HS-SPME-GC/MS法分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發性成分*

賈偉娜，王春華，王宏濤，田書彥，韓　雪，朱　彥

HS-SPME-GC/MS法分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發性成分*

賈偉娜1，3，王春華1，3，王宏濤2，田書彥2，韓雪1，3，朱彥1，3

（1.天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津300193；2.石家莊以嶺藥業股份有限公司，石家莊050035；3.天津國際生物醫藥聯合研究院中藥新藥研發中心，天津300457）

［目的］分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發性成分。［方法］采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）萃取連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發性成分，通過氣相色譜-質譜法（G C/MS）對其中所含揮發性成分進行分析，經NIST05質譜數據庫自動檢索對未知化學成分進行準確定性，并采用峰面積歸一化法計算各個化學成分的相對含量。［結果］從連花清瘟膠囊制劑原料的揮發性成分中共鑒定出53種化合物，占總揮發性成分的98.30%，其中l-menthol含量最高，其相對含量為94.84%，其他含量較高的揮發性成分為patchoulialcohol（1.101%）、α-bulnesene（0.398%）、α-gurjunene（0.256%）、α-guainene（0.210%）、α-patchoulene（0.171%）和β-patchoulene（0.111%）。［結論］HS-SPME-GC/MS法可以簡單、快速、準確的分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發性化學成分。

連花清瘟膠囊；頂空固相微萃取；氣質聯用分析；揮發性成分

連花清瘟膠囊是由石家莊以嶺藥業有限公司研制并開發，由經典名方“麻杏石甘湯”和“銀翹散”兩種方劑化裁而來［1］。連花清瘟膠囊由連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、生石膏等13味中藥加工制成的膠囊制劑，具有清瘟解毒、宣肺泄熱之功效，常用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺證，癥見發熱或高熱、惡寒、肌肉酸痛等［2］。現代藥理研究表明，連花清瘟膠囊具有抗病毒、抗菌和抗炎等活性［3-6］，用于治療流行性感冒療效顯著［7-8］。目前，關于連花清瘟膠囊的化學物質基礎研究較少，有關其揮發性化學成分的研究還未見報道。本研究首次采用頂空固相萃取-氣相色譜-質譜法（HS-SPME-GC/MS法）鑒定了連花清瘟膠囊制劑原料中的53種揮發性成分，為連花清瘟膠囊的臨床應用與升級開發提供了科學研究數據［9-11］。

1　材料與方法

1.1原料連花清瘟膠囊制劑原料由石家莊以嶺藥業有限公司提供（批號121003）。

1.2儀器Varian 4000 GC-Ion Trap-MS氣相色譜-離子阱-質譜儀（Varian，WalnutCreek，CA，美國），固相微萃取裝置（Supelco Inc.，Bellefonte，美國），包括手柄、聚二甲氧基硅烷/二乙烯基苯（65μm PDMSDVB）吸附纖維，15mL頂空瓶（德國CNW公司）。

1．3方法

1.3.1頂空固相微萃取精密稱取1.0 g連花清瘟膠囊制劑原料，置于15m L頂空瓶中，將老化好的固相微萃取裝置插入密封頂空瓶中，推出萃取頭（萃取頭距樣品表層約1 cm），于80℃頂空萃取30min，然后將固相微萃取裝置立即插入GC/MS進樣口，在250℃下解吸5min進行分析［12-13］。

1.3.2氣質分析條件氣相色譜條件：色譜柱型號為VF-5m s（30m×0.25mm×0.25μm），進樣口溫度為250℃，分流模式，載氣為氦氣（He），流速為1mL/min。柱箱升溫程序如下：初始溫度為40℃，保持3min，然后以4℃/min的速率升至150℃，保持1min，最后以8℃/min的速率升至250℃，保持6min。

質譜條件：電子轟擊離子源（EI），電力電壓70eV，離子阱和傳輸線溫度分別為220℃和280℃，掃描方式為全掃描，質量掃描范圍m/z50-500。

1.3.3定性與定量分析每個峰的質譜圖采用NIST05質譜數據庫自動檢索進行定性分析，單個化合物的相對含量用其峰面積相對于總峰面積的百分比來表示，相似度大于75%時即可認為是可識別化合物。

2　結果

連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分經萃取及GC/MS分析得到的總離子流圖，見圖1。將各個色譜峰的質譜數據與NIST05質譜數據庫對比并自動檢索定性分析，共鑒定出53種化合物，占揮發性總成分的98.30%，并用峰面積歸一化法確定了各揮發性成分的相對百分含量，結果見表1。

分析結果表明，l-me nthol（94.84%）是連花清瘟膠囊制劑原料中的主要揮發性成分，其他高濃度揮發性成分為patchoulialcohol（1.101%）、α-bulnesene（0.398%）、α-gurjunene（0.256%）、α-guaiene（0.210%）、α-patchoulene（0.171%）和β-patchoulene（0.111%）。據文獻報道，這些揮發性化合物具有良好的抗病毒［14］、抗炎［14］、抗菌［15］等活性，可能與治療病毒性感冒藥效具有相關性［16-18］。

圖1　連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分總離子流圖Fig.1　The total ion chromatogram of volatile com ponents in raw materialsof Lianhua Qingwen preparations

表1　連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分分析結果Tab.1　The analyzed resultsof volatile com ponents from raw materialsof Lianhua Qingwen preparations

3　討論

本研究通過采用HS-SPME-GC/MS分析連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分。該方法操作簡單，耗時短，樣品用量少，重現性好，萃取的化合物種類多，能較好地反映連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分組成基本情況，并且可以在沒有標準樣品的情況下，經NIST05質譜數據庫自動檢索，對這些未知化合物進行準確定性，同時采用峰面積歸一化法進行定量分析，為連花清瘟膠囊制劑原料中揮發性成分檢測提供了一種新的有效手段，并為連花清瘟膠囊的進一步研究與升級開發提供一定的科學研究數據。

［1］劉春援，李曉強，蔡紹乾.連花清瘟膠囊的藥理與臨床研究進展［J］.中藥藥理與臨床，2010，26（6）:84-85.

