UPLC法測定痤瘡凝膠中黃芩苷和蒙花苷的含量*

范麗麗，李　楠，顧　星，朱　蘊，劉志東，夏慶梅，郭麗麗，王愛潮（.天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津30093；.天津中醫藥大學，天津30093）

UPLC法測定痤瘡凝膠中黃芩苷和蒙花苷的含量*

范麗麗1，李楠1，顧星1，朱蘊1，劉志東1，夏慶梅2，郭麗麗1，王愛潮1
（1.天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津300193；2.天津中醫藥大學，天津300193）

［目的］建立痤瘡凝膠中黃芩苷、蒙花苷含量測定方法。［方法］采用Acquity BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色譜柱；以乙腈-0.1%甲酸（20∶80）為流動相，流速0.3 mL/min，檢測波長320 nm，柱溫35℃。［結果］黃芩苷和蒙花苷分別在3.767～75.34 μg和0.840 96～33.638 4 μg范圍內線性關系良好，平均回收率分別為99.04%和97.42%（n=6）；RSD分別為1.97%和1.81%。［結論］該方法簡便、準確、重現性良好，為痤瘡凝膠的質量控制提供了理論依據。

痤瘡凝膠；黃芩苷；蒙花苷；超高效液相色譜法；含量測定

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2015.01.12

痤瘡是一種好發于青春期的毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚病，治療不當容易遺留瘢痕和色素沉著等損容性的皮膚損害，發病率較高［1-4］。痤瘡凝膠是天津中醫藥大學制劑中心研制的純中藥外用制劑，由黃芩、野菊花、丹參、白花蛇舌草、紅花、白薇、甘草等7味中藥組成，具有清熱涼血、活血消癰、散瘀止痛等功效［5-13］。實驗已證明［14］，痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型有確切治療效果，且臨床用于尋常痤瘡的治療療效顯著。為了控制該制劑質量，保證臨床用藥的安全有效，本研究采用超高效液相色譜法（UPLC法）對處方里黃芩中的黃芩苷和野菊花中的蒙花苷進行了含量測定，為該方的進一步開發利用奠定基礎。

1　儀器與試藥

超高效液相色譜儀（Waters，Acquity，TUV Detector，Sample Manager-FTN，Quaternary Solvent Manager美國），臺式通用冷凍離心機（THERMO FISHER美國），SZCL-4B磁力攪拌（鞏義市予華儀器有限責任公司），C3860A超聲清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司），AX205電子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）。

黃芩苷（批號110715-201117）、蒙花苷（批號111528-201308），均購于中國藥品生物制品檢定所，痤瘡凝膠及陰性樣品均為課題組自制，甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2　方法與結果

2.1色譜條件Waters ACQUITYUPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80）為流動相；檢測波長320 nm，流速0.3 mL/min，柱溫35℃，進樣量1 μL。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于8 000。

2.2對照品溶液的制備取黃芩苷、蒙花苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含8.0 μg黃芩苷和1.5 μg蒙花苷的混合對照品溶液。

2.3供試品溶液及陰性樣品溶液的制備精密稱取本品1 g，至50 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）10 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，14 000 r/min離心10 min，取上清液用去離子水稀釋5倍，過0.22 μm濾膜，取續濾液，即得供試品溶液。按處方比例及制備工藝制備缺黃芩和野菊花的陰性樣品，稱取相應量，如上處理，得陰性樣品溶液。

2.4專屬性實驗取黃芩苷、蒙花苷的混合對照品、痤瘡凝膠供試品和陰性樣品溶液，進樣，結果陰性樣品無干擾，證明此色譜條件可行。見圖1。

2.5標準曲線制備精密稱取黃芩苷、蒙花苷對照品適量，分別配成含黃芩苷0.935 3、2.338 4、4.676 7、9.353 4、14.030 1、18.706 8 μg/mL和蒙花苷0.346 2、0.865 4、1.730 8、3.461 6、5.192 5、6.923 3 μg/mL的標準品溶液。按色譜條件進樣1 μL，測定峰面積，以峰面積（Y）對濃度（X）進行線性回歸，黃芩苷回歸方程為：Y=8 755X-2 217，r2=0.999；蒙花苷回歸方程為：Y=7 681X-1 537，r2=0.998。結果表明黃芩苷和蒙花苷分別在3.767～75.34 μg和0.840 96～33.638 4 μg范圍內線性關系良好。

