RP-HPLC法測定暴馬丁香中齊墩果酸的含量

王　化，李夢莎，朱良玉，周麗萍

RP-HPLC法測定暴馬丁香中齊墩果酸的含量

王化，李夢莎，朱良玉，周麗萍

（黑龍江省科學院自然與生態研究所，哈爾濱 150040）

建立反相高效液相色譜法測定暴馬丁香中齊墩果酸含量的方法。采用Waters C18色譜柱，流動相為甲醇-0.5%磷酸水溶液（82∶18），流速為1.0 mL/min，檢測波長為205 nm。齊墩果酸進樣濃度在0.01～1.0 mg/mL線性關系良好（R2=0.9998）；平均回收率為101.3%（RSD=1.7%）。本法準確、可靠，靈敏度高，可作為暴馬丁香中齊墩果酸的定量分析方法。

暴馬丁香；齊墩果酸；高效液相色譜法

暴馬丁香（Syringa reticulata），木犀科，丁香屬，溫性樹種，適應性強，栽培歷史悠久。在我國境內主要分布于黑龍江省東部山區和小興安嶺地區，吉林省東部山區和遼寧省丹東、寬甸、鳳城等地［1］。暴馬丁香不僅具有美化環境的作用，還具有良好的藥用價值，全株可入藥［2］。從暴馬丁香枝葉中共分離出40余種成分，主要有紫丁香苷、橄欖苦苷、齊墩果酸、山奈酚、槲皮素等［3-4］，經現代藥理學實驗已證明：暴馬丁香有清肺、祛痰、平喘、止咳、消炎、利尿等功效［5］，以其為原料生產的芩暴紅止咳片、膠囊對治療急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發作、感冒咳嗽等癥均具有較好療效［6］。在抗菌、保肝和抗氧化等方面，暴馬丁香也表現出較好的活性［7］。因此，研究及分析暴馬丁香中的活性物質對暴馬丁香的基礎研究和開發應用具有重要意義。

齊墩果酸（Oleanolic acid）屬五環三萜類化合物，有護肝降酶、抗菌、抗腫瘤、強心利尿等藥理作用，用于急、慢性肝炎輔助治療［8-9］。齊墩果酸結構復雜，不易人工合成，因此主要從植物中提取得到。雖然齊墩果酸是暴馬丁香的重要活性成分之一，但暴馬丁香中齊墩果酸的含量測定未見文獻報道。本文采用RP-HPLC法對暴馬丁香中齊墩果酸的含量進行了方法學研究，為進一步開發、利用暴馬丁香資源提供了科學依據。

1　儀器與試藥

Waters e2695-2998液相檢測系統；齊墩果酸對照品（≥98%）購自天津一方科技有限公司；2014年5月采集暴馬丁香枝條、葉片樣品于60℃烘干至恒重，粉碎，過篩40目，于陰暗干燥處儲存、備用；甲醇（色譜純），無水乙醇（分析純），超純水自制。

2　方法與結果

2.1溶液的配制

2.1.1對照品溶液

精密稱定齊墩果酸對照品，加70%乙醇制成齊墩果酸濃度為1mg/mL的溶液作為對照品儲備液。

2.1.2供試品溶液

暴馬丁香原料粉碎，過40目篩，稱取細粉1.00g，置于燒杯中，加入70%乙醇20mL，放入超聲波提取器中提取1.0h，過濾，取濾液為供試品溶液。

2.2色譜條件

色譜柱為WatersC18（150mm×4.6mm，5μm）柱；流動相為甲醇-0.5%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL/min；檢測波長為205nm；進樣量為10μL。色譜圖見圖1。

圖1　對照品（A）及樣品（B）HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms ofreference substance（A）and sample（B）

2.3線性關系試驗

精密量取對照品的儲備液，加入濃度為70%的乙醇，配制濃度為0.01mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL的對照品溶液，以齊墩果酸濃度（mg/mL）為橫坐標（X），以HPLC檢測峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=6 437 809.91X-42 429.80，R2=0.999 8。結果表明：齊墩果酸濃度在0.01～1.0 mg/mL線性關系良好（如圖2所示）。

圖2　齊墩果酸標準曲線Fig.2 Standard curve of oleanolic acid

2.4精密度試驗

對照品溶液6次重復進樣，每次進樣體積10μL，記錄峰齊墩果酸面積數值。求得其峰面積的RSD為0.2%，表明精密度良好。

2.5重復性試驗

取暴馬丁香細粉，按“2.1.2”項所述方法操作，制備6份平行供試品溶液，按上述色譜條件分別測定，結果齊墩果酸含量的平均值 （n=6）為0.24%，RSD為3.2%，表明重復性良好。