［2］周沙，周瑩君，馬桂云，等.連花清瘟膠囊穩定性的考察［J］.河北化工，2012，35（3）:16-17.

［3］吳以嶺.解讀連花清瘟膠囊［J］.中國醫藥指南，2005，3（11）:120-121.

［4］黃明朝.連花清瘟膠囊研究進展［C］.絡病學基礎與臨床研究（9），2014:417-418.

［5］胡憶芬.連花清瘟膠囊的藥理及臨床療效分析［J］.現代診斷與治療，2013，24（9）:2012.

［6］李佳，宋新波，余保林，等.高效液相色譜法測定光果甘草中光甘草定的含量［J］.天津中醫藥，2008，25（2）:157-158.

［7］王新功，崔學軍，劉新生，等.連花清瘟膠囊治療流行性感冒的臨床療效觀察［J］.中國藥房，2008，19（27）:2416-2418.

［8］Duan ZP，Jia ZH，Zhang J，etal.NaturalherbalmedicineLianhuaqingwen capsule anti-influenza A（H1N1）trial:a randomized，double blind，positive controlled clinical trial［J］.Chin Med J，2011，124（8）: 2925-2933.

［9］劉時喬，張新鑫，單淇，等.胡黃連中酚類化合物的分離及UPLC-ESI-MS分析［J］.天津中醫藥，2012，29（6）:583-587.

［10］王健，李錦，孫瑜，等.GC-MS鑒別清熱抗感顆粒中青蒿、荊芥穗和薄荷［J］.天津中醫藥大學學報，2007，26（4）:210-212.

［11］趙培莉，吳靜明，張毅，等.氣相色譜法同時測定中藥糖漿劑中3種防腐劑含量［J］.天津中醫藥大學學報，2013，32（1）:40-42.

［12］降升平，張小紅，張玲玲，等.SPME-GC-MS法分析室內空氣中揮發性有機物［J］.太原理工大學學報，2013，44（3）:272-277.

［13］張軍安，陳波.頂空固相微萃取-氣質聯用分析酸棗仁揮發性成分［J］.中藥材，2012，35（2）:235-240.

［14］Kiyohara H，Ichino C，Kawamura Y，etal.Patchoulialcohol:in vitro directanti-influenza virussesquiterpene in Pogostemon cablin Benth［J］.JNatMed，2012，66（1）:55-61.

［15］劉琥琥，羅集鵬，賴沛煉.廣東高要與吳川產廣藿香提取物對腸道致病菌抗菌作用的比較研究［J］.中藥材，1999，22（8）:408-511.

［16］張鏢.中藥復方研究現狀與思路探析［J］.天津中醫藥大學學報，2007，26（2）:104-106.

［17］王以炳，張天民，楊玉梅，等.連花清瘟膠囊治療病毒性感冒的有效性與安全性觀察［J］.臨床肺科雜志，2008，13（9）:1118-1119.

［18］羅榮，張貴君.中藥藥效組分的理論與實踐 （二）［J］.天津中醫藥，2014，31（2）:121-124.

（本文編輯：高杉，于春泉）

Determ ining volatiles from raw materialsof Lianhua Qingwen preparationsby HS-SPME-GC/MS

JIAWei-na1，3，WANGChun-hua1，3，WANGHong-tao2，TIANShu-yan2，HANXue1，3，ZHUYan1，3
（1．Tianjin Modern ChineseMedicine Key Laboratory-Provinceand Ministry co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Instituteof TraditionalChineseMedicine，Tianjin University of TraditionalChineseMedicine，Tianjin 300193，China；2.Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.，Ltd，Shijiazhuang 050035，China；3.Research and DevelopmentCenter of TraditionalChineseMedicine，Tianjin International JointAcademy of Biotechnology&Medicine，Tianjin 300457，China）

［Objective］To analyze the volatiles from raw materialsof Lianhua Qingwen preparations.［M ethods］Headspace solid-phase micro-extraction（HS-SPME）technique was employed to extract the volatile compounds from raw materials of Lianhua Qingwen preparations.The volatile componentswere isolated and identified successfully by gas chromatography/mass spectrometry（GC/MS）and matched with NIST05 mass spectra library to retrieve the unknown chemical components automatically，the relative contents in percentage of each chemical composition were calculated by peak area normalizationmethod.［Results］Fifty-three volatile compounds were temporarily identified，corresponding to 98.30%of totaloils.Themajor volatile componentwas l-menthol（94.84%），and the other high levelsof ingredientswere patchoulialcohol（1.101%），α-bulnesene （0.398%），α-gurjunene （0.256%），α-guaiene（0.210%），αpatchoulene（0.171%）andβ-patchoulene（0.111%）.［Conclusion］The volatile components from raw materials of Lianhua Qingwen preparations can be simp ly，rapidly and accurately analyzed by HS-SPME-GC/MSmethod.

LianhuaQingwen preparation；SPME；GC/MS；volatile constituent

R284

A

1672-1519（2015）02-0110-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.02.12

天津市自然科學基金資助項目（13JCZDJC28600、12JCYBJC32400）。

賈偉娜（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學物質基礎研究。

王春華，E-mail:pharmwch@126.com。

（2014-09-29）