購自南京建成生物制品研究所。

1.4主要儀器Vevo2100TM超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)（加拿大Visual Sonics公司），7020全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司），EnSpire多功能酶標(biāo)儀（美國PerkinElmer公司），普通光學(xué)顯微鏡及顯微照相機(jī)（Olympus公司），臺(tái)式離心機(jī)（德國Thermo Fisher公司）。

2　方法

2.1分組給藥及模型制備取體質(zhì)量（210±10）g雄性SD大鼠，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支構(gòu)建大鼠心肌梗死模型，以術(shù)后24 h射血分?jǐn)?shù)，在38%～50%范圍內(nèi)為造模成功，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為假手術(shù)組（只穿線不結(jié)扎，Sham）、模型組（Model）、Val組及SMI組，每組6只。Val組按10 mg/kg灌胃給藥，SMI組按 0.38 mL/kg肌肉注射給藥，Sham組和Model組大鼠灌胃予以等容積生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥7d后取材。

2.2超聲心動(dòng)和血流多普勒評價(jià)末次給藥后1 h，以10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉大鼠進(jìn)行心臟超聲評價(jià)。考察舒張末期及收縮末期前壁厚度（LVAW；d、LVAW；s）、舒張末期及收縮末期左室內(nèi)徑（LVID；d、LVID；s）、左室質(zhì)量（LVmass）、左室舒張和收縮容積（LVvol；d、LVvol；s）、左室射血分?jǐn)?shù)（EF，%）和左室短軸縮短率（FS，%）。流出道峰速（AV Peak V Velocity，mm/s）、流出道峰壓［AV Peak Pressure，mmHg（1 mmHg≈0.133 kPa，下同）］、流出道平均速度（Mean Vel，mm/s）、流出道平均流速壓差（MeanGrad，mmHg）。2.3血清指標(biāo)測定分別在術(shù)后24 h和48 h眼內(nèi)眥取血37℃靜置后3 500 r/min離心10 min，取上清液，-80℃保存用于血清CK、LDH、CK-MB的測定。大鼠末次給藥超聲后腹主動(dòng)脈取血，37℃靜置后3 500 r/min離心10 min，取上清，-80℃保存用于血清SOD、MDA的測定。

2.4心肌組織形態(tài)學(xué)改變各組大鼠的心臟于10%甲醛溶液中固定，在靠近心尖部1/3處平行于房室溝橫行切取3 mm厚度心臟組織塊，常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋后做5 μm切片，攤片、烘片、60℃烤片過夜后室溫放置自然干燥后進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠心肌組織病理形態(tài)變化。

2.5統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett’s T3法，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3　結(jié)果

3.1SMI對心肌梗死后心肌酶的影響大鼠在心肌梗死后24 h心肌酶的改變表現(xiàn)為CK、CM-MB和LDH的含量的顯著升高（見圖1）。梗死后48 h后，Model組大鼠血液中的心肌酶含量依然很高，但Val和SMI組的大鼠血液中的心肌酶含量顯著降低（見圖2），顯示在心肌梗死急性期SMI能夠降低心肌梗死后大鼠體內(nèi)心肌酶含量，可能起到保護(hù)心肌的作用。

3.2SMI對心肌梗死大鼠心功能的影響大鼠在心肌梗死后24 h，Model組與Sham組大鼠相比，心功能顯著降低（見表1）。給藥7 d后，SMI組與Model組相比，心功能明顯改善，其中EF值和FS值顯著提高 ［EF：（57.05±6.28）vs（37.81±15.15）；FS:（30.80±4.18）vs（18.93±7.96）］，LVvol；s和LVvol；d也明顯改善［LVvol；s：（95.78±25.83）vs（171.04±138.69）；LVvol；d：（220.57±38.66）vs（251.06±156.85）］，結(jié)果顯示SMI顯著的改善了左室的舒張和收縮功能，具有心肌保護(hù)的作用。見表1-2。

