GA的提取分離工藝優化及其體內抗氧化活性作用

劉 喬，管曉輝，黃翠菊，夏 炎，沈明浩（吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春　130118）

GA的提取分離工藝優化及其體內抗氧化活性作用

劉 喬，管曉輝，黃翠菊，夏 炎，沈明浩*
（吉林農業大學食品科學與工程學院，吉林 長春130118）

目的：探討利用漆酶破壁結合超聲波輔助法提取靈芝孢子粉中靈芝酸（ganoderma acid，GA）組分以及GA對D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠的體內抗氧化活性的影響。方法：利用正交試驗將工藝條件優化；D-半乳糖連續皮下注射進行亞急性衰老小鼠造模，建模同時，以抗壞血酸 為陽性對照組，GA設立高、中、低劑量組對衰老模型小鼠進行灌胃，另設立空白對照組和模型對照組，灌胃0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na），每周測一次體質量，6 周后分別測所有小鼠血清、肝臟、腦組織的總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）活力、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，血清和腦組織的谷胱甘肽過氧化物歧化酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）活力、血清和肝臟的總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）值。結果：得到最優工藝條件為料液比1∶60、加酶量0.04 g/mL、超聲3 次、每次超聲時間3 h，在此工藝條件下得到GA的提取率為1.69%；GA可明顯提高小鼠體內T-SOD、GSH-PX活力和T-AOC值，降低MDA含量。結論：得到GA的最佳提取工藝穩定可行；GA能顯著提高衰老模型小鼠的體內抗氧化能力。

漆酶；靈芝酸；D-半乳糖；衰老；抗氧化

我國東北三省有豐富的靈芝資源，尤其以長白山靈芝孢子粉最為知名。靈芝孢子是靈芝的有性生殖細胞——擔孢子，具有靈芝的全部遺傳活性物質，其藥用價值和保健作用日益受到重視［1-2］，含有維生素、多糖、生物堿、三萜等多種生物活性成分，據測定其中多糖、多肽、三萜、氨基酸和蛋白質等活性物質的含量均是子實體的70 倍以上［3］。靈芝孢子具有堅硬的雙層外壁結構，其成分幾丁質含量為52.08%～57.64%，無機元素構成以Si（19.01%）、Ca（24.31%）為主，硅和鈣摻入幾丁質使得孢壁更加結實堅硬，且耐酸堿，極難氧化分解4］，因此未破壁的靈芝孢子中的有效物質不易于提取，限制人體對其有效物質的消化吸收［5］，朱江等［6］曾采用復合酶酶解方法來生產破壁靈芝孢 子粉，破壁率高。

Kutoba等［7］在1982年首次從靈芝的子實體中分離得到三萜類靈芝酸（ganoderma acid，GA）A和GAB，1988年從靈芝屬中分離得到103 種三萜類新化合物，曾祥麗等［8］曾報道靈芝中含有122 種三萜類成分，其中最主要的是GA 37 種。

小鼠衰老模型的建立方法包括胸腺摘除法、臭氧致衰老法、Y射線照射法以及半乳糖注射法等，D-半乳糖注射法最為常用，D-半乳糖可以在正常質量濃度代謝，但在高質量濃度時它可以在半乳糖氧化酶的催化條件下轉化為醛糖和氫過氧化物，導致超氧化物陰離子自由基和氧自由基的生成，破壞機體抗氧化防御系統?，F代藥理研究表明，靈芝三萜類化合物具有保肝調脂［9-10］、抗腫瘤［11］、抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性［12］、誘導CNE2細胞凋亡［13］、抗氧化和抑制組織胺釋放等作用［14］，劉曉珍等［15］證實了黑靈芝中的三萜成分有著較強的體外抗氧化活性，但作為三萜化合物的GA的體內抗氧化活性還鮮有相關的報導。為了對GA組分開展進一步的研究，本研究采用漆酶酶解及超聲波技術結合的方法來從未破壁的靈芝孢子粉中提取粗GA，利用正交試驗將工藝條件優化，并對靈芝孢子粉中GA粗提物的體內抗氧化活性做了更深一步的探討。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