2.6精密度實驗取同一批號樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下方法測定峰面積，連續進樣6次，測得黃芩苷和蒙花苷峰面積值的RSD分別為0.47%和0.89%，精密度符合要求。

2.7重復性實驗取同一批號（140726）樣品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下方法測定分析，結果6份樣品中黃芩苷平均含量為1.99mg/g，RSD=1.54%；蒙花苷平均含量為0.37mg/g，RSD=1.34%。結果表明，重復性符合要求。

2.8穩定性實驗取同一供試品溶液分別在0、2、4、6、8、10、12 h進樣，依法進行含量測定，結果黃芩苷和蒙花苷峰面積的RSD分別為0.73%和1.19%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.9加樣回收率實驗取同一批號（140726）樣品6份，各0.5 g，精密稱定，精密加入每1 mL含黃芩苷334.561 2 μg和蒙花苷65.809 2 μg的甲醇溶液3.0 mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定樣品中黃芩苷和蒙花苷的含量，計算回收率。結果黃芩苷和蒙花苷的平均回收率分別為99.04%和97.42%（n=6）；RSD分別為1.97%和1.81%。結果見表1。

圖1　痤瘡凝膠中黃芩苷、蒙花苷的UPLC色譜圖

表1　回收率實驗測定結果

2.10樣品測定取3批樣品（批號140724、140725、140726），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別測定黃芩苷和蒙花苷的峰面積，結果黃芩苷的含量分別為1.901 0、1.909 5、1.878 4 mg/g；蒙花苷的含量分別為0.364 0、0.367 4、0.361 1 mg/g。

3　討論

3.1色譜條件根據黃芩苷和蒙花苷在200～600nm的紫外全波長掃描結果，考察了波長280、320、328和334 nm［15-17］時兩種成分的含量變化，最終選擇320 nm為檢測波長，此時兩種成分含量均較高，且與雜峰分離較好。

考察了不同流動相條件如甲醇-0.05%磷酸水，乙腈-0.1%磷酸水及乙腈-0.1%甲酸水等［18-21］，結果表明乙腈-0.1%甲酸水的峰形較好。又考察了此條件下流動相的比例：乙腈-0.1%甲酸水（15∶85）、（18∶82）、（19∶81）、（20∶80）等，結果乙腈-0.1%甲酸水（20∶80）時黃芩苷和蒙花苷出峰時間適中，分離度高，峰形較好，與雜質峰基線分離，且陰性樣品無干擾。

3.2提取溶劑實驗中采用4種溶劑甲醇、純乙醇、75%乙醇、50%乙醇對供試品進行超聲提取，結果發現50%乙醇、75%乙醇超聲提取完后過濾膜時很費勁，無法過濾，并且蒙花苷溶解性不好，在甲醇中的溶解度最高，最終選擇甲醇為提取溶劑。

［1］夏慶梅，王泓午，徐麗敏．痤瘡中西醫研究進展［J］．天津中醫藥，2011，28（1）：84-86．

［2］張靜文．痤瘡的研究進展［D］．北京：北京中醫藥大學，2007．

［3］張秀美，王秀蓮．痤瘡從濕熱論治探討［J］．天津中醫藥，2007，24（6）：521-522．

［4］鄧新煥，王亞靜，于悅，等.酚-黃復方對痤瘡致病菌的體外抗菌作用研究［J］.天津中醫藥大學學報，2014，33（5）：299-302.

［5］官妍，謝萌，汪長中，等.連翹苷和黃芩苷對表皮葡萄球菌生物膜抑制作用的研究［J］.中國微生態學雜志，2010，22（10）：886-888.