3.3SMI對心臟血流動(dòng)力學(xué)的影響心梗后7 d，Model組與Sham組相比，心臟流出道Mean Vel值、Mean Grad值、Peak Vel值和Peak Grad值顯著降低［MeanVel：（412.61±79.42）vs（659.72±95.84）；Mean Grad：（0.70±0.23）vs（1.77±0.53）；Peak Vel：（721.92±135.14）vs（1 171.25±163.90）；Peak Grad：（2.15±0.68）vs（5.58± 1.62）］；SMI給藥后與Model組相比心臟供血功能顯著提高，［MeanVel：（533.80±58.01）vs（0.70±0.23）；Mean Grad：（1.15±0.25）vs（412.61±79.42）；Peak Vel：（933.70 ±92.33）vs（721.92±135.14）；Peak Grad：（3.52±0.70）vs（2.15±0.68）］。結(jié)果顯示SMI有改善心梗大鼠心肌供血功能。見表3。

圖1　SMI對大鼠心肌梗死后24 h血清CK、CK-MB、LDH水平的影響（n=6）Fig.1　The effects of SMI on the level of serum CK，CK-MB，LDH in rats with myocardial infarction after 24 h（n=6）

圖2　SMI對大鼠心肌梗死后48 h血清CK、CK-MB、LDH水平的影響（n=6）Fig.2　The effects of SMI on the level of serum CK，CK-MB，LDH in rats with myocardial infarction after 48 h（n=6）

表1　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后24 h心功能的影響Tab.1　The effect of SMI on the cardiac function in rats with myocardial infarction after 24 h

注：與Sham組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

指標(biāo)Sham組Model組Val組SMI組n 6 6 6 6 EF（%）　FS（%）　LVID；s（mm）　LVID；d（mm）　LVmass（mg）　LVvol；d（mm3）　LVvol；s（mm3）76.80±11.40**　47.46±12.03*　2.88±0.72**　5.48±0.48　363.48±069.58　147.53±032.06　034.51±18.80 47.10±08.89**　24.22±05.07*　4.72±1.25**　6.18±1.31　422.43±168.07　202.39±100.04　070.35±70.14 45.32±06.87**　23.01±03.98*　4.54±0.80**　5.87±0.83　421.13±76.42　175.10±059.10　097.71±41.29 43.69±05.28**　22.07±03.13*　4.74±0.58**　6.08±0.72　448.38±86.38　188.32±051.55　106.14±29.91

表2　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后7 d心功能的影響Tab.2　The effect of SMI on the cardiac function in rat with myocardial infarction after 7 d

表2　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后7 d心功能的影響Tab.2　The effect of SMI on the cardiac function in rat with myocardial infarction after 7 d

注：與Sham組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與Model組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

指標(biāo)Sham組Model組Val組SMI組n　6 6 6 6 LVvol；d（mm3）77.57±08.32**47.76±9.94　1.60±0.14　5.52±0.42 2.90±0.64 149.46±027.02 37.81±15.15**18.93±7.96**1.21±0.36*6.64±2.07 5.47±2.11 251.06±156.85 55.77±11.27##30.07±7.63#　1.46±0.10#6.12±0.76 4.32±0.93 191.62±051.96 57.05±06.28##30.80±4.18#　1.58±0.24#6.54±0.51 4.54±0.54 220.57±038.66 EF（%）FS（%）LVAWs（mm）LVID；d（mm）LVID；s（mm）LVvol；s（mm3）034.23±014.71 171.04±138.69 088.62±042.51 095.78±025.83 SimpFAC（%）34.48±05.83 12.53±04.79 64.25±10.71 65.10±17.36 50.93±19.50 23.79±11.00 52.33±10.45 31.52±09.78 39.92±11.69 58.50±12.69 32.44±10.18 44.85±08.87 SimpAreaMid；d（mm2）SimpAreaMid；s（mm2）

表3　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后7 d心臟流出道血流的影響Tab.3　The effect of SMI on the cardiac outflow tract in rat with myocardial infarction after 7 days