未破壁靈芝孢子粉長白山特產商貿城豐茂山珍；漆酶（食品級，4 000 U/g）、羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）（食品級）上海申光食用化學品有限公司；抗壞血酸、D-半乳糖、無水乙醇、三氯甲烷、冰醋酸、香草醛、高氯酸、齊墩果酸標準品、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸、氫氧化鈉、濃鹽酸及分離用有機溶劑均為國產分析純；總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）試劑盒、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）值試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物歧化酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）試劑盒南京建成生物工程公司。

1.2儀器與設備

WD-2102型自動酶標儀北京市六一儀器廠；N-1001D-WA型旋轉蒸發儀東京理化器械株式會社；GL-20G-Ⅱ高速冷凍離心機上海安亭科學儀器廠；超純水系統法國Millapore公司；DZF-6050型真空干燥箱上海光譜儀器有限公司；KQ-250B型超聲波清洗器東京理化器械株式會社；酸度計梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1GA組分的提取及制備

稱取一定質量靈芝孢子粉，加入適量漆酶和pH 6的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在70 ℃條件下破壁1 h，滅酶、干燥，加入98%乙醇溶液為溶劑超聲提取，抽濾得濾液，45 ℃減壓濃縮得棕黃色固油混合物，混合物復溶于100 mL的CHCl3中，用飽和NaHCO3溶液（CHCl3-NaHCO3體積比為1∶1）萃取3 次，取NaHCO3溶層，用6 mol/L鹽酸酸化至pH 3～5后用等量CHCl3再萃取3 次，合并CHCl3層，減壓濃縮干燥得黃色粗GA組分［16］。灌胃時將其溶于0.5% CMC-Na制成懸浮液。用無水乙醇定容至10 mL待測。

1.3.2GA提取率的測定

1.3.2.1標準曲線的制作［17］

用無水乙醇將齊墩果酸標品制成0.018 6 mg/mL質量濃度的標準溶液，分別取0.0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL的樣液于具塞試管中80 ℃水浴揮干，分別加入現配的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸1.2 mL，70 ℃水浴保溫反應15 min，流水冷卻至室溫，分別加入3.6 mL的乙酸乙酯，振蕩后靜置15 min，550 nm波長條件下用紫外-可見分光光度計測其吸光度。以齊墩果酸質量濃度（X，mg/mL）為橫坐標，測得的吸光度（A）為縱坐標繪制成標準曲線，得出線性方程為A=47.377X+0.003 5，R2=0.998 9。

1.3.2.2GA提取率及粗提物純度計算

將提取出的粗GA組分用無水乙醇定容至10 mL，精確吸取一定體積的樣液于具塞試管中作為反應樣液，參照1.3.2.1節中標曲中的操作方法進行反應并測定吸光度A，GA提取率（Y）及GA粗提物純度（P）計算如式（1）、（2）所示：

式中：X為反應樣品質量濃度/（mg/mL）；V為反應體系的體積，5 mL；N為定容的體積與反應樣液之比；M為稱取孢子粉質量/mg；m為GA粗提物質量/mg。

1.3.3GA提取工藝優化設計

1.3.3.1單因素試驗設計

在其他條件相同的條件下，即取1 g孢子粉、20 mL pH 7的緩沖液、70 ℃條件下酶解1 h，干燥后分別考察加酶量（0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 g/mL）、超聲時間（1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h）、超聲次數（1、2、3、4、5）、料液比（1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70（g/mL））4 個單因素對GA提取率的影響，其他萃取條件同1.3.1節。

1.3.3.2正交試驗設計

以GA提取率作為衡量指標，在單因素試驗的基礎上，采用L9（34）正交試驗設計研究加酶量、超聲時間、超聲次數和料液比4 個因素對GA提取率的影響，確定最優提取工藝條件。各因素及水平設計見表1。

表1　正交試驗因素與水平設計Table 1 Factors and their coded levels used in orthogonal array design

1.3.4動物分組及造模

空調動物房內溫度18～22 ℃，自然光照。健康的昆明種小鼠60 只（體質量（22±2）g），雌雄各半，適應性飼養1 周后，隨機分為6 組（正常對照組，模型對照組，陽性對照組，GA給藥低、中、高劑量組），每組10 只，分籠飼養，自由采食和飲水。正常對照組和模型對照組灌服0.5%的CMC-Na；VC陽性對照組按照100 mg/（kg·d）的劑量灌胃；GA給藥低、中、高劑量組分別按照50、100、200 mg/（kg·d）的劑量灌胃。除正常對照組外，其余各組小鼠在灌胃的同時頸部皮下注射D-半乳糖200 mg/（kg·d），D-半乳糖溶液以滅過菌的生理鹽水配制，正常對照組注射生理鹽水，以上各組灌胃和注射劑量均按0.1 mL/10 g標準操作［18］。每日灌服、注射1 次，連續6 周。每周稱體質量1 次，按體質量再調整灌胃量和注射量。