2.6穩定性試驗

取新制同一供試品溶液，于室溫下放置，在0h、2h、4h、6h、8h、12h分別進樣10μL，記錄齊墩果酸峰面積，計算得到其峰面積的RSD為0.3%，表明供試品溶液在12h內穩定性良好。

2.7回收率試驗

取已知齊墩果酸含量 （0.24%）的暴馬丁香細粉約0.1g，共6份，精密稱定后，分別加入濃度為0.5mg/mL齊墩果酸對照品2mL，制備所需溶液，每個溶液進樣量10μL，記錄齊墩果酸峰面積，計算得到平均回收率（n=6）為101.3%（RSD=1.7%），表明本方法準確性較好。

2.8樣品測定

分別稱取暴馬丁香枝條、葉片樣品粉末，按照“2.1.2”項方法制備供試樣品溶液，按“2.2”項色譜條件進行測定，每個樣品重復3次。記錄樣品峰面積，計算齊墩果酸含量，結果見于表1中。

表1　樣品測定結果Tab.1　Results of sample determination

3　討論

第一，試驗所采用色譜條件的線性關系、重復性、穩定性、加樣回收率良好，方法可行。

第二，試驗所采用色譜條件檢測靈敏度高，峰形對稱，且在20 min內可對所有色譜峰檢測完畢，說明該方法靈敏度高、節省時間及溶劑使用量。

第三，試驗結果表明：暴馬丁香枝條中齊墩果酸的含量高于葉片中含量，在工業生產中，基于提高生產效率原則，可更多的考慮以暴馬丁香枝條作為原料。關于暴馬丁香枝條中齊墩果酸含量的時空動態變化比較還在進一步的研究中。

［1］崔洪霞，蔣高明，臧淑英.丁香屬植物的地理分布及其起源演化［J］.植物研究，2004，24（2）：141-145.

［2］蔡恩博.長白山暴馬丁香樹皮化學成分及藥理活性的研究［D］.長春：吉林農業大學，2012.

［3］ 徐國興.長白山暴馬丁香枝化學成分的研究［D］.長春：吉林大學，2003.

［4］ 宋光西，馬玲云，魏鋒，等.暴馬子皮化學成分研究［J］.中國藥學雜志，2012，47（24）:1979-1982.

［5］蔡恩博，張崇禧，朱啟光，等.星點設計-效應面法優選暴馬丁香樹皮中紫丁香苷的提取工藝［J］.藥物分析雜志，2011，31（9）：1808-1811.

［6］ 李輝.芩暴紅膠囊質量評價及用3D-HPLC譜鑒別中藥的研究［D］.沈陽：沈陽藥科大學，2002.

［7］ 張崇禧，蔡恩博，陳艷，等.暴馬丁香抑菌活性、抗氧化作用研究及微量元素的測定［J］.食品科學，2010，31（7）：131-134.

［8］ 唐初，陳玉，柏舜，等.齊墩果酸的結構修飾與生物活性研究進展［J］.有機化學，2013，（33）：46-65.

［9］ 張蜀艷，李政.齊墩果酸研究進展［J］.食品與發酵科技，2010，46（4）：20-24.

RP-HPLC determination of oleanolic acid in Syringa reticulata

WANGHua，LI Meng-sha，ZHULiang-yu，ZHOULi-ping
（Institute ofNatural Resources and Ecology，HeilongjiangAcademyofSciences，Harbin 150040，China）

This paper aims to develop a RP-HPLC method for the determination of oleanolic acid in Syringa reticulate.A Waters C18 column was adopted.The mobile phase was a mixture of methanol-0.5%phosphoric acid solution（82:18）.The flow rate was 1.0 mL/min，UV detection wave length was at 205nm.A good linearity was obtained in the range of 0.01-1.0 mg/mL for oleanolic acid.The average recoveries was 101.3%（RSD=1.7%）.This method is simple，accurate，sensitive and suitable for the determination ofoleanolic acid in Syringa reticulate.

Syringa reticulate；Oleanolic acid；HPLC

R927.2

A

1674-8646（2015）04-0054-02

2015-03-25

王化（1981-），女，吉林大安人，助理研究員，博士，從事天然產物研究。