高效液相色譜法測定香芍甘草顆粒中α-香附酮的含量

曲林　劉文亮（1.哈爾濱商業大學，黑龍江哈爾濱 150076；.哈藥集團中藥二廠，黑龍江哈爾濱 150078）

高效液相色譜法測定香芍甘草顆粒中α-香附酮的含量

曲林1，2劉文亮2
（1.哈爾濱商業大學，黑龍江哈爾濱 150076；2.哈藥集團中藥二廠，黑龍江哈爾濱 150078）

目的：利用HPLC法檢測α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。方法：HPLC法。色譜柱為Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-水（77：23）；流速1.0ml/min；柱溫：20℃；檢測波長250nm。結果：HPLC含量測定方法平均回收率為100.34%，RSD為1.38%（n=9）。結論：本文所用方法簡潔快捷，可以用于檢測α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。

香芍甘草顆粒 HPLC α-香附酮

香芍甘草顆粒是由炙甘草、白芍、生香附三味中草藥得到的中藥復方制劑，具有養血滋陰、和胃理氣、舒肝止痛的功能。臨床首要應用于消化科各類潰瘍疾病的有效治療。為了有效控制香芍甘草顆粒的質量，經過文獻檢索［1］及反復試驗驗證，本試驗采用的HPLC方法檢測α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量。

1　儀器與試藥

1.1儀器

METTLER XS205電子天平；Agilent-HPLC1200系列，并帶有其對應的工作站。

1.2試藥

α-香附酮標準品（南京澤朗生物科技有限公司，純度：HPLC &ge；98%），色譜乙腈（Concord），分析甲醇（Concord）；香芍甘草顆粒（哈藥集團中藥公司科研自制）。

2　實驗方法與結果

2.1色譜條件與系統適應性試驗

色譜柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-水（73：27）；流速1.0ml/min；柱溫20℃；檢測波長250nm；進樣量10μl。

2.2溶液制備

2.2.1配制標準品溶液

精密量取α-香附酮標準品，置于50ml的量瓶中，加入適量甲醇至標線，即得1μl/ml的標準品溶液。

2.2.2配制樣品溶液

將香芍甘草顆粒粉碎成細粉，取約10g，精密稱定，將其加入到100ml的磨口錐形瓶中，精密量取50ml甲醇，稱定，超聲處理35分鐘，放涼，再次稱定，吸取甲醇溶液適量補充缺失的重量，振蕩均勻，再用孔徑為0.45μm的有機微孔濾膜過濾，即得樣品溶液。

2.2.3測定法

設定自動進樣器進樣量為10μl，樣品名稱分別為α-香附酮標品、香芍甘草顆粒樣品，在2.1項條件下進行檢測，得到含量值。

2.3專屬性試驗

配制只含有甘草和白芍的溶液，按樣品溶液的方法配制為陰性樣品溶液，設定進樣量為10μl，在2.1條件下進行檢測，測定結果表明，缺樣空白溶液無干擾，即此檢測方法的專屬性良好。

2.4線性關系考察

精密量取0.5mlα-香附酮標準品，放于50ml量瓶中，加入適量分析甲醇到容量瓶標線，制成的標準品溶液，濃度為10μl/ml。分別精密量取上述標準品溶液1、3、5、7、9、11ml置于50ml量瓶中，加入分析甲醇再次到標線，振蕩均勻，制成濃度為0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μl/ml的標準品溶液，設定進樣量為10μl，按2.1條件檢測，記錄峰面積分別為1578.71、4761.13、7866.44、11003.23、13978.34、17276.37。縱坐標是峰面積，橫坐標為α-香附酮濃度，得到標準曲線，其回歸方程為：A=7805.2C+44.243，r2=0.9998。結果表明：在0.2μl/ml ～2.2μl/ml的濃度區間內，α-香附酮濃度與其峰面積之間有著良好的線性關系。

2.5精密度試驗

選用濃度為1.0μl/mlα-香附酮標準品溶液，設定進樣量10μ l，6次進樣，記錄峰面積分別為7884.92、7864.24、7861.35、7866.41、7853.02、7860.51。測定計算，RSD值為0.13%（n=6），試驗結果表明系統有良好的精密度。

2.6穩定性試驗

取2.2.2項下樣品溶液，分別在1、3、5、7、10、12h時間點按照2.1項下條件檢測，計算含量，RSD為0.57%，由此可以判斷在12h內α-香附酮在香芍甘草顆粒中的含量穩定。

2.7重復性試驗

稱取相同批次香芍甘草顆粒6份，精密稱定，在2.1項條件下檢測，檢測α-香附酮的含量，其含量結果的平均數計算為5.03μl/g，RSD為0.54%，結果表明此方法有良好的重復性。

2.8加樣回收試驗取含量為5.03μl/g 的9份香芍甘草顆粒試樣，每份取約5g，精密稱定，加入10μl/mlα-香附酮對照品溶液2ml、2.5ml、3ml（含α-香附酮分別為20μl/ml、25μl/ml、30μl/ml），按2.2.3項下操作方法，在2.1條件下進行檢測。測定記錄結果見表1。

表1　α-香附酮加樣回收率記錄表（n=9）

3　討論

通過實驗，本文所建立α-香附酮含量檢測方法在檢測濃度區間內有良好的線性關系，其重復性、精密度、穩定性試驗結果均符合要求，操作快速簡易，可用于本品中α-香附酮的測定，可以用來控制香芍甘草顆粒質量。

本文用UV法在200nm-400nm對α-香附酮進行了檢測，其結果是在250nm處α-香附酮的吸收值最大，所以設定250nm為選擇的檢測波長。

［1］許世輝.高效液相色譜法測定婦科調經片中α-香附酮的含量［J］.海峽藥學，2010，（9）：62-63.