1.3.5組織樣品的制備

實驗小鼠在末次給藥后，禁食1 d，稱體質量，摘取眼球采血，分離血清。將小鼠脊椎脫臼處死，迅速取出全腦、肝組織，用4 ℃生理鹽水沖凈表面殘血，濾紙吸干水分，稱質量，腦組織和肝組織快速制成勻漿液。取0.2～1.0 g小鼠組織塊，在預冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙拭干。稱質量后放入勻漿器，添加9 倍質量的預冷生理鹽水制成10%的組織勻漿液，同理分別制成1%和0.25%的組織勻漿液。

1.4數據分析

動物實驗所有實驗數據均采用PASW Statistics18軟件進行統計分析，以±s表示；顯著性分析為單向方差分析。

2　結果與分析

2.1單因素試驗結果

圖 1　加酶量對提取率影響Fig.1　Effect of enzyme concentration on the extraction yield of GA

2.1.1加酶量對提取率的影響由圖1可以看出，隨著加酶量的增加，底物與酶接觸機會不斷增加［19］，使GA從孢壁中溶出來的幾率增大，從而使提取率也逐漸增加，在加酶量達到0.04 g/mL時提取率達最高，繼續增加漆酶質量濃度對提取率影響不大，酶與底物結合幾乎達到飽和，甚至有可能分解或破壞有效物質結構［20］，提取率趨于平緩甚至緩慢下降，從節省材料等方面考慮，加酶量的考察范圍定為0.03～0.05 g/mL。

2.1.2超聲時間對提取率的影響

圖 2　超聲時間對提取率的影響Fig.2　Effect of ultrasonic time on the extraction yield of GA

由圖2可以看出，GA提取率隨著超聲時間的延長而增大，當時間達到3 h時提取率達到最高，繼續延長超聲時間，提取率開始緩慢下降，可能是超聲時間過長會破壞溶入介質內的GA的物質結構［21］，降解物質結構影響提取率［22］，由此可以看出超聲時間的最佳范圍為2.5～3.5 h。

2.1.3超聲次數對提取率的影響

由圖3可以看出，GA提取率隨著超聲次數的增加而逐漸增加，當超聲2 次后提取率的增加趨于平緩，有效物質的溶出較為完全，細胞內外溶液質量濃度達到動態平衡［23］，再增加提取次數時，提取率的增加幅度不大且耗時較長，因此超聲次數的范圍確定為1～3。

圖 3　超聲次數對提取率的影響Fig.3　Effect of number of ultrasonic treatments on the extraction yield of GA

2.1.4料液比對提取率的影響

圖 4　料液比對提取率的影響Fig.4　Effect of ratio of solid to liquid on the extraction yield of GA

由圖4得知，GA的提取率隨著溶劑用量的增加而增加，通過增加溶劑進入細胞增加提取率，當料液比達到1∶60時達到最大，繼續增大溶劑用量時，提取率變化不大或許已達到飽和［24］，從節約溶劑角度考慮，料液比最佳范圍選擇為1∶50～1∶70。

2.2正交試驗結果與最優組合的確定

表2　正交試驗結果與極差分析Table 2 Orthogonal array design with range analysis of experimental results

由表2可以看出，各因素對指標影響的主次次序為C＞B＞D＞A；直觀觀察得出最優組合為A2B3C3D2，即加酶量0.04 g/mL、超聲時間3 h、超聲3 次、料液比1∶60（g/mL），在此組合條件下驗證實驗3 次取平均值，得出GA提取率為1.69%。測得粗提物GA純度為62.74%，雜質多為鹽。