表3　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后7 d心臟流出道血流的影響Tab.3　The effect of SMI on the cardiac outflow tract in rat with myocardial infarction after 7 days

注：與Sham組比較，**P＜0.01；與Model組比較，#P＜0.05。

指標(biāo)Sham組Model組Val組SMI組n　6 6 6 6 AV Peak Pressure（mmHg）51.70±12.36**　659.72±95.84**　1.77±0.53**　1 171.25±163.90c*　5.58±1.62**　1 232.37±125.94**　6.13±1.2900 28.89±08.44**　412.61±79.42**　0.70±0.23**　0 721.92±135.14**　2.15±0.68**　0 783.94±173.52**　2.56±0.96** 39.10±06.97**　525.98±93.67#*　1.14±0.40**　0 927.45±165.73#*　3.53±1.25#*　0956.92±115.98#*　3.71±0.9400 41.59±04.17#*　533.80±58.01#*　1.15±0.25#*　0 933.70±092.33#*　3.52±0.70#*　978.45±93.99#*　3.86±0.77#0 AoV VTI VTI　AoV VTI Mean Vel（mm/s）AoV VTI Mean Grad（mmHg）AoV VTI Peak Vel（mm/s）AoV VTI Peak Grad（mmHg）AV Peak V Velocity（mm/s）

3.4SMI通過抗氧化保護(hù)心肌組織在心肌受損后產(chǎn)生大量自由基，大鼠心肌梗死后7 d，Model組與Sham組相比，SOD活力顯著降低，MDA含量升高；SMI給藥組與Model組相比，SOD活力有所升高，MDA含量有所降低。研究表明，SMI通過抗氧化保護(hù)心肌組織（見圖3）。

3.5SMI對心肌梗死大鼠炎癥的影響心肌梗死后炎性因子釋放，炎性反應(yīng)在心肌梗死范圍的擴(kuò)展中具有重要作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示假手術(shù)組大鼠術(shù)后7 d心肌細(xì)胞排列整齊，致密，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞外間質(zhì)較少（圖4A），而Model組在梗死相關(guān)區(qū)可見大量中性粒細(xì)胞浸潤（圖4B），并可見心肌纖維斷裂、心肌細(xì)胞壞死（圖4B）。Val和SMI給藥組顯著的改善了炎癥反應(yīng)（圖4B、C、D），具有抑制炎癥反應(yīng)的作用，從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。

4　討論

自Desimone等首次運(yùn)用超聲技術(shù)檢測大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能以來［1］，不斷有報(bào)道證實(shí)，超聲心動(dòng)圖已成為評價(jià)心功能的常用手段［2］。其不僅能準(zhǔn)確反映大鼠左心室收縮舒張功能的改變，而且也能動(dòng)態(tài)觀察左心室結(jié)構(gòu)的變化，具有無創(chuàng)、操作方便、可多次重復(fù)的特點(diǎn)［3-4］。超聲心動(dòng)圖聲像改變最初表現(xiàn)為冠狀動(dòng)脈病變部位室壁運(yùn)動(dòng)異常，該異常可在心肌壞死后幾秒鐘中內(nèi)出現(xiàn)，是超聲檢查診斷心肌梗死的關(guān)鍵依據(jù)［5］。AMI后心肌損傷程度不同，心臟各部位舒縮不協(xié)調(diào)，負(fù)荷狀態(tài)的改變通常能夠造成室壁應(yīng)力的不均一性即異質(zhì)性增高，必將降低心室的收縮功能，導(dǎo)致心輸出量下降，左室舒張末壓升高，整體的心室擴(kuò)張和扭曲，進(jìn)一步影響心臟的舒張和收縮功能，加重血流動(dòng)力學(xué)障礙［6］。有研究顯示急性心肌梗死患者超聲心動(dòng)圖檢出左室壁運(yùn)動(dòng)異常達(dá)89%～100%［7］。急性心肌梗死患者冠狀動(dòng)脈血流減速時(shí)間顯著降低［8］。心室肥厚主要是指非梗死心肌增厚、拉長。為應(yīng)對血流動(dòng)力學(xué)超負(fù)荷反應(yīng)，盡可能維持心臟功能接近正常，非梗死心肌必須代償無收縮區(qū)心肌的功能，收縮期室壁應(yīng)力的急劇增加誘發(fā)心肌細(xì)胞增粗而使室壁變厚，舒張期室內(nèi)壓增高導(dǎo)致心肌細(xì)胞長度增加而使心腔容積增大，心腔半徑增大又使收縮期室壁應(yīng)力增大。大鼠心肌梗死7 d后，心臟左室前壁變薄，并且都表現(xiàn)出心肌收縮活動(dòng)減弱，心臟流出道血流流速減小，與Sham組有明顯差異，EF、FS顯著降低。而給予SMI后心肌收縮活動(dòng)明顯增強(qiáng)，不同程度的改善了大鼠心功能。