［6］于悅，王亞靜，皮佳鑫，等.黃芩苷-冰片聯合應用對表皮葡萄球菌的抑菌作用［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（10）：191-194.

［7］李秀玉．中藥白花蛇舌草在痤瘡治療中的應用［J］．解放軍醫學雜志，2011，36（12）：1376-1377．

［8］劉久利，何靜巖，趙文斌，等．中藥治療尋常痤瘡組方的文獻分析［J］．實用皮膚病學雜志，2013，6（1）：39-41．

［9］鄭璐璐，張貴君，王晶娟，等．野菊花藥效組分抗炎的生物效應研究［J］．天津中醫藥，2011，28（3）：251-253．

［10］呂全興．丹參等中藥治療尋常痤瘡機理的實驗研究［D］．濟南：山東中醫藥大學，2006．

［11］李秀玉，王曉靜．近6年來60首痤瘡專用方用藥規律探討［J］．中醫藥信息，2010，27（2）：36-38．

［12］華曉東，鞏媛媛，芮菁，等．黃芩素對皮膚過敏治療作用的實驗研究［J］．天津中醫藥，2007，24（3）：241-243．

［13］楊彥潔．中藥治療尋常性痤瘡的文獻分析及中醫藥內外結合治療痤瘡的臨床研究［D］．北京：北京中醫藥大學，2013．

［14］夏慶梅，景春暉，杜天樂．復方中藥痤瘡凝膠對兔耳痤瘡模型治療作用的實驗研究［J］．天津中醫藥，2014，31（5）：296-300．

［15］武昊昀，劉志東，李琳，等．pH敏感型黃芩苷眼用原位凝膠劑的體外研究［J］．中國新藥雜志，2011，20（6）：508-512．

［16］國家藥典委員會.中華人民共和國中國藥典一部［S］．北京：中國醫藥科技出版社，2010．

［17］王伯濤，王鋒，張同波，等．反相高效液相色譜法測定野菊花中蒙花苷的含量［J］．時珍國醫國藥，2009，20（1）：166-168．

［18］周禮玲，張師愚．雙黃連滴丸質量控制指標黃芩苷的含量測定［J］．天津中醫藥大學學報，2007，26（4）：202-203．

［19］韓永成，龔海燕，劉偉，等．UPLC同時測定野菊花中蒙花苷和綠原酸含量［J］．中國實驗方劑學雜志，2013，19（20）：88-90．

［20］陳紅英，倪健，張輝，等．HPLC測復方野菊花含片中黃芩苷和蒙花苷含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（10）：122-124．

［21］劉雪平．小兒清肺丸質量標準的研究［J］．天津中醫藥大學學報，2011，30（1）：38-40．

Determination of Baicalin and Linarin in Cuochuang Gel by UPLC

FAN Li-li1，LI Nan1，GU Xing1，ZHU Yun1，LIU Zhi-dong1，XIA Qing-mei2，GUO Li-li1，WANG Ai-Chao1
（1.Tianjin Modern Chinese Medicine Key Laboratory-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To establish a UPLC method for content determination of Baicalin and Linarin in Cuochuang Gel.［Methods］The column was Acquity BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）.The mobile phase consisted of a mixture acetonitrile-1%formic acid（20∶80）.The flow rate was 0.3 mL/min.The detection wavelength was 320 nm under 35℃.［Results］The calibration curves for baicalin and Linarin were linear in the ranges of 3.767～75.34 μg and 0.840 96～33.638 4 μg，and the average recovery was 99.04%and 97.42%（n=6），with RSD of 1.97%and 1.81%，respectively.［Conclusion］This method was simple，precise and repeatable，which can be used for quality control of Cuochuang Gel.

Cuochuang Gel；baicalin；Linarin；UPLC；content determination

R285.5

A

1673－9043（2015）01－0042-03

教育部新世紀優秀人才支持計劃（NCET-12-1068）。

范麗麗（1990-），女，碩士研究生，主要從事中藥制劑方向的研究。

劉志東，E-mail：lonerliuzd@163.com。

（2014-11-07）