2.3GA對小鼠的抗氧化作用

2.3.1GA對亞急性衰老模型小鼠血清中各指標影響由表3可以看出，模型組中小鼠血清中的T-SOD活力、GSH-PX活力與空白組小鼠相比明顯下降，MDA含量顯著升高，差異極顯著（P＜0.01），說明亞急性衰老模型小鼠建模成功；而與模型對照組相比，GA和VC可顯著增加D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠血清中的T-SOD活力和GSH-PX活力，降低脂質過氧化物MDA含量，差異均為顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01），其中GA中劑量組和高劑量組中3 個指標結果與空白組結果接近，說明GA對小鼠血清中T-SOD活力、MDA含量和GSH-PX活力有著顯著影響。

表 3 GA對亞急性衰老小鼠血清中T-SOD活力、MDA含量和GSH-PX活力的影響（n==1100）Table 3 Effect of GA on the contents of SOD， MDA and GSH-PX inserum o f subacute aging mice （n =10）

2.3.2GA對亞急性衰老模型小鼠肝臟中各指標影響

表 4 GA對亞急性衰老小鼠肝臟中T-SOD活力、MDA含量和T-AOC值的影響（n==1100）

Table 4 Effect of GA on MDA content， SOD activity and T-AOC value in liver of subacute aging mice （n =10）

表4顯示，與空白對照組相比，衰老模型小鼠肝臟中的T-SOD活力和T-AOC值明顯降低，MDA含量增加，陽性對照組和GA各劑量組與模型組相比T-SOD活力與T-AOC值有不同程度的增加，MDA含量不同程度的降低，其中GA中、高劑量組中T-SOD活力明顯增加，MDA含量明顯降低，差異均為極顯著（P＜0.01）；GA高劑量組中T-AOC值與模型組相比顯著增加；說明GA對小鼠肝臟中T-SOD活力、MDA含量和T-AOC值影響顯著。

2.3.3GA對亞急性衰老模型小鼠腦組織中各指標影響

表5　GA對亞急性衰老小鼠腦組織中T-SOD活力、MDA含量、GSH-PX活力和T-AOC值的影響（n==1100）Table 5 Effect of GA on SOD activity， MDA content and T-AOC valuein brain of subacute aging mice （n =10

由表5可知，低、中、高劑量的GA可明顯提高亞急性衰老小鼠腦組織中T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值，降低大腦中MDA含量，其中GA中劑量組和高劑量組中T-SOD活力、GSH-PX活力和T-AOC值增加極顯著，GA高劑量組降低MDA含量能力與VC陽性對照組接近，與模型對照組相比差異極顯著（P＜0.01）。

3　討 論

D-半乳糖建立衰老動物模型最為常見［25］，D-半乳糖是一種營養成分，在正常質量濃度時可以被代謝，但超過一定質量濃度時機體細胞內半乳糖質量濃度升高，在醛糖還原酶催化條件下轉化為半乳糖醇，由于這種物質不能被進一步代謝而堆積在細胞內影響滲透壓，引起細胞腫脹代謝紊亂，影響機體內的抗氧化酶活性。T-SOD活力和GSH-PX活力高低代表著機體清除氧自由基的能力大小，MDA含量代表著機體受自由基攻擊的嚴重程度［26］，T-AOC值代表總抗氧化能力。本研究中，在小鼠連續42 d注射半乳糖溶液后，T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值下降，MDA含量顯著降低，與秦紅兵等［27］研究結果基本一致，說明衰老模型造模成功。

本研究通過GA各劑量組來考察GA對衰老模型小鼠體內的各抗氧化酶和脂質過氧化物的影響，與模型組比，GA各劑量組可以不同程度地增加小鼠體內T-SOD活力、GSH-PX活力、T-AOC值，降低MDA含量，其中血清中的MDA含量、GSH-PX活力，肝臟和腦組織中的MDA含量與GA劑量呈正相關，而T-SOD活力與T-AOC值在血清和組織中雖不與劑量呈正相關性，但各劑量組的結果與模型組相比差異比較明顯，尤其中、高劑量組多為顯著或極顯著，且中劑量組和高劑量組之間差異不大，可能是由于當功能因子到達一定劑量時，對機體內的各個抗氧化酶的作用逐漸趨于痕量，且小鼠之間個體差異較大，操作過程中可能存在少量偏差，綜合各個指標結果，證實了GA具有良好的抗氧化效果；本實驗用酶解和超聲結合的方法從未破壁的靈芝孢子粉中提取GA，粗提物經測定純度為62.74%，GA占主要成分，雜質主要為萃取過程中產生的鹽類，在抗氧化過程中GA起主要作用；而純化后的GA是否會有更好的抗氧化效果還有待進一步研究。