圖3　SMI對大鼠心肌梗死后7 d體內(nèi)SOD活力和MDA含量變化的影響（n=6）Fig.3　The effect of SMI on the activity of SOD and the contents of MDA in rats with myocardial infarction after 7 days（n=6）

圖4　SMI對心肌梗死大鼠術(shù)后7 d心肌組織病理學(xué)的影響（HE，×200）Fig.4　The effect of SMI on the myocardial tissue pathology in rats with myocardial infarction after 7 days（HE，×200）

同時(shí)，通過結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支建立心肌梗死模型［9-10］。冠狀動(dòng)脈的血流急劇減少或中斷，使相應(yīng)的心肌出現(xiàn)嚴(yán)重而持久地急性缺血，最終導(dǎo)致心肌的缺血性壞死。當(dāng)心肌受損后，血清CK、LDH活性明顯升高，代表細(xì)胞損傷的開始，同時(shí)活性氧（ROS）產(chǎn)生增多，觸發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)又加重心肌細(xì)胞損傷［11］。故常通過檢測血清心肌酶CK、LDH的含量來判斷心肌受損情況［12-13］。SOD活性和MDA含量可以反映體內(nèi)氧自由基代謝水平，同時(shí)也可以作為判斷心功能及心肌受損程度的指標(biāo)［14］。通過降低CK、LDH等心肌酶，可減少心肌細(xì)胞受損、保護(hù)細(xì)胞膜的完整性以及減少炎癥細(xì)胞的浸潤。通過對SOD、MDA活性的影響，提示SMI可能干預(yù)自由基的產(chǎn)生并增強(qiáng)自由基清除劑的功能，具有一定抗氧化作用。AMI后通過機(jī)械應(yīng)力、外源性應(yīng)激（包括缺血刺激）、反應(yīng)性活性氧、細(xì)胞因子的自我放大途徑等機(jī)制短期內(nèi)機(jī)體即產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子［15］。長期持續(xù)高濃度炎性細(xì)胞因子通過多種途徑介導(dǎo)心肌肥大，最終引起心臟擴(kuò)大、炎癥細(xì)胞浸潤以及間質(zhì)明顯纖維化［16］。心肌組織的結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)，可通過局部血管新生和側(cè)支循環(huán)的建立，以有利于改善局部的缺血狀態(tài)。通過HE染色發(fā)現(xiàn)SMI具有減少炎癥細(xì)胞浸潤、抑制細(xì)胞間質(zhì)纖維化和促進(jìn)毛細(xì)血管新生的作用。綜上所述，SMI對心肌梗死大鼠心肌有一定的保護(hù)作用。

［1］d Desimone G，Wallerson DC，Volpe M，et al.Echocardiograic measurement of left ventricular mass and volumein normotensive and hypertensie rats necropsy validation［J］.Am J Hypertension，1990，3（9）:688-696.

［2］王小平，寧曉然，王進(jìn)華，等.高頻超聲心動(dòng)圖在異丙腎上腺素誘發(fā)大鼠心功能改變實(shí)驗(yàn)研究中的作用［J］.中國醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2007，15（4）:247-250.