3　結 論

通過正交試驗確定了靈芝孢子粉中GA組分的提取分離最優工藝條件，即加酶量0.04 mg/mL、超聲時間3 h、超聲3 次、料液比1∶60（g/mL），在此組合條件下得出GA提取率可達1.69%，與初始工藝相比提取率提高了1.72倍。

抗氧化實驗表明，靈芝孢子粉中的GA組分能夠明顯提高小鼠血清、肝臟和腦組織中 的T-SOD活力、GSHPX活力和T-AOC值，降低脂質過氧化物MDA含量，表明GA具有良好的抗氧化效果。

［1］倪偉鋒. 靈芝破壁孢子粉破壁率測定技術和質量安全評價的研究［D］.福州: 福建農林大學， 2008.

［2］陳惠. 靈芝與靈芝孢子的保健作用［J］. 農業工程技術: 農產 品加工業， 2008， 5（5）: 41-42.

［3］李明焱， 何曉. 靈芝孢子粉功能主治的探討［C］//浙江省中醫藥學會腫瘤分會， 浙江省抗癌協會中醫腫瘤專委會學術年會暨省級繼續教育學習班文集. 2013.

［4］馬晶晶. 高速離心剪切粉碎對靈芝孢子粉破壁及特性的影響［D］. 武漢: 武漢理工大學， 2006.

［5］王衛霄， 呂艷茹， 姚苗苗， 等. 靈芝孢子粉抗腫瘤活性的研究進展［J］.河北醫藥， 2015， 37（1）: 105-108.

［6］朱江， 梅躍明， 李玉龍， 等. 靈芝孢子粉的生產工藝研究［J］. 江西食品工業， 2006， 7（4）: 29.

［7］KUBOTA T， ASAKA Y， MIURA I， et al. Structures of ganoderic acid A and B， two new lanostane type bitter triterpenes from Ganoderma lucidum （FR.） KARST.［J］. Helvetica Chimica Acta， 1982， 65（2）: 611-619.

［8］曾祥麗， 包海鷹. 靈芝三萜類成分與藥理學研究進展［J］. 菌物研究，2004， 2（1）: 68-77.

［9］XU Junwei， ZHAO Wei， ZHONG Jianjiang. Biotechnological production and application of ganoderic acids［J］. Applied Microbiology and Biotechnology， 2010， 87（2）: 457-466.

［10］ 鮑琛， 李莉. 靈芝三萜對小鼠非酒精性脂肪肝的治療作用［J］. 中國現代應用藥學， 2014， 31（2）: 148-151.

［1 1］ WANG Jian， YANG Yuanshuai， WANG Gang， et al. A computational study on the anticancer mechanism of ganoderic acids［J］. Journ al of Shenyang Pharmaceutical University， 2012， 29（11）: 887-891.

［12］ LIN S B， LI C H， LEE S S， et al. Triterpene-enriched extracts from ganoderma lucidum inhibit growth of hepatoma cells via suppressing protein kinase C， activating mitogen-activated protein kinases and G2-Phase cell cycle arrest［J］. Life Science s， 2003， 72（21）: 2381-2390.

［13］ 黃秀旺， 張學鵬， 劉鋒， 等. 靈 芝三萜組分GLE誘導CNE2細胞凋亡與線粒體途徑的關系［J］. 中國醫院藥學雜志， 2014， 34（11）: 867-869.

3

14］ BOH B， BEROVIC M， ZHANG J， et al. Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds［J］. Biotechnology Annual Review，2007， 13（7）: 265-301.

15］ 劉曉珍， 聶少平， 李文娟， 等. 黑靈芝中性提取物三萜含量測定及抗氧化作用研究［J］. 南昌大學學報: 工科版， 2011， 33（4）: 332-337.

16］ 李承范. 野生與種植靈芝中靈芝酸和總黃酮的提取及其含量測定［J］.延邊大學學報: 自然科學版， 2013， 39（4）: 269-272.

17］ 弓曉峰， 謝明勇， 陳奕. 黑靈芝中三萜及其皂苷類化合物總量的光度測定［J］. 天然產 物研究與開發， 2006， 18（5）: 825-829.