［3］ Kanno S，Lerner DL，Schuessler RB，et al.Echocardiographic evaluation of ventricular remodeling in a mouse model of myocardialinfarction［J］.J Am Soc Echocardiogr，2002，15（6）:601-609.

［4］Nagueh SF，Appleton CP，Gillebert TC，et al.Recommendations for theevaluationofleftventriculardiastolicfunctionby echocardiography［J］.Soc Echocardiogr，2009，22（2）:107-133.

［5］游輝中.急性心肌梗死63例超聲心動(dòng)圖的分析［J］.實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2006，7（3）：32.

［6］趙鵬，朱興雷.急性心肌梗死與左室重構(gòu)［J］.國際內(nèi)科學(xué)雜志，2007，34（1）:17-20.

［7］齊欣.心肌梗死的超聲心動(dòng)圖診斷［J］.臨床心電學(xué)雜志，2012，20（3）：179-181.

［8］陳建輝，陳婭萍.經(jīng)胸彩色多普勒超聲心動(dòng)圖在診斷超急性期心肌梗死中的效果評價(jià)［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2014，9（18）:35-36.

［9］邸若岷，許澎，楊中洲，等.小鼠急性心肌梗死模型建立及左心室重構(gòu)評價(jià)［J］.江蘇醫(yī)藥，2014，40（13）：1498-1500.

［10］張萌，高秀梅，王怡，等.丹酚酸B/三七總皂苷配伍對心肌梗死大鼠左室結(jié)構(gòu)和功能的影響［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（3）：140-142.

［11］謝艷華，王四旺，孫紀(jì)元，等.川參膠囊對結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2007，5（9）: 842-844.

［12］楊庭樹.冠心病實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)［M］.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2002: 275-291.

［13］江一清，劉朝中，朱國英.現(xiàn)代冠心病學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2003:192-194.

［14］高秀梅，王怡，商洪才，等.復(fù)方丹參方抗大鼠心肌缺血作用研究［J］.天津中醫(yī)藥，2003，20（1）:23-25.

［15］鄭歡，羅明.炎性細(xì)胞因子與急性心肌梗死后心室重構(gòu)的關(guān)系［J］.心血管病學(xué)進(jìn)展，2007，28（2）:208-211.

［16］杜武勛，肖學(xué)鳳，朱明丹，等.心肌梗塞后壞死區(qū)炎癥，損傷，修復(fù)與三七總皂苷的治療研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21（10）: 2560.

（本文編輯：馬英，高杉）

Myocardial protection of Shenmai injection on acute myocardial infarction in rats

ZHU Li-jie，CHEN Jing-rui，GONG Bo，F(xiàn)AN Guan-wei
（Research Institute of Chinese Medicine，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To study the protective effect of Shenmai injection on myocardial infarction of rats.［Methods］Construction of rat myocardial infarction model using coronary artery ligation.Detected by echocardiography and Doppler blood flow，determination of serum creatine kinase（CK），creatine kinase（CK-MB），lactate dehydrogenase（LDH），superoxide dismutase（SOD）and malondialdehyde（MDA）activity change；combined with HE staining Pathological analysis，comprehensive evaluation of the protective effect of Shenmai injection on myocardial infarction.［Results］Shenmai injection can significantly improve left ventricular function and cardiac blood supply function after myocardial infarction，reducing myocardial tissue lesions，including the reduction of inflammatory infiltration，reduction of myocardial fibrosis，and reduce CK，LDH，MDA levels，increase the activity of SOD.［Conclusion］Shenmai injection has a protective effect on myocardial infarction of rats.

Shenmai injection；myocardial infarction；myocardial protection

R542.22

A

1672-1519（2015）06-0347-05

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.06.08

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）資助項(xiàng)目（2012CB518404）。

朱利潔（1990-），女，碩士在讀，研究方向?yàn)樾难芩幚怼?/p>

樊官偉，E-mail：fgw1005@hotmail.com。

（2015-01-11）