18］ 徐紅艷， 劉富國， 于陽陽， 等. 東北山核桃仁油對D-半乳糖 衰老小鼠抗氧化能力的影響［J］. 食品科學， 2012， 33（7）: 266-269.

19］ 付麗麗， 李洪莉， 侯聚敏， 等. 超聲波協同纖維素酶法提取靈芝多糖的工藝研究［J］. 農業機械， 2012， 28（15）: 118-121.

20］ 岳金玫. 攀枝花塊菌多糖的提取、純化及抗氧化活性研究［D］. 雅安: 四川農業大學， 2012.

21］ 薩茹麗. 沙蔥黃酮提取工藝優化、結構鑒定及其相關生物活性研究［D］. 呼和浩特: 內蒙古農業大學， 2014.

［22］ ZHENG Yi， LI Yong， WANG Weidong. Optimization of ultrasonicassisted extraction and in vitro antioxidantactivities of polysaccharides from Trametes o rientalis［J］. Carbohydrate Polymers， 2014， 111: 315-323.

［23］ 孟繁磊， 陳瑞戰， 張敏， 等. 刺五加多糖的提取工藝及抗氧化活性研究［J］. 食品科學， 2010， 31（10）: 168-174.

［24］ 令博， 王捷， 吳洪斌， 等. 葡萄皮渣多酚超聲波輔助提取工藝響應面法優化及抗氧化活性研究［J］. 食品科學， 2011， 32（18）: 24-29.

［25］ 雷鳴， 朱祖健. D-半乳糖致衰老的研究進展［J］. 解剖科學進展， 2011，17（1）: 83-85.

［26］ 高璐， 王瀅， 饒勝其， 等. 葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用［J］. 食品科學， 2014， 35（23）: 253-256. doi: 10.7506/ spkx1002-6630-201423049.

［27］ 秦紅兵， 楊朝曄， 范憶江， 等. D-半乳糖誘導衰老小鼠模型的建立與評價［J］. 中國組 織工程研究與臨床康復， 2009， 13（7）: 1275-1278.

Optimized Extraction of Crude Ganoderic Acid from Ganoderma lucidum Spore and Antioxidant Effect in Vivo

LIU Qiao， GUAN Xiaohui， HUANG Cuiju， XIA Yan， SHEN Minghao*
（College of Food Science and Engineering， Jilin Agricultural University， Changchun130118， China）

The extraction of ganoderma acid （GA） from Ganoderma lucidum spore was explored by the combined use of cell wall disruption with laccase and ultrasonic-assisted extraction. Besides， this study also examined the antioxidant effect of GA in subacute senile mice induced by D-galactose. Methods: The extraction process was optimized through orthogonal array experiments. A subacute senile mouse model was established by continuous subcutaneous injection of D-galactose into the nape of the neck. Using ascorbic acid as positive control group， the mice in the high， moderate and low dose groups were given GA by gavage， while those in the blank and model control groups were given 0.5% CMC-Na by gavage. Body weights of these mice were measured once a week for six weeks. After the experimental period， total superoxide dismutase （T-SOD），the levels of malondialdehyde （MDA） in the serum， liver and brain of mice， the activities of glutathione peroxidase （GSHPx） in the serum and brain， and total antioxidant capacity （T-AOC） in the serum and liver were determined. Results: The optimal conditions for GA extraction were determined as follows: solid/liquid ratio， 1:60； enzyme concentration， 0.04 g/mL；ultrasonic time， 3 h； and number of ultrasonic treatments， 3. Under these conditions， the maximum yield of GA of 1.69% was obtained. Conclusions: The optimized extraction process is stable and feasible. The GA extracted from Ganoderma lucidum spore could obviously improve T-SOD and GSH-Px activities as well as T-AOC capacity and reduce MDA content in mice. Together， these results implied the obvious anti-aging effects of the GA on subacute senile mice induced by D-galactose.

laccase； ganoderic acid； D-galactose； aging； antioxidant effect

Q949.91

A

1002-6630（2015）24-0089-06

10.7506/spkx1002-6630-201524015

2015-04-24

劉喬（1992—），女，碩士研究生，研究方向為食品質量與安全評價。E-mail：liuq1216@163.com

沈明浩（1963—），男，教授，博士，研究方向為食品毒理與安全、胚胎毒理。E-mail：shenmh2003@163.com